青蒿琥酯对肝癌细胞生长的抑制作用及其机制

目的探讨青蒿琥酯(A RT)对肝癌细胞生长的抑制作用及其机制。方法以不同浓度青蒿琥酯作用肝癌SMMC-7721细胞24h,采用MTT法检测细胞生长抑制率(IC5 0)值。根据I C5 0值选取3个青蒿琥酯浓度(30、60、120μg/ml)进行后续实验。以不同浓度青蒿琥酯(0、30、60、120μg/ml)作用SM MC-7721细胞24h,0μg/ml青蒿琥酯以生理盐水代替青蒿琥酯作为对照组,分别命名为对照组、30μg/ml ART组、60μg/ml ART组、120μg/ml A RT组。倒置显微镜观察细胞形态;流式细胞术检测各组细胞周期、细胞凋亡、细胞线粒体膜电位及B c l-2和B a x蛋白表达水平。结果 MTT结果显示,青蒿琥酯对肝癌SMMC-7721细胞有生长抑制作用,且呈剂量依赖性,IC_(50)=60.27±1.51μg/ml。倒置显微镜下观察,青蒿琥酯作用24h后,SMMC-7721细胞中呈现不同程度的死亡细胞,且随着青蒿琥酯浓度增加,死亡破碎细胞也增加。30、60、120μg/ml ART组细胞凋亡率(分别为4.44%±0.32%、6.54%±0.84%、12.92%±1.22%)与对照组(2.15%±0.10%)相比明显增高(P<0.01)。30、60、120μg/ml ART组细胞周期G0/1期细胞数(分别为74.91%±0.69%、77.14%±1.39%、78.62%±0.55%)与对照组(70.60%±0.60%)相比明显增高(P<0.01),而30、60、120μg/ml ART组细胞增殖指数(PI)(分别为25.09%±0.69%、22.86%±1.39%、21.38%±0.55%)与对照组(29.40%±0.60%)相比明显降低(P<0.01)。30、60、120μg/ml ART组细胞线粒体膜电位(分别为244.36±3.27、229.51±4.74、173.17±6.93)与对照组(277.82±5.68)相比明显降低(P<0.01)。30、60、120μg/ml ART组细胞中Bcl-2蛋白表达(分别为220.86±7.76、195.64±9.23、148.32±8.19)与对照组(256.86±7.78)相比明显降低(P<0.01),而Bax蛋白表达(分别为214.22±2.01、231.54±6.16、260.96±11.38)与对照组(186.21±8.82)相比明显增高(P<0.01)。结论青蒿琥酯可抑制肝癌SMMC-7721细胞生长,其作用机制与诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞有关。

乳腺癌组织中syk基因的表达及其临床病理意义

目的探讨syk基因在人乳腺癌组织中及其乳腺癌细胞株中的表达及其生物学意义。方法采用荧光定量PCR方法和免疫组织化学方法分别检测乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、人乳腺癌癌组织和配对癌旁正常乳腺组织中sykmRNA与蛋白表达及其临床病理特征的关系。结果乳腺癌细胞株MCF-7中SYK蛋白表达为阳性;MDA-MB-231的SYK蛋白为阴性;乳腺癌组织、正常乳腺组织sykmRNA表达阳性率分别为63.3%(19/30)、93.3%(28/30)。乳腺癌癌组织sykmRNA的平均水平〔(6.17±0.0.65)×104〕明显低于配对的癌旁乳腺组织〔(80.37±0.125)×104〕(P<0.01)。SYK蛋白在乳腺癌、癌旁正常组织表达阳性率分别为60%(18/30)、90%(27/30)(P<0.01)。SYK表达下调与乳腺癌淋巴结转移和临床TNM分期显著相关(P<0.05),而与肿瘤的大小、病例分级、ER和PR状况无关(P>0.05)。结论SYK基因低表达或缺失与肿瘤的浸润、转移有关。

shRNA干扰PLCε1基因对人食管癌Eca109细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨沉默PLCε1基因对食管癌Eca109细胞增殖和细胞周期的影响及其可能的机制。方法 PLCε11、PLCε12和PLCε13质粒表达载体用于沉默PLCε1,通用阴性对照质粒表达载体HK作为对照。用阳离子脂质体进行转染,筛选出干扰效果最好的质粒表达载体(PLCε12)。实验分为Eca109组、HK组和PLCε12组。MTT检测细胞的存活率。FCM检测细胞周期,RT-PCR检测细胞P16、Cyclin D1基因mRNA表达。结果 HK、PLCε12质粒表达载体转染Eca109细胞后48和72 h,PLCε12组Eca109细胞的存活率分别为80.73%和75.88%,显著低于HK组(P<0.001)。Eca109细胞转染后24 h,PLCε12组处于S期的细胞比例明显低于HK组(P<0.01),细胞周期阻滞于G0/G1期。质粒表达载体转染Eca109细胞48 h后,PLCε12组Eca109细胞P16基因mRNA表达水平明显高于HK组(P<0.01)。结论沉默PLCε1基因可能通过上调Eca109细胞P16基因的表达,阻止细胞周期从G1期向S期的过渡,抑制Eca109细胞的增殖活性。

