砷暴露与人外周血白细胞组蛋白H2A和H2B泛素化关系的研究

目的观察砷暴露人群外周血白细胞组蛋白H2AK119泛素化（H2AK119ubiquitination，H2AK119ub）和H2BK120泛素化（H2BK120ub）修饰水平，分析砷暴露与组蛋白H2AK119ub、H2BK120ub水平的关系。方法以山西省和吉林省饮水型地方性砷中毒典型病区为调查地点，选择饮水年限为10年及以上的281名当地常住居民作为调查对象。将受检人群按照饮水砷含量分为对照组（水砷含量〈0．01mg／L）、低水砷暴露组（水砷含量范围为0．01～0．05mg／L）、中水砷暴露组（水砷含量范围为〉0．05～0．10mg／L）、高水砷暴露组（水砷含量〉0．10mg／L）。其中对照组60人（男性20人、女性40人），低水砷暴露组61人（男性27人、女性34人），中水砷暴露组50人（男性17人、女性33人），高水砷暴露组110人（男性40人、女性70人）。采集受检人群所饮用的水样和即时尿样，采用原子荧光法检测水砷和尿砷含量；同时，采集外周静脉血并提取白细胞组蛋白，采用斑点杂交法检测组蛋白H2AK119ub和H2BK120ub水平。水砷、尿砷、水砷累积暴露量、H2AK119ub、H2BK120ub水平以中位数和四分位数[M（如，如）]表示。结果对照组，低、中、高水砷暴露组研究对象的年龄、体质指数（bodymassindex，BMI）、性别、吸烟、饮酒情况比较，差异无统计学意义（x^2=3．780、3．572、1．938、4．937、6．025，P均〉0．05）。对照组，低、中、高水砷暴露组水砷含量[0．005（0．003，0．006）、0．024（0．017，0．037）、0．076（0．057，0．084）、0．150（0．124，0．185）mg／L]、尿砷含量[0．011（0．006，0．017）、0．018（0．004，0．072）、0．061（0．032，0．124）、0．134（0．069，0．223）mg／L]、水砷累积暴露量[0．342（0．248，0．477）、1．641（1．012，2．324）、5．273（3．690，7．036）、7．716（5．608，12．053）mg]比较，差异有统计学差异（Hc=256．041、88．615、218．610，P均〈0．01）。对照组，低、中、高水砷暴露组人群外周血白细胞中H2AK119ub[1．231（0．856，1．817）、1．244（0．792，1．884）、1．376（0．743，1．981）、1．390（0．906，2．045）]、H2BK120ub[0．350（0．186，0．589）、0．363（0．152，0．678）、0．428（0．134，0．788）、0．276（0．146，0．453）]水平比较，差异无统计学意义（Hc=2．130、4．330，P均〉0．05）。H2AK119ub水平与水砷含量、水砷累计暴露量均无相关性（r=0．104、-0．008，P均〉0．05），与尿砷含量呈正相关（r=0．166，P〈0．05）。H2BK120ub水平与水砷含量、水砷累积暴露量均呈负相关（r=-0．183、-0．159，P均〈0．05），与尿砷含量无相关性（r=-0．101，P〉0．05）。H2AK119ub水平与H2BK120ub水平呈负相关（r=-0．127，P〈0．05）。结论砷外暴露可能改变人群外周血白细胞中H2BK120ub水平。

水中氟离子检测方法的研究进展

水氟污染是一种比较严重的公共卫生问题,饮水中氟离子(F-)检测是评价水中氟污染情况以及治理效果的重要指标。目前,检测水中F-的方法主要有氟试剂分光光度法、离子选择电极法、离子色谱法、锆盐茜素比色法。本文简要综述这几种常用检测方法的原理、检出限、影响因素、存在的优缺点等,并针对现阶段对水中F-检测的需求提出了改进的方向。

