活血化瘀法在中医内科临床治疗中的应用效果观察

分析活血化瘀法在中医内科临床治疗中的应用效果。方法 选择我院2022年1月-2022年12月中医内科疾病患者共70例,随机分2组比对,对照组以西医治疗,观察组西医加中医活血化瘀法。比较两组治疗前后患者血液流变学指标、生存质量、总有效率、不良反应。结果 观察组治疗后患者血液流变学指标低于对照组,生存质量高于对照组,总有效率高于对照组,P<0.05。两组不良反应无明显差异,P>0.05。结论 西医联合中医活血化瘀法对于中医内科疾病的治疗效果确切。

中医内科治疗脾肠病症的临床分析

分析中医内科治疗脾肠病症的临床疗效。方法 选择我院2022年1月-2022年12月脾肠病症患者共70例,随机分2组比对,对照组以常规西药治疗,观察组采取中医内科疗法。比较两组治疗前后患者症状积分、生活质量、总有效率、不良反应。结果 观察组治疗后患者症状积分低于对照组,生活质量高于对照组,总有效率高于对照组,P<0.05。两组不良反应无明显差异,P>0.05。结论 中医内科治疗脾肠病症的治疗效果确切,安全性高,值得推广。

RNA质量对内参基因选择和qRT-PCR结果评价的影响

目的:研究RNA质量对内参基因选择和实时定量PCR(qRT-PCR)分析肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导基因表达结果评价的影响。方法:用TNFα刺激体外培养的小鼠血管内皮细胞,采用qRT-PCR技术,以2种常用的管家基因β-actin和GAPDH为内参,检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因的表达,探讨RNA纯度对TNFα下游基因表达检测结果的影响。结果:当提取的总RNA纯度很高(D260nm/D230nm>2.0)时,以β-actin和GAPDH为内参基因检测ICAM-1基因表达的结果相近;当总RNA可能被盐及小分子污染(D260nm/D230nm<2.0)时,以β-actin为内参基因检测的ICAM-1基因相对表达量显著高于以GAPDH为内参所得结果。结论:RNA质量显著影响荧光定量PCR对基因表达的检测结果,因此在RNA质量较低时应选择2个或以上内参基因进行校正,以减少实验结果误差,得到准确结果。

血管内皮细胞初始接种密度在细胞增殖和毒性检测中的重要性

目的:探讨不同接种密度对药物诱导血管内皮细胞增殖及损伤作用评价的影响,阐明优化细胞初始接种密度的重要性。方法:体外培养bEND.3小鼠血管内皮细胞,按照不同密度接种96孔培养板,给予药物处理,通过倒置显微镜观察细胞形态并拍照,采用WST-1比色法检测细胞活力,评价药物的促增殖作用或H_2O_2诱导氧化损伤的程度。结果:在进行72 h细胞增殖效应评价实验中,bEND.3细胞接种量应为3000～6000/孔,细胞密度过低、间隙较大或接种密度过大,均可能影响对药物效应的评价。在建立H_2O_2诱导细胞氧化损伤模型时,内皮细胞的接种量直接影响H_2O_2对细胞的损伤程度。结论:针对实验目的选择合适的细胞初始接种密度,对于提高实验结果的准确性和稳定性十分必要。

羟基红花黄色素A通过抑制动脉内皮细胞中TNFR1/NF-κB信号通路而发挥抗炎作用

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对小鼠动脉血管内皮细胞肿瘤坏死因子α受体1/核因子κB(TNFR1/NF-κB)信号通路的作用。方法以(1.2、12、120)μmol/L HSYA预处理体外培养的小鼠动脉血管内皮细胞,之后以肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导细胞,采用Western blot法检测HSYA对TNFR1介导NF-κB信号通路相关蛋白核因子κB抑制蛋白α(IκBα)表达的影响;采用实时定量PCR检测HSYA对TNF-α诱导的NF-κB下游分子细胞间黏附分子1(ICAM-1)和E选择素(E-selectin)mRNA表达的抑制作用;采用流式细胞术检测细胞膜TNFR1表达量的变化;利用TNF-α转化酶(TACE)抑制剂TAPI-0检测TACE是否参与HSYA对TNFR1介导信号的抑制作用。结果 HSYA可呈剂量依赖性抑制TNFR1介导的NF-κB上游分子IκBα蛋白降解;HSYA可显著抑制NF-κB下游分子ICAM-1和E-selectin的mRNA表达;HSYA可显著减少细胞膜TNFR1蛋白含量;TAPI-0可抑制HSYA对TNFR1信号的调控作用。结论 HSYA可抑制血管内皮细胞中TNFR1/NF-κB信号通路而发挥抗炎作用,TACE参与介导HSYA的抗炎作用。

