自制仪器对促进教学改革的作用

阐述了自制仪器的特点和应用,探讨自制仪器在改善实验教学条件、提高学生、技术人员和教师的科研、教学水平、加强实验室建设等方面的作用。

白花丹地上部分的化学成分研究

目的：研究白花丹地上部分的抗氧化活性成分。方法：利用硅胶柱层析、中压柱层析（RP C18色谱柱）、制备型HPLC（RP C18色谱柱）等色谱技术对白花丹地上部分乙醇提取部位的化学成分进行分离纯化。通过ESIMS、UV、1H-NMR、13C-NMR等波谱学手段结合文献调研对所分离得到的化学成分进行结构测定。采用清除ABTS＋自由基法对所得到的单体化合物进行抗氧化活性评价。结果：从白花丹地上部分中共分离鉴定了11个化合物,分别为：反-异柿萘醇酮-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（1）、tachioside（2）、2,6-二甲氧基-对苯二酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3）、3-（β-D-吡喃葡萄糖基）-4-甲氧基苯甲酸（4）、3＇-O-β-D-吡喃葡萄糖基-白花丹酸（5）、3＇-O-β-D-吡喃葡萄糖基-白花丹酸甲酯（6）、白花丹酸（7）、plumbagine A（8）、plumbagine C（9）、丁香酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（10）、2-甲基-5-羟基色原酮（11）。抗氧化活性评价显示化合物2、3、5具有较为显著的ABTS＋自由基清除能力。结论：其中,化合物1～4、10、11为首次从该植物中分离得到;化合物2、3、5具有显著的抗氧化活性。

壮药排钱草根的抗肝纤维化成分研究

目的：对壮药排钱草根进行抗肝纤维化活性成分研究。方法：通过多种色谱技术结合光谱学手段对排钱草根中的化学成分进行分离与结构鉴定。利用乙醛诱导的小鼠肝星状细胞（HSC-T6）增殖模型对所得到的化合物进行抗肝纤维化活性评价。结果：从排钱草根中分离鉴定了10个化合物,分别为：3,5,2＇,4＇-tetrahydroxy-2″,2″-dimethylpyrano-[5″,6″,7,8]-flavanone（1）、异柠檬酚（2）、citflavanone（3）、8-prenylated 5,7,3＇,4＇-tetrahydroxy flavanone（4）、pulchelstyrene A（5）、pulchelstyrene B（6）、pulchelstyrene D（7）、3-indolcarbaldehyde（8）、3-methoxyindole（9）、对羟基苯甲酸（10）。结论：其中,化合物1-4、8-10为首次从该植物中分离得到。体外活性评价结果显示化合物2、4-6对乙醛诱导的小鼠肝星状细胞增殖具有一定的抑制作用。

双花百合片对人体CYP450代谢酶的抑制作用研究

目的:考察双花百合片对人肝微粒体中7种细胞色素P450(CYP450)亚型酶的体外抑制作用,预测临床发生药物代谢性相互作用的可能性,为人体体内实验以及临床合理用药提供一定的科学指导。方法:分别以特异性探针作为底物,在人肝微粒体代谢体系中,考察双花百合片的化学成分对CYP1A2、CYP3A、CYP2A6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6及CYP2E1活性的影响。通过LC-MS测定各代谢物生成量,使用Origin75、Graphpad Prism6等软件计算出代谢酶的残余活性、IC50及Ki等数据,判断双花百合片对代谢酶的抑制作用。结果:多个化学成分对CYP450显示了抑制效应。表小檗碱对7种CYP450亚型酶都显示了强烈的的抑制作用,IC50分别为8.4、7.9、8.8、11、14、14、12μmol/L。表小檗碱对CYP3A和CYP2C9的Ki分别为6.4和8.6μmol/L。结论:患者服用双花百合片可能会引起因抑制CYP450酶产生的副作用。因此双花百合片与CYP450酶的底物联合使用时,应注意可能因代谢引起的相互作用,减少不良反应。