依据2005 - 2014年全国饮水型砷中毒病区尿砷数据分析人群尿砷安全指导值

目的 研究人群尿砷安全指导值，用以评价人群的砷暴露水平，为地方性砷中毒病区防治措施落实效果评价提供依据。方法 利用2005 - 2014年全国饮水型砷中毒病区高砷水源筛查以及改水工程质量监督检测数据资料、全国地方性砷中毒病区砷中毒普查数据资料、地方性砷中毒监测数据资料，筛选出个人信息资料详实、水砷暴露资料完整、尿砷检测资料准确的人群作为研究对象，共10 722人。其中，利用2013、2014年4 501人的调查数据进行尿砷与水砷相关关系分析，并以水砷暴露剂量在（0.050 ± 0.005）mg／L范围内的人群为研究对象，确定该人群的尿砷几何均数，将该几何均数作为安全指导值。利用2005 - 2012年6 221人的资料进行安全指导值验证，每次抽取2 000人作为验证样本，使用受试者工作特征曲线（ROC）下面积（AUC）判定该指标对于区分水砷暴露是否超标的灵敏度和特异度，共计进行10次抽样验证。结果 水砷≤0.01 mg／L时，水砷与尿砷的相关系数（r）为0.097（P 〈 0.01）；水砷 〉 0.01 - 0.05 mg／L时，尿砷与水砷的r值为0.456（P 〈 0.01）；水砷 〉 0.05 mg／L时，水砷与尿砷的r值为0.630（P 〈 0.01）。随着水砷的含量升高尿砷显著增加，且差异有统计学意义（χ2 = 2 337.956，P 〈 0.01）。水砷在（0.050 ± 0.005）mg／L范围内，人群尿砷几何均数为0.032 mg／L。以人群尿砷几何均数为0.032 mg／L为安全指导值，10次抽样验证的AUC值均 〉 0.94，能准确判定该人群的水砷暴露水平是否超过0.05 mg／L且灵敏度和特异度达到0.898、0.844。结论 人群尿砷几何均数为0.032 mg／L可以作为人群尿砷安全指导值。当人群尿砷几何均数超过该指标时，可提示该人群有较高的砷暴露风险。

胚胎期氟暴露对斑马鱼骨骼发育的影响

目的研究胚胎期氟暴露对斑马鱼骨骼发育的影响。方法将受精3d（3days post fertilization，3dpf）的斑马鱼胚胎暴露于常规养鱼水（对照组，氟离子含量〈0．2mg／L）和含25、50、100mg／L氟化钠（NaF）的养鱼水中，28cc培养5d（8dpf）至斑马鱼头部骨骼形成，用氟离子选择电极法检测斑马鱼胚胎整体氟含量。重新制作氟暴露模型，分别为对照（0．0mg／L）组，低剂量暴露（0．5、1．0、4．0mg／L）组和高剂量暴露（50．0、100．0mg／L）组，计算各组斑马鱼胚胎存活率；在40倍胚胎镜下观察斑马鱼胚胎大体形态；采用茜素红染色法对斑马鱼骨骼进行染色，显微镜下观察、数码成像后定量检测骨骼染色区域面积及累积光密度（IOD），用于分析骨质硬化和骨质疏松情况。结果对照组，25、50、100mg／L染氟组斑马鱼胚胎整体氟含量分别为（0．32±0．01）、（0．63±0．01）、（0．86±0．02）、（1．21±0．01）μg／150条。与对照组比较，各染氟组斑马鱼胚胎整体氟含量明显增加（P均〈0．05），且有一定的剂量反应关系。重新制作氟暴露模型后，对照组和各染氟组的斑马鱼胚胎存活率分别为96．67％、96．67％、96．67％、98．33％、98．33％和98-33％，组间比较差异无统计学意义（x2=7．309，P〉0．05）；胚胎镜下各染氟组斑马鱼胚胎脊柱均未出现明显畸形；斑马鱼颅骨茜素红染色面积对照组为84380．51±11711．41．低剂量暴露（0．5、1．0、4．0mg／L）组为92592．16±7143．81、92164．85±10136．18和95112．26±13721．91，均高于对照组（P均〈0．05），高剂量暴露（50．0、100．0mg／L）组为67778．92±8597．11和64272．93±9302．57，均低于对照组（P均〈0．05）；斑马鱼颅骨茜素红染色IOD对照组为25094．13±6571．86，低剂量暴露（0．5、1．0、4．0mg／L）组为29754．95±3836．45、28747．36±4677．86和30776．49±5589．63，高于对照组（P均〈0．05），高剂量暴露（50．0、100．0mg／L）组为19263．10±4754．72和18202．58±4897．15，低于对照组（P均〈0．05）。结论低剂量氟暴露使斑马鱼胚胎骨质硬化，高剂量氟暴露使斑马鱼胚胎骨质疏松。

