白藜芦醇对激素反应通路中组蛋白去乙酰化酶2及糖皮质激素受体的影响

目的:观察白藜芦醇对激素反应通路中组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)及糖皮质激素受体(GR)的影响,探讨白藜芦醇对香烟烟雾(CS)诱导的肺气肿小鼠可能的治疗作用。方法:选择C57BL/6小鼠作为研究对象,通过CS诱导建立模型(Model)组和白藜芦醇(Res)组,同时设立对照(Control)组平行比较,Res组给予200 mg/kg白藜芦醇灌胃,Model组和Control组根据体重给予等浓度DMSO灌胃。采用苏木精—伊红(HE)染色观察小鼠肺组织形态学的改变,Western blotting检测GR、HDAC2、磷酸化P65(P-P65)、磷酸化IKBα(PIKBα)蛋白在小鼠肺组织中的表达。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测肺组织中GR、HDAC2、白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的相对表达。此外,还研究了白藜芦醇对香烟烟雾提取液(CSE)刺激下人支气管上皮细胞株(BEAS-2B细胞)GR和HDAC2的表达。结果:肺气肿小鼠肺组织中GR和HDAC2表达较Control组减少(P<0.05,P<0.01),并且核因子(NF)-κB通路激活,IL-8、TNF-α炎症因子表达水平明显升高(P<0.0001,P<0.01)。白藜芦醇灌胃干预后肺气肿小鼠肺组织中肺泡炎症评分降低(P<0.001),白藜芦醇在体内和体外均可提高GR、HDAC2的表达(体内P<0.05,P<0.01;体外P<0.01,P<0.05),NF-κB通路受到抑制,IL-8、TNF-α炎症因子表达水平降低(P<0.0001,P<0.05)。结论:白藜芦醇能抑制CS暴露诱导的肺气肿小鼠肺部炎症反应,作用机制可能通过与GR结合,影响下游HDAC2的表达从而抑制NF-KB通路活化有关。

组蛋白去乙酰化酶9在香烟烟雾暴露所致肺气肿小鼠中的作用

目的:观察组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)在香烟烟雾暴露所致肺气肿小鼠中的作用。方法:HDAC9^(-/-)C57BL/6与野生型小鼠各20只,随机等分为4组,即:HDAC9^(-/-)对照组、HDAC9^(-/-)烟熏组与野生型对照组、野生型烟熏组;烟熏组小鼠香烟烟熏24周建立肺气肿模型,HE染色观察小鼠肺组织病理学改变;免疫磁珠分选CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测Treg细胞中HDAC9 mRNA相对表达量;免疫组化法检测小鼠肺组织内叉头状转录因子p3(Foxp3)蛋白表达量,RT-qPCR法检测肺组织白介素-1β(IL-1β)mRNA表达水平。结果:野生型对照组与HDAC9^(-/-)对照组肺泡结构正常,无炎症细胞浸润;野生型烟熏组气道壁和肺泡间隔可见炎细胞增多,肺泡壁断裂明显,肺泡腔扩大;HDAC9^(-/-)烟熏组肺泡间隔部分断裂,但较野生型烟熏组减轻,未见明显炎细胞浸润。与野生型对照组比较,野生型烟熏组Treg细胞中HDAC9 mRNA表达增多(P<0.01)。与野生型对照组比较,野生型烟熏组肺组织中Foxp3表达减少,HDAC9^(-/-)对照组Foxp3表达增多(P<0.01);与HDAC9^(-/-)对照组比较,HDAC9^(-/-)烟熏组Foxp3表达减少(P<0.01);与野生型烟熏组比较,HDAC9^(-/-)烟熏组Foxp3表达增多(P<0.01)。与野生型对照组比较,野生型烟熏组肺组织中IL-1βmRNA的表达量增高(P<0.01);与野生型烟熏组比较,HDAC9^(-/-)烟熏组肺组织中IL-1βmRNA的表达量降低(P<0.01)。结论:香烟烟雾暴露下,HDAC9基因缺失小鼠肺内Foxp3表达增多、IL-1β炎症介质表达减少,提示HDAC9^(-/-)小鼠体内Treg细胞功能增强,可能与肺气肿病情减轻有关。

香烟烟雾提取物抑制小鼠骨骼肌细胞再生的机制研究

目的:研究香烟烟雾提取物(CSE)影响小鼠骨骼肌细胞生成的机制。方法:用2%马血清诱导C2C12成肌细胞分化成骨骼肌细胞复制体外骨骼肌再生模型,实验分为正常(N)组(不加任何干预培养6 d)和CSE组(加入终浓度为0.2%CSE,隔2 d换液并加CSE)。通过细胞免疫荧光法检测骨骼肌细胞标志物MyHC蛋白表达,以鉴定C2C12成肌细胞是否分化形成骨骼肌细胞。Western blotting法检测MyHC和分化指标MyoD、Myogenin以及衰老因子P53、P21、P16蛋白表达,实时荧光定量PCR(q PCR)法检测I型肌纤维MyHC7 mRNA和II型肌纤维MyHC4 mRNA表达。结果:免疫荧光显示C2C12成肌细胞分化6 d后其细胞质被染成红色,成功分化为骨骼肌细胞。与N组比较,CSE组MyHC蛋白及MyHC4 mRNA、MyHC7 mRNA水平下降,MyoD、Myogenin蛋白表达量降低,P53、P21、P16蛋白表达量升高。结论:CSE抑制小鼠骨骼肌细胞再生,其机制可能与肌细胞分化能力减弱、激活P53途径诱导细胞衰老有关。