基于液质联用技术研究锦红汤的化学成分及潜在靶点蛋白的预测

目的中药复方锦红汤由蒲公英[Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.(Taraxacum)]、大黄[RheumofficinaleBaill.(RheiRhizome)]、大血藤[Sargentodoxacuneata(Oliv.)Rehd.etWils.(Sargentodoxaceae)]三味中药组成,具有清热解毒、活血消痈的功效,临床上对感染性炎症方面的疾病具有显著治疗作用。本研究旨在揭示复方锦红汤中关键的药效物质基础和作用机制。方法首先基于液质联用的方法鉴定锦红汤及复方内各单味药的化学成分,进行初步分析。然后通过TCMSP数据库、STRING和Cytoscape平台对主要活性成分潜在作用的靶基因进行筛选和预测,最后运用AutoDockVina和PyMol软件对锦红汤中的关键活性成分与靶点蛋白质相互作用中的核心蛋白进行分子对接验证,并最终生成分子对接模型图。采用Zorbax Eclipse C_(18)色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm);以0.1%甲酸水溶液(A)和纯乙腈(B)为流动相,梯度洗脱;采用正、负离子同时检测模式整理数据并结合相关文献报道对锦红汤中成分进行初步分析。结果共分离与鉴定出锦红汤中43个化合物,其中来自大黄的化学成分最多。主要成分类型包括羧酸类、苯类和黄酮类化合物为主。并进一步发现锦红汤治疗疾病的靶点主要与调节免疫、细胞增殖和凋亡以及炎症相关。结论液质联用的方法可以准确、快速鉴定出锦红汤中主要化学成分,预测出主要活性成分可能作用的靶基因,预测其互相干预使锦红汤发挥其药理作用。本实验也为锦红汤治疗疾病提供了理论基础。

中西医结合实验教学的探索与思考

在习总书记倡导的“中西医并重”精神下,中西医结合稳步发展,在很多领域取得了显著成果,但是发展过程中暴露出许多重大的困难和局限,尤其是顶尖科研人才的匮乏。为了中西医结合发展,注重本科实验教学、推动中西医结合实验教学改革已成为必然趋势。

HPLC-MS/MS同时测定双花百合片中6种成分含量

目的：建立HPLC-MS/MS同时测定双花百合片中小檗碱、表小檗碱、药根碱、巴马汀、黄连碱、绿原酸含量的方法。方法：采用Agilent ZORBAX Extend-C_（18）（100 mm×2.1 mm,3.5μm）色谱柱;流动相为乙腈（A）-0.1%甲酸溶液（B）,梯度洗脱;流速为0.6 m L/min;柱温为30℃。质谱采用正、负离子同时扫描,MRM监测模式定量分析。结果：6种成分的分离度良好,标准曲线在检测范围内线性关系良好,r〉0.9966。平均加样回收率为99.7%-101.0%,RSD为0.84%-1.47%。10批双花百合片中小檗碱的含量在102-132 mg/g、表小檗碱在6.72-11.25mg/g、药根碱在5.96-8.05 mg/g、巴马汀在11.10-13.60 mg/g、黄连碱在8.36-16.45 mg/g、绿原酸在3.87-8.81 mg/g。结论：该方法简便、准确,重复性好,可用于双花百合片中多种成分含量的测定。

ATP结合盒转运体介导的肝癌多药耐药研究进展

ATP结合盒转运体(ABC转运体)介导的多药耐药(MDR)是肝癌化疗失败的主要原因,研究确定天然的及获得性MDR的产生机制,有利于提出更有效的治疗措施。针对ATP结合盒转运体的肿瘤MDR逆转策略,对于肝癌化疗效果的提高具有重要意义。此外,ATP结合盒转运体可能参与了肿瘤生物学的一些重要过程,发挥药物外排泵以外的作用,为肿瘤的治疗提供了新的研究方向。

