LncRNA DLEU2通过自噬机制调节甲状腺乳头状癌细胞增殖与凋亡

目的:探讨LncRNA DLEU2是否通过自噬影响甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)细胞增殖和凋亡。方法:免疫组织化学和实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术方法检测17对甲状腺乳头状癌及癌旁组织Beclin-1和ATG7的表达;qRT-PCR检测DLEU2在TPC-1细胞与正常甲状腺细胞中的表达;以Lipofectamine TM 3000转染试剂分别将DLEU2沉默载体(shDLEU2)及对照载体(shNC)转染至甲状腺乳头状癌TPC-1细胞系,实验分为:空白对照组(无转染的TPC-1细胞)、DLEU2沉默组(TPC-1细胞转染shDLEU2)、阴性对照组(转染照载体shNC)。利用生长曲线、划痕实验及Transwell检测TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力;流式细胞术检测shDLEU2对TPC-1凋亡的影响;Western blot和免疫细胞化学染色检测DLEU2对TPC-1细胞Beclin-1、ATG7和LC3表达的影响。结果:免疫组织化学染色结果显示:ATG7与Beclin-1在甲状腺乳头状癌高表达(P<0.05),shDLEU2组TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭能力下降(P<0.05),Western blot显示沉默DLEU2基因,Beclin-1与ATG7的表达量增加,LC3 A/B比值减小(P<0.05)。结论:沉默DLEU2基因,可能通过自噬促进TPC-1的凋亡,抑制其增殖、迁移和侵袭。

血浆载脂蛋白E在甲状腺乳头状癌发生淋巴结转移中的作用

目的探讨APOE在PTC发生及淋巴结转移(LNM)中的作用。方法回顾性分析2019年9月至2022年9月于河北北方学院附属第一医院耳鼻咽喉头颈外科经手术治疗且病理确诊的161例PTC患者(PTC组)和31例结节性甲状腺肿患者(对照组)临床资料。根据术后病理结果将PTC患者分为LNM组(PTC伴淋巴结转移,n=51)和单纯PTC组(PTC不伴淋巴结转移,n=110)。按照APOE中位数水平将PTC组分为:高水平组(>128.90 ng/L,n=80)及低水平组(≤128.90 ng/L,n=81)。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)测定患者血浆中APOE的浓度。采用多因素Logistic回归对两组间基线资料、脂代谢相关指标及APOE蛋白水平与PTC及LNM关系进行单因素及多因素分析。绘制ROC曲线评价APOE对PTC发生的预测价值。采用TIMER数据库分析APOE基因在泛癌与癌旁正常组织中的表达差异以及APOE表达与免疫细胞浸润之间的相关性。结果PTC组APOE水平明显高于对照组(P<0.05),HDL⁃C、APOA1低于对照组(P<0.05)。多因素Logistic分析显示:APOE是预测PTC发生发展的独立危险因素(P=0.022)。APOE预测PTC发生的AUC为0.639,诊断临界值为109.99 ng/L,灵敏度为81.4%,特异度为48.4%。LNM组APOE水平明显高于单纯PTC组(P=0.022)。APOE、年龄、LP(a)与PTC发生LNM明显相关(P<0.05)。淋巴结转移数目越多,APOE的水平越高(OR=1.286,95%CI:1.033~1.602,P<0.05)。TIMER数据库分析结果显示:与癌旁正常组织相比,APOE在甲状腺癌中高表达(P<0.01),且与B细胞、中性粒细胞、CD8+T细胞、CD4+T细胞、巨噬细胞、树突状细胞表达呈正相关(P<0.05)。结论高水平血浆APOE是PTC发生LNM的重要标志物,且与免疫细胞浸润相关,其可作为评估PTC发生及进展的新型生物标志物。

血浆lncRNA DLEU2在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的:通过检测甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)患者血浆DLEU2的水平,分析其与临床病理参数的关系,并探讨影响PTC及其淋巴结转移和临床分期的危险因素。方法:生物信息分析DLEU2在PTC组织和正常人群的水平。实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测22对PTC组织和癌旁组织以及89例PTC(PTC组)和36例正常人(对照组)血浆DLEU2的水平,分析89例PTC患者DLEU2与临床病理参数的关系。受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析DLEU2对PTC的诊断效能;二元Logistic回归分析影响PTC及其淋巴结转移和临床分期的因素。结果:生信结果显示512例PTC组织DLEU2表达量高于59例正常组织(P<0.001),ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.824,95%CI 0.755~0.893;22对PTC和癌旁组织qRT-PCR验证显示,PTC组织DLEU2的表达量高于癌旁组织(P<0.01)。PTC患者血浆DLEU2水平高于对照组(P<0.001),且DLEU2的表达与淋巴结转移有关,差异具有统计学意义(P<0.05);ROC曲线分析显示当DLEU2的截断值为1.114时,诊断PTC的AUC为0.765,95%CI 0.668~0.862,灵敏度为61.6%,特异度为80.6%;PTC组DLEU2的截断值为1.868时,诊断淋巴结转移AUC为0.766,95%CI 0.657~0.876,灵敏度为69.6%,特异度为72.7%。二元Logistic回归分析显示:DLEU2高表达是PTC的危险因素(OR=4.178,95%CI 1.287~13.567,P<0.05),PTC患者TG水平高于正常人群TG水平(OR=1.002,95%CI 1.000~1.005,P<0.05),女性患PTC的风险增加(OR=6.016,95%CI 2.372~15.257,P<0.01);淋巴结转移的患者血浆DLEU2表达水平高于无淋巴结转移患者血浆DLEU2表达水平(OR=3.684,95%CI 1.204~11.266,P<0.05),淋巴结转移的患者中TMAb水平高于无淋巴结转移患者的TMAb水平(OR=1.005,95%CI 1.000~1.010,P<0.05);临床Ⅲ+Ⅳ期TG水平高于临床Ⅰ+Ⅱ期TG水平(OR=1.003,95%CI 1.000~1.006,P<0.05)。结论:血浆DLEU2在PTC以及淋巴结转移患者中高表达,甲状腺功能指标TMAb和TG是PTC淋巴结转移和临床分期的有效预测指标。