中药活性成分对oxLDL诱导血管平滑肌细胞泡沫化的影响

目的探讨中药活性成分黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASIV)、羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)和芍药苷(paeoniflorin,PAE)对小鼠主动脉平滑肌细胞(ASMCs)泡沫化过程的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养小鼠ASMCs,并利用免疫荧光染色对其进行鉴定。利用氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)和肿瘤坏死因α(TNFα)诱导ASMCs泡沫化,并应用ASIV、HSYA和PAE进行干预,观察其对泡沫细胞形成的影响,应用油红O染色检测细胞形态学改变、酶促比色法测定细胞内胆固醇含量变化;应用RT-PCR和Western blot方法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白1(LOX-1)表达的变化。结果 oxLDL(80μg/m L)和TNFα(30 ng/mL)联用72 h可诱导ASMCs泡沫化,细胞内脂质颗粒明显增多,细胞内胆固醇含量增加,LOX-1表达上调;ASIV、HSYA和PAE显著抑制上述各过程。结论 ASIV、HSYA和PAE能够抑制ASMCs泡沫化,抑制oxLDL诱导的LOX-1表达可能是其作用机制之一。

肉制品中牛源性成分多重实时荧光PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立肉制品中牛源性成分的荧光PCR检测方法。方法根据牛特异性线粒体DNA片段,设计合成两对引物,以生、熟牛肉及超市牛肉加工品为材料,建立肉制品中牛源性成分的多重实时荧光PCR检测方法,并用该法与国标法同时对市售的25份肉制品同时进行检测,通过对其他种类的肉源DNA进行扩增验证方法的特异性;对含有不同比例牛肉成分的DNA样本进行检测确定检出限。结果该方法可成功检测出肉制品中的牛源性成分。在25份肉制品检测中,与国标法检测结果一致。该法的特异性为100%,灵敏度检测线为1%。结论本研究成功建立牛源性肉制品的检测方法,该方法快速简便,且具有较高的特异性和灵敏度,可用于市售肉制品中牛源性成分的鉴定。

黄芪皂苷Ⅲ抑制小鼠动脉平滑肌细胞TNFR1介导信号转导

目的研究黄芪皂苷Ⅲ(astragaloside Ⅲ,ASⅢ)对小鼠动脉平滑肌细胞(arterial smooth muscle cells,ASMCs)中I型TNF-α受体(TNF-αreceptor type 1,TNFR1)介导信号通路的抑制作用,为中药黄芪的抗炎作用和抗动脉粥样硬化作用提供证据。方法以不同浓度ASⅢ预处理ASMCs,之后以TNF-α诱导细胞。采用WST-1实验检测细胞活力变化;采用实时定量RT-PCR技术检测细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(lectin-like oxidized LDL receptor-1,Lox-1)和ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)m RNA表达变化;采用Western Blot方法检测ICAM-1、Lox-1和ABCA1蛋白表达变化,并检测ASⅢ对转录因子NF-κB(nuclear factor-κB)上游抑制蛋白IκBα(NF-κB inhibitor-α)、以及对信号分子AKT、细胞外受体活化激酶(extracellular receptor-activated kinases,ERKs)和p38磷酸化的影响。结果 (1)ASⅢ在30 n M^10μM范围内不抑制细胞活力;(2)ASⅢ剂量依赖性抑制TNF-α对ICAM-1、Lox-1和ABCA1 m RNA表达的调控;(3)ASⅢ剂量依赖性抑制TNF-α对ICAM-1、Lox-1和ABCA1蛋白表达的调控;(4)ASⅢ显著抑制TNFR1介导的IκBα磷酸化和降解;(5)ASⅢ显著抑制TNFR1介导的AKT、ERKs和p38磷酸化。结论 ASⅢ可全面抑制ASMCs中TNFR1介导信号通路激活,参与其抗炎和抗动脉粥样硬化作用。