高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆盐酸伪麻黄碱浓度

目的建立一种高效液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS)测定人血浆盐酸伪麻黄碱浓度的方法。方法血浆样品经液液萃取后,以甲醇∶水∶甲酸(60∶40∶1,V/V/V)为流动相,流速0.35 ml/min,采用Cap cell pack C18色谱柱分离,150 mm×2.1 mm,5μm(USA);柱温20℃,选择离子喷雾离子化源串联质谱,通过正离子方式检测;选择反应监测(MRM)方式转化m/z=166.3/148.2(盐酸伪麻黄碱)和m/z=152.2/134.15(内标苯丙醇胺)进行定量分析,用内标法测定含量。结果伪麻黄碱浓度分别在5.0~400.0 ng/ml的范围内线性良好,R=0.9962,最低检测限为1.0 g/ml。结论本方法操作简便、快速,结果准确,可用于该药物的含量测定,同时也可为临床药动学研究提供一定的参考。

野生及人工繁育冬虫夏草对肾阳虚小鼠补肾作用的对比研究

目的观察野生冬虫夏草和冬虫夏草人工繁育品对肾阳虚小鼠的补肾作用,并比较野生及人工繁育冬虫夏草药理作用的差异。方法建立氢化可的松诱导的肾阳虚小鼠模型,灌胃给予2种冬虫夏草(低、高剂量),观察各组小鼠体重、负重游泳能力、性腺器官及免疫器官脏器指数、肾脏和睾丸组织形态等指标。结果野生冬虫夏草和冬虫夏草人工繁育品可改善氢化可的松所致肾阳虚小鼠体重增加变慢,负重游泳时间缩短,机体抗氧化能力下降,胸腺、脾、储精囊、包皮腺等腺体指数下降,肾脏和睾丸组织形态出现病理性改变的现象。结论野生冬虫夏草和冬虫夏草人工繁育品均具有显著的逆转氢化可所致小鼠肾阳虚的活性,具有一定的临床应用指导意义。

野生及人工繁育冬虫夏草调节免疫和抗衰老作用的对比研究

目的观察野生冬虫夏草和冬虫夏草人工繁育品免疫调节作用和抗衰老作用。方法建立环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠模型,灌胃给予2种冬虫夏草(低、高剂量),观察各组小鼠碳廓清能力、吞噬系数和淋巴细胞转化刺激指数、耳肿胀等指标;建立D-半乳糖所致衰老小鼠模型,灌胃给予2种冬虫夏草(低、高剂量),观察各组小鼠氧化、炎症、脑组织形态等指标。结果 2种冬虫夏草给药组小鼠的免疫调节均表现出一定程度的改善,D-半乳糖诱导的衰老小鼠的抗氧化能力、炎症因子水平、体外NO释放和脑组织形态等病理改变均得到一定程度的改善。结论野生冬虫夏草和冬虫夏草人工繁育品均具有增强免疫功能和抗衰老作用,具有良好的市场开发运用前景。

HPLC法同时测定双花百合片中绿原酸、表小檗碱、巴马汀、小檗碱的含量

目的:建立同时测定双花百合片中绿原酸、表小檗碱、巴马汀、小檗碱4种主要成分的高效液相色谱方法。方法:通过高效液相色谱分析双花百合片甲醇提取液,采用Kromasil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.05mol/L磷酸二氢钾水溶液(C,pH=3)(0-20 min,5%A-20%A;20-65min,20%A),梯度洗脱;体积流量0.8mL/min;检测波长为320nm;柱温30℃;进样量10μL。结果:绿原酸、表小檗碱、巴马汀、小檗碱进样量分别在5.0-500.0μg/mL(r=0.9994)、10.0-500.0μg/mL(r=0.9967)、10.0-1 000.0μg/mL(r=0.9985)、20.0-1 000.0μg/mL(r=0.9994)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为99.63%、101.22%、98.30%、98.93%,RSD值分别为0.97%、1.58%、1.48%、1.93%。结论:本方法简便、准确、重复性好,可为双花百合片的质量标准研究提供参考。