基于酶标仪的高通量快速水氟含量检测方法的建立与评价

目的研究和建立一种基于96孔板-酶标仪的水中氟离子含量的高通量快速检测方法(简称本方法),并对其进行性能评价。方法根据氟离子与氟试剂及硝酸镧反应生成蓝色三元络合物的原理,络合物在650 nm波长处的吸光度值与氟离子浓度成正比,利用酶标仪定量测定水样中的氟离子含量。通过检测加标回收率、标准物质等方法评价本方法的准确度、精确度和检测限。结果本方法标准曲线线性相关系数>0.999;准确度实验中不同氟浓度的加标回收率在99.00%~103.33%,平均回收率为101.08%;标准物质法中,测定值均在标准溶液的标定值范围内;精密度实验中不同氟浓度水样的相对标准偏差均≤10%;检测限为0.06 mg/L。结论本方法检测结果的准确度、精密度均较好,检测限低,样本用量少,可极大提高检测工作效率。

饮水砷暴露与人外周血白细胞组蛋白H3K4me3、H3K79me3关系的探讨

目的 观察饮水砷暴露对人群外周血白细胞中组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化（H3K4me3）和H3第79位赖氨酸三甲基化（H3K79me3）修饰水平的影响，分析砷暴露与H3K4me3和H3K79me3修饰水平的关系。方法 采用整群抽样的调查方法，在山西省和吉林省饮水型地方性砷中毒典型病区开展现场调查，选择饮水年限≥10年的当地常住居民281人作为调查对象。受检人群按照饮用水砷含量分为对照组（水砷含量≤0.01 mg／L，60例）、低水砷暴露组（ 〉 0.01- 0.05 mg／L，61例）、中水砷暴露组（ 〉 0.05 - 0.10 mg／L，50例）、高水砷暴露组（ 〉 0.10 mg／L，110例）。采集调查对象的饮用水样、即时尿样和外周血样。采用原子荧光法检测饮水砷含量和尿砷含量；斑点杂交方法（Dot Blotting）检测外周血白细胞中组蛋白H3K4me3和H3K79me3的修饰水平。结果 对照组，低、中、高水砷暴露组间年龄（61.50、60.00、59.50、59.50岁）、性别（男：20、27、17、40例，女：40、34、33、70例）、体质指数（BMI）、吸烟及饮酒情况比较，差异无统计学意义（P均 〉 0.05）。对照组，低、中、高水砷暴露组水砷含量中位数分别为0.005、0.024、0.076、0.150 mg／L；尿砷含量中位数分别为0.011、0.018、0.061、0.134 mg／L；水砷累积暴露量中位数分别为0.342、1.641、5.273、7.716 mg，组间比较差异有统计学意义（H = 256.041、88.615、218.610，P均 〈 0.01）。对照组，低、中、高水砷暴露组人群外周血白细胞中H3K4me3（0.100、0.059、0.083、0.083）、H3K79me3（0.049、0.036、0.055、0.052）修饰水平比较，差异无统计学意义（H = 1.488、2.097，P均 〉 0.05）。外周血白细胞H3K4me3、H3K79me3修饰水平与水砷含量、尿砷含量、水砷累积暴露量呈正相关关系（r = 0.245、0.221，0.299、0.318，0.149、0.149，P 〈 0.01或 〈 0.05）；H3K4me3与H3K79me3修饰水平之间呈正相关关系（r = 0.811，P 〈 0.01）。结论 饮水砷暴露虽然与人群外周血白细胞中H3K4me3和H3K79me3修饰水平存在正相关关系，但仍需扩大样本量进一步研究。

