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题名支原体检测多重定量PCR方法的建立及应用
被引量:1
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作者
霍欣洋
赵阿贵
孙国祝
周宇荀
李凯
肖君华
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机构
东华大学化学化工与生物工程学院
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出处
《现代生物医学进展》
CAS
2020年第7期1259-1262,共4页
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基金
国家自然科学基金项目(31772550)
上海市科委基金资助项目(17140903102)。
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文摘
目的:建立一种快速、准确的方法检测支原体,这不仅可以有效地减少和预防支原体污染,还能为科研工作者提供一定的指导价值。方法:利用荧光定量PCR(TaqMan探针法)检测支原体,反应体系中同时存在标记两种颜色TaqMan探针及相关引物,分别检测支原体DNA和参考基因模板。根据支原体16S核糖体RNA保守区和参考基因TOP3A保守区设计引物和探针。通过对引物浓度、探针浓度和退火温度等反应条件的优化,建立了TaqMan探针多重定量PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了验证。结果:建立的双色荧光探针定量PCR方法的标准曲线相关系数r2和扩增效率分别为0.995和113.36%;该方法最低检测限为10 copies/μL;组内及组间变异系数均小于1%,证明该检测方法高效。利用该方法对随机挑选90例细胞抽提DNA样本进行检测,结果有60例为支原体阳性样本,阳性率67%,阳性率与相关研究报道一致。检测3个细胞培养上清样本,结果 1例支原体阳性,2例支原体阴性。从检测的样本中随机选择3个阳性样本及2个阴性样本使用普通PCR支原体检测试剂盒检测,结果一致;将其测序,测序结果比对正确。结论:本研究建立的多重定量PCR支原体检测方法能够应用于细胞抽提DNA及细胞培养上清的支原体检测,可以实现高效、快速检测支原体污染。
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关键词
支原体检测
TAQMAN
多重定量PCR
敏感性
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Keywords
Mycoplasma detection
TaqMan
Multiplex quantitative PCR
Sensitivity
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分类号
Q-33
[生物学]
R375
[医药卫生—病原生物学]
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题名基于核酸定量的核质分离质控方案
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作者
赵阿贵
赵玉鑫
霍欣洋
周宇荀
李凯
肖君华
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机构
东华大学化学化工与生物工程学院
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出处
《现代生物医学进展》
CAS
2020年第8期1451-1456,共6页
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基金
国家自然科学基金项目(31772550)
上海市科委基金资助项目(17140903102)。
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文摘
目的:拟建立一种方便快捷、经济有效的细胞核质分离鉴定方法。方法:本研究从DNA水平进行核质分离鉴定,选择GAPDH、ND1分别作为细胞核和细胞质标志基因,并根据GAPDH及ND1序列保守区设计引物,基于荧光定量PCR方法定性检测核质分离的效果。随后将本鉴定方法应用于其他种类细胞(BEAS-2B细胞、GT1-7细胞)及组织(小鼠心脏、肝脏、大脑)的核质分离鉴定。结果:在293T细胞应用该鉴定方法鉴定核质分离效果,结果显示:GAPDH、ND1在核组、质组中的含量存在明显差异,其中核标志基因GAPDH在细胞核中的比例达到了95%以上,质标志基因ND1在细胞质中的比例也达到了90%左右,这与从RNA水平及蛋白水平鉴定核质分离的结果一致。在其他种类的细胞(BEAS-2B细胞、GT1-7细胞)及组织(小鼠心脏、肝脏、大脑)应用该方法结果显示:细胞核组分中质标志基因ND1含量比293T细胞的有所增加,但仍可以实现核质分离鉴定。结论:本研究所建立的核质分离质控方法可以实现从DNA水平进行核质分离的鉴定,该方法更加经济、快捷。
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关键词
核质分离鉴定
细胞核标志基因
细胞质标志基因
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Keywords
The identification of nucleocytoplasmic separation
Nuclear marker gene
Cytoplasmic marker gene
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分类号
Q-33
[生物学]
Q591
[生物学—生物化学]
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