活血胶囊激活PI3K/Akt/Nrf2/HO-1通路对血管内皮细胞发挥抗氧化损伤作用

目的研究活血胶囊(HXJN)对血管内皮细胞的抗氧化损伤作用分子机制。方法采用WST-1法检测细胞活力;qRT-PCR和Western blot技术检测血红素加氧酶-1(HO-1)的表达;检测HXJN对Akt和转录因子Nrf2的激活作用,并分析其对HO-1表达的影响。结果HXJN可显著减轻H2O2对细胞活力的抑制作用。HXJN可上调HO-1表达水平。HXJN可诱导Akt和Nrf2磷酸化,并促进Nrf2核转位;LY294002、perifosine和ML385均抑制HXJN对HO-1的上调,LY294002可抑制Nrf2核转位。结论HXJN促进HO-1表达而发挥抗氧化损伤作用,Akt和Nrf2参与调控HO-1表达。

Semaphorin 3A过表达对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:探讨semaphorin 3A(Sema 3A)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响。方法:构建Sema 3A过表达载体,以脂质体转染法转染HUVECs,过表达效果以qPCR和Western blot法验证;待测细胞以200μmol/L H_2O_2处理4 h;qPCR法检测炎性细胞因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平以相应比色法检测;细胞活力以MTT法检测;流式细胞术检测细胞凋亡,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及Bcl-2水平以Western blot法检测。结果:Sema 3A过表达能显著增加H_2O_2诱导的HUVECs凋亡、炎性细胞因子分泌以及LDH和MDA含量,同时显著抑制SOD活性和细胞活力;Sema 3A对未经H_2O_2处理的HUVECs没有损伤效应,即其对HUVECs的损伤具有H_2O_2依赖性。结论:Sema 3A能显著加重H_2O_2诱导的HUVECs损伤,在氧化应激所致的内皮细胞损伤过程中发挥促进作用。

Toll样受体4的活化抑制人表皮原代黑素细胞的黑素合成

目的探讨黑素细胞Toll样受体4(TLR4)的活化对黑素细胞黑素合成的影响。方法以原代培养的黑素细胞为研究对象,采用TLR4的激动剂脂多糖(LPS)刺激细胞,首先检测黑素含量的变化,其次用实时定量PCR和Western blot法检测前黑素体蛋白(Pmel17)、酪氨酸酶(TYR)、小眼畸形相关转录因子(MITF)的表达变化;最后用电镜观察黑素小体的变化。结果 LPS刺激细胞后,黑素含量明显减少,黑素合成相关蛋白Pmel17和TYR的表达降低,且这种变化依赖于MITF转录因子的调控,同时电镜结果显示黑素小体合成被抑制。结论 TLR4的活化降低黑素细胞的黑素合成,提示细菌的产物可以通过天然免疫影响黑素合成。

三聚氰胺偶联抗原制备及其免疫原性分析

探讨以2-氯-4,6-二胺-1,3,5-三嗪(CAAT)作为起始物,与6-氨基己酸(ACS)连接转化得到半抗原MelACS,再将其与牛血清白蛋白(BSA)偶联形成具有连接手臂的抗原BSA-ACS-Mel,用于单克隆抗体(m Ab)制备。经过液相色谱、Western blot及ELISA等抗原特性分析,证明半抗原Mel-ACS的转化效率达到了85.9%,且针对Mel特异性单抗获得率达到了42.9%,抗原BSA-ACS-Mel免疫原性较好,完全可以适用于三聚氰胺分子的特异性检测需要。这对其余小分子抗原的合成也起到一定的指导作用。