PLCε1基因多态性与食管癌遗传易感性的关联研究

目的:探讨PLCε1基因rs2274223 A/G单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)和rs11599672 T/G SNP与河北省磁县高发区人群食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)遗传易感性之间的关系。方法:采用聚合酶链反应-连接酶检测反应(polymerase chain reaction-ligase detection reaction,PCR-LDR)方法对527例ESCC患者和527例健康对照PLCε1基因rs2274223 A/G SNP和rs11599672 T/G SNP进行基因分型。结果:ESCC患者组上消化道肿瘤(upper gastrointestinal can-cer,UGIC)家族史阳性个体比例为48.6%,显著高于健康对照组(39.3%,χ2=9.25,P=0.002)。ESCC患者组及健康对照组PLCε1基因rs2274223 A/G SNP AA、AG、GG基因型频率分别为48.0%、43.9%、8.1%和57.1%、37.5%、5.4%。与AA基因型相比,携带AG、GG、AG/GG基因型可能增加ESCC的发病风险,经年龄、性别、吸烟状况、UGIC家族史校正后的OR值分别为1.41(95%CI=1.09~1.83)、1.71(95%CI=1.03~2.86)、1.45(95%CI=1.13~1.85)。PLCε1基因rs11599672 T/G SNP等位基因频率和基因型频率总体分布在ESCC患者组及健康对照组之间无显著性差异(P>0.05)。应用2LD软件对PLCε1基因rs2274223 A/G SNP和rs11599672 T/GSNP进行联合分析显示,两个多态性位点间不存在连锁不平衡现象(D'=0.11)。与最常见的AT单体型相比,GT单体型增加了ES-CC的发病风险(OR=1.36,95%CI=1.08~1.71)。结论:PLCε1基因rs2274223 A/G SNP可以作为高发区人群ESCC遗传易感性的标志物。UGIC家族史阳性个体、携带PLCε1基因rs2274223 A/G SNP AG、GG基因型的个体罹患ESCC的风险较高,应定期接受食管内镜检查,以便真正实现ESCC的早期诊断、早期治疗。

食管鳞状细胞癌相关miRNA的生物信息学分析

目的:应用生物信息学方法,分析食管鳞状细胞癌miRNA表达谱,筛选差异miRNA并预测其靶基因,分析其生物学功能。方法:下载GEO数据库食管鳞状细胞癌miRNA表达谱芯片数据GSE114110,应用GEO2R软件对数据进行处理分析,筛选差异表达miRNA;应用GEO数据库食管鳞状细胞癌miRNA表达谱芯片数据GSE97049、GSE59973、GSE55856、GSE43732对所筛选出的差异表达miRNA进行验证;应用miRNet预测其靶基因;采用DAVID进行生物功能富集分析;通过String、Cytoscape构建靶基因的蛋白-蛋白互作网络并筛选Hub基因,进一步构建miRNA-Hub gene网络;利用starBase在线分析工具分析Hub基因的表达情况。结果:分析GSE114110芯片数据共筛选出159个DE-miRNAs,在食管癌组织中表达上调的86个,下调的73个。预测上调幅度前三名和下调幅度前三名miRNA的靶基因1700个,它们参与癌症通路、黏着斑、p53信号通路等。在PPI网络中,靶基因连通度最高的前十名为Hub基因,如MAPK1等。通过构建miRNA-Hub gene网络,我们发现大部分Hub基因都可能被hsa-miR-196a-5p和hsa-miR-1调控。hsa-miR-1调控的7个靶基因CDC42、POLR2K、PIK3CA、POLR2I、HIST2H2AC、FN1、VEGFA的表达在ESCC组织中较正常组织明显上调,hsa-miR-1与靶基因之间存在着负相关关系。因此,显著上调的7个基因可能是下调hsa-miR-1的靶点。结论:通过生物信息学方法分析食管鳞癌组织和正常上皮组织的差异DE-miRNAs表达,最终筛选出2个差异显著的miRNA和7个关键的Hub基因为进一步研究食管鳞癌的分子标志物和分子机制提供指导。

