不同方法检测鸡白痢沙门氏菌抗体消长规律的比较研究

为比较不同方法检测鸡白痢沙门氏菌抗体消长的规律,以便为种鸡场净化提供科学指导,本研究以鸡白痢沙门氏菌活菌和灭活免疫原分别接种SPF鸡,采用平板凝集、微量凝集和ELISA试验定期检测血清中的特异性抗体,并以Kappa检验判定不同检测方法之间的一致性程度。结果显示,平板凝集试验在接种后检出抗体阳转的时间早于ELISA,但ELISA检出抗体阳性的持续时间更长,且更符合抗体消长规律;3种检测方法的结果之间仅具有微弱一致性(Kappa系数为0.002~0.295)。本研究结果表明,不同鸡白痢沙门氏菌抗体检测方法之间存在较大差异,但从总体来看,ELISA无假阳性干扰,检出抗体的持续时间较长,更符合抗体消长规律,在单一鸡白痢沙门氏菌感染的情况下,更有利于种鸡场对该病进行净化。

中国部分地区鸭、鹅携带四种病毒状况的调查与分析

为了解中国部分地区鸭、鹅的病毒携带情况,作者于2014年11月,从安徽、浙江、福建、广东、广西5省的多个表观健康鸭、鹅群中采集样品1 931份,采用荧光定量PCR对鸭瘟病毒(DPV)、鸭甲型肝炎病毒1型(DHAV-1)、小鹅瘟病毒(GPV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)进行检测。结果显示,DTMUV阳性率为1.2%,DPV阳性率为0.3%;其余两种病毒均未检出。结果表明,临床表观健康的鸭、鹅可携带鸭坦布苏病毒和鸭瘟病毒,而且,序列分析结果显示,所携带的毒株与临床分离的相应致病性毒株相似性较高,提示在水禽疫病传播过程中,表观健康但带毒的动物可能成为疫病传播的风险点。

种鸡场沙门菌血清学与病原学监测结果比较与分析

为了解种鸡场鸡白痢抗体与携带沙门菌之间的相关性,以便选择合适的检测方法用于种禽场疫病净化,本研究在全国种鸡养殖重点区域内选择12个种鸡场,随机采集血清、泄殖腔拭子和盲肠样品进行鸡白痢抗体检测和沙门菌的分离鉴定。结果显示,检出抗体阳性的种鸡场共9个,而分离到沙门菌的种鸡场仅有5个;同时,检测发现部分种禽场抗体检测结果为阴性但病原检测为阳性。上述结果表明,抗体阳性率与病原阳性率并不一致,提示种鸡场在进行相关疫病净化时,应综合考虑血清学和病原学检测结果,防止出现因漏检而造成全群污染的情况发生。

实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测鸭坦布苏病毒方法的建立及初步应用

研究旨在建立一种适用于鸭坦布苏病毒检测的荧光定量Taq Man RT-PCR技术。以JXSP株RNA为模板,建立检测鸭坦布苏病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。制备含有上述目的片段的RNA作为标准品,10倍比稀释后建立标准曲线,测定敏感性。同时采用标准品对该方法的批内和批间重复性进行检测,并与本实验室所保存的多种病毒进行特异性检测。结果:建立的荧光定量Taq Man RT-PCR方法能在鸭坦布苏病毒JXSP株RNA样本中检出荧光信号。最低检出量为2.06×10~1拷贝/反应;线性范围达9个数量级。该方法重复性良好,批内变异系数不足0.4%;批间变异系数不足2.2%。该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,经体外感染细胞培养物及临床样品检测证实,该方法可实时反映病毒液中的病毒含量,可在获得样品后3 h以内得到检测结果,可用于临床样品中鸭坦布苏病毒的快速检测。

鸡白痢/禽伤寒沙门菌抗体检测试剂的比较与评估

对市面上现有鸡白痢／禽伤寒沙门菌抗体平板凝集检测试剂及其不同批次，微量凝集检测试剂和ELISA共4种检测试剂进行比较与评估。用4种试剂以及试剂A的不同批次检测来自11个种鸡场的1650份血清，计算不同试剂检测种鸡场的抗体阳性率，2种试剂之间的阳性符合率、阴性符合率和总符合率，并以Kappa检验判断不同检测方法及其试剂之间的一致性程度。平板凝集试剂A的不同批次间以及平板凝集试剂A和B之间具有高度一致性（Kappa系数-0．714～0．746），但阳性符合率不足80％。平板凝集试剂A、微量凝集试剂C、ELISA试剂D之间仅具有中度或弱一致性（Kappa系数-0．392～0．542）。不同鸡白痢／禽伤寒沙门菌抗体检测试剂间存在差异，平板凝集试剂不同批次间也存在差异，提示试剂生产厂家应加强质量控制，同时研发敏感性、特异性、稳定性更好的替代试剂，而种鸡场在进行抗体监测时应固定使用1种检测试剂，避免影响检测结果的准确性和连续性。

祖代种鸡场主要疫病监测与净化对策

为掌握祖代种鸡场主要疫病流行状况,提供制定种鸡疫病净化政策的科学依据,中国动物疫病预防控制中心对祖代以上(含曾祖代、原种)种鸡场开展了禽流感、禽白血病和鸡白痢等疫病的监测。通过明确监测病种、监测范围、监测数量和监测方法,经过持续5年的监测,摸清了我国祖代以上种鸡场禽流感和垂直传播疫病的感染情况,推动种鸡场开展禽流感和垂直传播疫病的监测净化。监测结果显示:当前我国祖代种鸡场禽流感抗体免疫合格率在95%以上。禽白血病病毒(ALV)p27抗原和ALV-J亚群抗体的个体阳性率在2%以下,ALV-A/B亚群抗体除2013和2014年较高之外,其他年份个体阳性率在2%左右。部分祖代种鸡场实现了禽白血病的净化,获得了净化示范场的认证。祖代蛋种鸡场鸡白痢抗体阳性率2011—2014年逐年下降,并一直保持较低水平(低于1%),但2015年有升高的趋势。在此基础上,对祖代种鸡场疫病净化状况持续跟踪,深入了解种鸡场疫病净化的动力及存在问题,提出对策建议,以期促进种源净化工作的深入开展。