成纤维细胞生长因子23在氟中毒小鼠骨组织中的表达

目的 观察氟对小鼠骨组织中成纤维细胞生长因子23（FGF23）的影响，探讨FGF23在氟致小鼠骨相损伤中的作用。方法 64只Balb／c小鼠，雌雄各半，按体质量采用随机数字表法分成4组，每组16只。对照组、低氟组、中氟组、高氟组分别给予含0、25、50、100 mg／L氟离子的蒸馏水，3个月后处死，观察小鼠氟斑牙患病情况。用氟离子选择电极法测脊椎骨骨氟含量，微量酶标仪法测血清中钙、磷含量，酶联免疫吸附法测血清中FGF23、甲状旁腺素（PTH）、1，25二羟基维生素D3［1，25（OH）2D3］含量；免疫组织化学法、蛋白免疫印迹法（Western blot）分别测骨组织中FGF23蛋白表达水平。结果 低、中、高氟组小鼠氟斑牙检出率分别为75%（4／16）、100%（16／16）、100%（16／16），与对照组［0（0／16）］比较，差异均有统计学意义（P均 〈 0.05）。各染氟组骨氟水平［低、中、高氟组：（1 730.86 ± 165.90）、（2 400.58 ± 286.65）、（3 980.88 ± 511.65）mg／kg］均高于对照组［（854.30 ± 89.05）mg／kg，P均 〈 0.01］。血清中钙含量组间比较差异无统计学意义（F = 0.05, P 〉 0.05），中、高氟组血清中磷含量［（2.46 ± 0.32）、（2.48 ± 0.73）mmol／L］与对照组、低氟组［（2.89 ± 0.45）、（3.25 ± 0.69）mmol／L］比较明显降低（P均 〈 0.05）。血清中PTH、1，25（OH）2D3含量均呈现先升高后降低的趋势；中、高氟组FGF23的表达［（660.84 ± 64.18）、（638.74 ± 121.23）ng／L］与对照组［（613.53 ± 98.18）ng／L］比较有升高趋势。免疫组化结果显示，在皮质骨中FGF23蛋白表达水平随染氟剂量增加逐渐升高。Western blot结果显示，小鼠骨组织中FGF23蛋白含量在各染氟组中均明显增加，且低氟组（1.58 ± 0.46）、中氟组（1.40 ± 0.41）与对照组（1.00 ± 0.41）比较，差异均有统计学意义（P均 〈 0.05）。结论 氟中毒小鼠血清中磷、FGF23、PTH、1，25（OH）2D3含量及骨组织中FGF23蛋白表达水平均有变化，提示FGF23可能通过与PTH、1，25（OH）2D3相互作用，影响体内钙磷代谢水平而参与氟骨症的形成。

过氧化物酶体增殖激活受体γ基因 Rs1801282位点与饮茶型氟骨症的关系

目的探讨过氧化物酶体增殖激活受体1（PPART）基因Rs1801282位点单核苷酸多态性（SNP）与饮茶型氟骨症的关系。方法2012、2013年，采用横断面研究在内蒙古、青海、新疆16个典型饮茶型氟中毒病区，选取现场拍摄X线片进行氟骨症诊断的〉18岁成人作为调查对象，进行问卷调查，内容包括一般情况、日均砖茶水摄入量。采集调查对象的饮用茶水样品和尿样，采用离子选择电极法（ws／T89．2006）进行砖茶氟和尿氟含量测定；采用X线扫描进行氟骨症诊断，根据《地方性氟骨症诊断标准》（WS／T192．2007）将受检人群分为氟骨症组（病例组）和非氟骨症组（对照组）。采集静脉血5ml，提取全血DNA，采用MassARRAY时间飞行质谱生物芯片系统进行PPARl基因Rs1801282位点多态性检测，计算比值比（OR）和95％可信区间（CI）。结果纳入本次分析共1414人，其中病例组347人，对照组1067人。经Hardy—Weinberg平衡检验，PPARy基因Rsl801282位点在病例组和对照组人群及各民族中均达到遗传平衡（p均〉0．05）。PPAR7基因Rsl801282位点基因多态与饮茶型氟骨症无明显关联（OR值为0．991、95％CI：0．704—1．395。调整OR值为1．026、95％CI：0．707～1．489）。不同民族病例组和对照组人群PPARl基因Rsl801282位点基因型（CC、CG＋GG）经二元Logistic回归分析，差异无统计学意义（藏族：OR值为1．400、95％CI：0．576～3．404，调整OR值为1．258、95％CI：0．474～3．340；哈萨克族：OR值为0．898、95％CI：0．516。1．562，调整OR值为0．936、95％CI：0．532～1．648；蒙古族：OR值为1．148、95％CI：0．508—2．594，调整OR值为1．644、95％CI：0．683～3．956；汉族：OR值为1．058、95％CI：O．451～2．482，调整OR值为0．959、95％CI：0．388—2．371；俄罗斯族：OR值为O．000、95％CI：O．000～0．000，调整OR值为0．000、95％CI：O．Ooo一0．000）。结论PPARl，基因Rsl801282位点SNP与我国饮茶型氟骨症不存在风险关联。