基质金属蛋白酶基因多态性与慢性阻塞性肺疾病患病风险的Meta分析

目的:运用Meta分析的方法综合评价基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9)-1562C/T(rs3918242)基因多态性与慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)易感性的关系。方法:通过计算机检索Pub Med、EMBASE、FMJS和CNKI数据库,并结合文献追溯、手工检索等方法 ,收集所有符合纳入标准的病例对照研究。应用Meta分析合并MMP-9-1562C/T多态性与COPD易感性关系的OR值,并进行亚组分析、敏感性分析和文献的发表偏倚检验。结果:本次Meta分析共纳入13篇文献,累计病例2 295例,对照2 539例。结果显示,MMP-9-1562C/T多态性与COPD患病风险有关(显性遗传模型:OR=1.40,95%CI:1.03~1.91,P=0.03);按人种行亚组分析,结果表明MMP-9-1562C/T多态性可增加亚洲人COPD患病风险(显性遗传模型:OR=1.80,95%CI:1.04~3.11,P=0.04)。本研究所纳入的研究均可靠且没有发表偏倚。结论:本Meta分析结果表明,MMP-9-1562C/T多态性与COPD的易感性有关,并以显性遗传模型发挥作用。

凋亡相关基因FAS及其配体FASL基因多态性与贲门癌发病风险相关性研究

目的:探讨FAS基因-1377G/A、-670A/G和FASL基因-844T/C单核苷酸多态(SNP)与贲门腺癌(GCA)遗传易感性的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析方法检测244例GCA患者和244名健康对照的FAS基因-1377G/A、-670A/G和FASL基因-844T/CSNP的基因型。结果:对照组FAS基因-1377G/A、-670A/G和FASL基因-844T/CSNP基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。FAS基因-1377G/A和-670A/GSNP可能与GCA的发病风险无关。GCA患者组FASL基因-844T/CSNPT等位基因频率为26.4%,明显高于对照组的20.5%(χ2=4.80,P=0.03),但两组的基因型频率分布差异无统计学意义(P>0.05)。与FASL基因-844C/C基因型相比,携带C/T或T/T基因型显著增加贲门癌的发病风险(经性别、年龄和吸烟状况校正的OR=1.53,95%CI=1.06～2.21)。FAS基因-1377G/A、-670A/GSNP的单体型分布在GCA患者组和对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:FASL基因-844T/CSNPT等位基因型可能是GCA发病的潜在危险因素;而FAS基因-1377G/A、-670A/GSNP与GCA遗传易感性无明显相关。

沉默PLCε1基因对食管癌Eca109细胞凋亡和侵袭的影响及其作用机制

目的 :研究沉默磷脂酶Cε1(phospholipase C epsilon 1,PLCε1)基因对食管癌Eca109细胞凋亡和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 :采用阳离子脂质体法将构建有特异性针对PLCε1基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)表达载体(p Genesil-1-PLCε1-sh RNA1、p Genesil-1-PLCε1-sh RNA2和p Genesil-1-PLCε1-sh RNA3)转入Eca109细胞,并筛选出干扰效果最好的表达载体。分别采用FCM和Transwell小室法于PLCε1-sh RNA转染48 h后检测PLCε1基因沉默后对Eca109细胞凋亡和侵袭能力的影响。半定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测PLCε1基因沉默后Eca109细胞中自杀相关因子(factor-associated suicide,Fas)及其配体Fas L(Fas ligand)、CD44、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)m RNA表达的改变。结果 :PLCε1-sh RNA2对PLCε1基因的干扰效果最好。PLCε1-sh RNA2转入Eca109细胞48 h后,PLCε1-sh RNA2组Eca109细胞的凋亡率为(30.27±5.13)%,明显高于阴性对照组的(22.06±4.47)%(P<0.05);阴性对照组和PLCε1-sh RNA2组穿过Transwell小室聚碳酸酯膜的Eca109细胞数分别为(82.00±2.00)个和(62.67±3.06)个,PLCε1-sh RNA2组穿过Transwell小室膜的细胞数明显低于阴性对照组(P<0.05)。PLCε1-sh RNA2组Eca109细胞中Fas m RNA的表达水平较阴性对照组明显上调(P<0.05),而Fas L、MMP-9和VEGF m RNA的表达水平均较阴性对照组明显下调(P均<0.05),CD44 m RNA的表达水平未发生改变。结论:沉默PLCε1基因的表达可能通过上调Fas的表达和下调Fas L的表达而促进Eca109细胞的凋亡;并通过下调MMP-9和VEGF的表达抑制Eca109细胞的侵袭能力。