EGFR突变阳性非小细胞肺癌中上皮间质转化对EGCG逆转吉非替尼耐药的作用

目的探索表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)在EGFR突变阳性非小细胞肺癌中逆转吉非替尼耐药与上皮间质转化(epithelia-mesenchymal transition,EMT)的作用。方法首先构建吉非替尼耐药的PC9细胞。将实验分为5组,分别为PC9耐药组、EGCG处理PC9耐药细胞的EGCG组、吉非替尼处理PC9耐药细胞的吉非替尼组、吉非替尼联合EGCG处理PC9耐药细胞的吉非替尼+EGCG组以及PC9组。MTT法检测细胞半数致死量(IC 50)。流式细胞仪检测细胞周期及凋亡变化。Western blot检测细胞Caspase-3、Bcl-2、E-cadherin与N-cadherin蛋白表达。结果与吉非替尼组比较,吉非替尼+EGCG组IC 50明显降低(P<0.05)。与PC9耐药组、吉非替尼组及EGCG组比较,吉非替尼+EGCG组细胞G2/M期增多(P<0.05),凋亡百分数增多(P<0.05)、Caspase-3表达增多(P<0.05),Bcl-2表达减少(P<0.05)。与PC9组比较,PC9耐药组细胞E-cadherin表达减少(P<0.05),N-cadhrein表达增多(P<0.05);与PC9耐药组比较,EGCG组细胞E-cadherin表达增多,N-cadhrein表达减少(P<0.05)。结论EGCG能够逆转吉非替尼耐药,其中对EMT抑制发挥了一定作用。

沉默FOXM1拮抗肝细胞生长因子对胃癌细胞SGC7901增殖、迁移和侵袭的诱导作用

目的:探索转录因子FOXM1在肝细胞生长因子(HGF)诱导胃癌细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用。方法:体外培养胃癌细胞SGC7901,根据不同处理将细胞分组:空白对照组、20 ng/ml HGF组、40 ng/ml HGF组、60 ng/ml HGF组、siRNA-scramble+HGF组、siRNA-FOXM1+HGF组。采用MTT法检测各组SGC7901细胞的增殖,Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭情况,qRT-PCR和Western blot法分别检测各组细胞中FOXM1 mRNA和蛋白水平。结果:与空白对照组相比,不同浓度HGF均能够促进胃癌细胞SGC7901增殖、迁移和侵袭,同时上调FOXM1的表达水平,并且呈浓度依赖性关系。沉默HOXM1表达能够明显抑制HGF对SGC7901细胞的增殖、迁移和侵袭的诱导作用。结论:HGF对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的诱导作用可能与上调FOXM1表达有关,沉默FOXM1表达能够抑制HGF的作用。

尿激酶型纤溶酶原激活物对食管鳞癌细胞增殖与转移的影响

目的观察尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase plasminogen activator,u PA)对食管鳞癌ECA-109细胞增殖与转移的影响。方法 MTT法检测ECA-109的u PA干扰细胞(si-RNA)、阴性对照细胞(si-NC)与空白对照细胞(control) 24 h、48 h、72h时OD值。流式细胞术检测细胞周期,迁移与划痕实验检测细胞迁移能力,侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western-blot检测细胞VEGF蛋白表达。结果转染后72 h si-RNA组较si-NC组和control组细胞增殖能力明显降低(P <0. 05)。在转染后48h si-RNA组较si-NC组和control组G2期细胞比例明显下降,由(14. 2±2. 6)%与(18. 6±1. 9)%降至(8. 9±1. 2)%(P <0. 05),转染36 h迁移与侵袭细胞数减少(P <0. 05),转染后48 h划痕修复能力降低(P <0. 05)、VEGF蛋白表达下调(<0. 05)。si-NC组与control组相比,各检测指标之间差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论在食管鳞癌ECA-109细胞中,u PA的下调能够降低细胞增殖活性,并且抑制细胞侵袭、迁移能力与VEGF蛋白表达,进而抑制其转移能力。

NB-UVB对黑素细胞黑素合成相关基因表达的影响

目的:研究NB-UVB照射对黑素细胞的细胞活性、黑素合成、黑素合成相关基因表达的影响。方法:培养黑素细胞系PIG1,利用MTT法检测不同剂量NB-UVB(400、800、1200、1600、2000 mJ/cm 2)照射后细胞的增殖率,采用NaOH裂解法测定细胞中的黑素含量,RT-PCR和Western blot方法检测UVB照射后12个黑素合成相关基因Tyr、Tyrp1、Tyrp2、OA1、MART-1、Pmel17、VAT-1、OCSP、syntenin、CHCHD3、flotillin-1、GPNMB的mRNA和蛋白的表达。结果:NB-UVB照射剂量在400、800、1200 mJ/cm 2时,细胞活力无明显变化,照射剂量为1600、2000 mJ/cm^(2)时细胞活力明显下降。NB-UVB照射剂量为400、800、1200 mJ/cm^(2)时,随着照射剂量的增加,黑素的合成增加;NB-UVB照射后,12种黑素体蛋白中,Tyr、Tyrp2、GPNMB、Syntenin、MART-1的基因mRNA及蛋白表达显著升高。结论:UVB照射显著增加了黑素合成和相关基因的表达。