药用大型真菌灵芝中的三萜酸类成分研究

目的对灵芝中的三萜类成分进行结构与活性研究。方法通过氯仿对灵芝新鲜子实体的乙醇提取物进行萃取,进一步通过硅胶柱层析、中压液相(ODS色谱柱)、制备型HPLC对氯仿提取物中的化学成分进行分离、纯化。通过UV、ESI-MS、HRESI-MS、~1H-NMR、^(13)C-NMR、HSQC、HMBC、NOESY等光谱技术对所分离得到的化合物进行准确的结构鉴定。通过α-葡萄糖苷酶抑制模型对所分离得到的三萜类化合物进行活性评价。结果从灵芝子实体中分离鉴定了7个三萜类成分,分别为:(1)Ganoderic acid X1,(2)Ganoderic acid C,(3)Deacetyl-ganoderic acid F,(4)Ganoderic B,(5)Lucienic acid A,(6)7-hydroxy-3,11,15-trioxo-lanosta-8-en-24→20sLactone,(7)Methyl lucidenate D2。化合物1和6显示了一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性。结论灵芝中的主要化学成分类型为羊毛脂烷型三萜及其降碳衍生物,其中化合物1为未见报道的新化合物。该类成分显示了一定的α-葡萄糖苷酶抑制作用,具有较好的研究前景。

灵芝子实体中的羊毛脂烷型灵芝酸酯类成分研究

目的系统研究灵芝子实体中的羊毛脂烷型灵芝酸酯类成分。方法通过氯仿对盐酸酸化的灵芝子实体提取物中的羊毛脂烷型三萜酸类成分进行萃取,结合硅胶柱层析、中压柱层析(RP C18色谱柱)、制备型HPLC(RP C18色谱柱)对提取物中的三萜酸酯类化学成分进行系统的分离、纯化。通过UV、ESIMS、HRESI-MS、1 H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、NOESY等波谱学手段结合文献数据对制备得到的三萜类单体成分进行准确的结构测定。结果从灵芝子实体的氯仿提取物中共分离鉴定了10个羊毛脂烷型灵芝酸酯类成分,分别为:(1)Ganoderic acid AP,(2)Methyl Ganoderate G,(3)Ganoderic acid H,(4)12β-Hydroxy-3,7,11,15,23-pentaoxo-5α-lanost-8-en-26-oic acid,(5)Ganoderic acid K,(6)Ganoderenic acid B,(7)Lucienic acid A,(8)Lucidenic acid B,(9)20(21)-Dehydrolucidenic acid A,(10)Lucidone D。结论灵芝子实体中极性较小的化学成分主要为羊毛脂烷型三萜及其降碳衍生物,该类成分多具有羧基或羧酸酯官能团,既而也称灵芝酸类,本文共分离鉴定了10个该系列成分,其中化合物1为新化合物。

亚胺培南肾毒性和西司他丁肾保护的基础和临床研究进展

亚胺培南是一种碳青霉烯类抗生素,在临床上和西司他丁组成复方制剂,用于多重耐药和重症感染的治疗。肾毒性是亚胺培南的常见不良反应,在儿童和老年等肾功不全群体中,应用亚胺培南导致肾脏毒性的风险更大。西司他丁具有肾保护活性,可降低顺铂、万古霉素、环孢素A等药物的肾毒性。本文对近年来亚胺培南肾毒性和西司他丁肾保护作用的研究进展进行综述,从基础研究和临床应用的角度,揭示亚胺培南和西司他丁在肾脏产生不同效应的可能机制,为亚胺培南和西司他丁的临床安全合理应用提供理论基础和科学建议。

精氨酸双糖苷检测方法的建立及药动学研究

目的建立快速、灵敏、高效的精氨酸双糖苷的测定方法并研究精氨酸双糖苷在大鼠体内的药动学。方法以乌苯美司作为内标,采用LC-MS/MS检测方法测定血浆中精氨酸双糖苷浓度,利用DAS2.0软件计算药动学相关参数,并分析方法的可靠性。结果空白血浆对检测物质不产生干扰,在20～20 000 ng/mL符合线性关系,方法学中RSD以及RE值均小于15%。结论采用LC-MS/MS方法检测精氨酸双糖苷方法合理可靠,精氨酸双糖苷的绝对生物利用度为(4.50±3.75)%。