XPG基因多态性与贲门癌遗传易感性关系

目的 探讨着色性干皮病基因组G（XPG）rs751402 C/T与rs873601 G/A单核苷酸多态性（SNP）与河北省磁县高发区人群贲门腺癌（GCA）遗传易感性之间的关系。方法 采用聚合酶链反应-连接酶检测反应（PCR-LDR）方法对431例GCA患者和432名健康对照XPG基因rs751402 C/T和rs873601 G/A SNP进行基因分型。结果 XPG基因rs751402 C/T SNP T/T基因型增加了≤61岁年龄组个体GCA的发病风险（OR=1.77,95%CI=1.12~3.30）。XPG基因rs873601 G/A SNP与GCA的发病风险无关。结论 携带XPG基因rs751402 C/T SNP T/T基因型个体GCA的发病风险明显增加,应定期接受上消化道内镜检查,以便实现GCA的早诊早治。

13933例妇科门诊患者人乳头瘤病毒感染状况分析

目的探讨河北医科大学第四医院妇科门诊患者人乳头瘤病毒(HPV)感染情况及型别分布情况,为预防HPV感染和宫颈癌防治提供依据。方法采用核酸分子快速导流杂交技术对13 933例妇科门诊患者的宫颈细胞标本进行21种HPV亚型的基因检测,不同年龄组HPV感染率比较采用卡方检验。结果 13933例受检者中,HPV感染5 979例,感染率为42.9%。共计检出21种亚型,9 023例次HPV感染,其中HPV高危型7 823例次占86.7%,感染前三位分别为HPV-16、HPV-52、HPV-58;HPV低危型1 200例次占13.3%,感染前三位分别为HPV-CP8304、HPV-11、HPV-6;17~25岁和≥56岁年龄组HPV感染率相对较高,与其他年龄组比较差异有统计学意义。结论妇科门诊患者HPV感染率较高,且以高危型HPV感染为主,其中最常见的感染亚型是HPV-16、HPV-52、HPV-58。不同年龄组HPV感染率差异有统计学意义,17~25岁和≥56岁年龄组HPV感染率相对较高。

PLCε1基因rs2274223A〉G多态性与上消化道肿瘤遗传易感性的关系的meta分析

目的综合评价磷脂酶Cel（PLCε1）基因rs2274223A〉G多态性与上消化道肿瘤遗传易感性的关系。方法通过计算机检索PubMed数据库，并结合文献追溯、手工检索等方法收集所有符合纳入标准的病例对照研究。应用meta分析的方法合并rs2274223多态性与上消化道肿瘤易感性关系的优势比（OR）值，并进行亚组、敏感性、回归分析和文献发表偏倚检验。结果共纳入18篇文献（23项研究数据），其中食管癌16项，胃癌7项；累计患者组16938例，对照组16680例。PLCel基因rs2274223A〉G多态性与上消化道肿瘤发病风险有关；等位基因G较A可增加发病风险。共显性杂合子比较模型、共显性纯合子比较模型、显性遗传模型、隐性遗传模型、等位基因模型均可发挥作用，以共显性纯舍子基因模型为著，GG与AA比较差异有统计学意义[0R=1．37，95％可信区间（95％CI）：1．16～1．62，P=0．001]。PLCε1基因rs2274223A〉G多态性在以上5种基因模型中均显著增加食管鳞状细胞癌（ESCC）的发病风险。与之相反，PLCε1基因rs2274223A〉G多态与胃癌、食管腺癌的发病风险无关。rs2274223多态仅与中国人上消化道肿瘤的发病风险显著相关，与高加索人和其他亚洲人（包括北印度人和朝鲜族人）发病风险无关。结论PLCε1基因rs2274223A〉G多态性与上消化道肿瘤易感性显著相关，尤其是在中国人群及ESCC中。

IL-4基因启动子区rs2243250多态与牙周炎易感性的Meta分析

目的综合评价白细胞介素-4基因(IL-4)启动子区rs2243250多态(-590C>T)与牙周炎易感性的关系。方法搜集所有符合标准的病例-对照研究,运用Meta分析方法计算IL-4基因rs2243250多态与牙周炎易感性关系的OR值,并进行亚组分析、敏感性分析和文献的发表偏倚检验。结果本次Meta分析共纳入15篇文献(18个数据组),累计病例1698例,对照2247例。结果显示,IL-4基因rs2243250多态与牙周炎患病风险无关(显性遗传模型:OR=1.33[0.80,2.19],P=0.27;隐性遗传模型:OR=1.05[0.62,1.80],P=0.19)。按牙周炎类型行亚组分析,未发现IL-4基因rs2243250多态与侵袭性牙周炎或慢性牙周炎的患病风险相关;按人种及对照来源进行亚组分析,亦未发现该位点和牙周炎患病风险的关联。结论 IL-4基因rs2243250多态与牙周炎患病风险无关。