建筑装修材料对室内环境质量的影响及其防治

论述了建筑装修材料对室内环境质量的影响 ,并指出了其产生的主要污染物及其危害 。

活血胶囊抑制H_(2)O_(2)诱导的小鼠主动脉平滑肌细胞衰老的研究

目的研究活血胶囊对H_(2)O_(2)诱导的小鼠主动脉平滑肌细胞(mASMC)衰老的抑制作用及分子机制。方法①实验分为对照组、活血胶囊150μg/mL组、活血胶囊300μg/mL组、活血胶囊750μg/mL组,WST-1法检测各组细胞活力。②实验分为对照组、H_(2)O_(2)组、活血胶囊+H_(2)O_(2)组,采用SA-β-gal染色法观察细胞衰老情况,采用qRT-PCR法检测细胞衰老相关基因p21和衰老相关分泌因子细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-6(IL-6)及沉默信息调节蛋白1(SIRT1)mRNA表达量,ELISA法检测细胞培养上清中ICAM-1、IL-8、IL-6水平,流式细胞仪分析细胞周期变化。结果活血胶囊150μg/mL组、活血胶囊300μg/mL组细胞活力与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),活血胶囊750μg/mL组明显高于对照组(P<0.05)。SA-β-gal染色显示,H_(2)O_(2)组衰老细胞明显增多,活血胶囊+H_(2)O_(2)组衰老细胞明显较H_(2)O_(2)组少。H_(2)O_(2)组p21、ICAM-1、IL-8、IL-6 mRNA相对表达量均明显高于对照组(P均<0.05),且活血胶囊+H_(2)O_(2)组p21、ICAM-1、IL-6 mRNA相对表达量均明显低于H_(2)O_(2)组(P均<0.05)。H_(2)O_(2)5 h组SIRT1 mRNA相对表达量明显低于对照组(P<0.05),活血胶囊+H_(2)O_(2)组明显高于H_(2)O_(2)5 h组(P<0.05)。H_(2)O_(2)组细胞周期停滞在G1期,G1期细胞比例明显高于对照组(P<0.05),S期细胞比例明显低于对照组(P<0.05);活血胶囊+H_(2)O_(2)组G1期细胞比例明显低于H_(2)O_(2)组(P<0.05),S期细胞比例明显高于H_(2)O_(2)组(P<0.05)。结论活血胶囊可抑制H_(2)O_(2)诱导的mASMC衰老,其作用与促进细胞中SIRT1表达、抑制ICAM-1和IL-6表达有关。

汾河流域沉积物中重金属分布及潜在风险评价

以汾河流域6个主要监测断面为研究对象,采集、测定和分析了沉积物中Cr、Ni、Cu、Zn、Cd、As、Hg、Pb 8种重金属的含量与分布。并采用单项污染指数法、内梅罗综合污染指数法和潜在生态风险指数法对沉积物中的重金属污染情况进行了分析评价。由单项污染指数分析得8种重金属元素的污染情况由重到轻为Cd>Cu>Pb>As>Cr>Hg>Ni>Zn;内梅罗综合污染指数法认为6个监测断面污染程度由重到轻的顺序为灵石南关>汾河二库>甘亭>石滩>平遥铁桥>汾河水库;通过潜在风险评价分析出8种重金属元素的污染情况由重到轻为Cd>Hg>As>Cu>Pb>Ni>Cr>Zn,6个监测断面污染程度由重到轻的顺序为灵石南关>石滩>甘亭>汾河二库>汾河水库>平遥铁桥。结果表明:汾河流域Cd污染最为严重,Zn污染最轻;汾河流域下游污染情况较为严重,6个监测断面中灵石南关的污染最严重。

胃癌中CXCR4 mRNA的表达量及其临床意义

[目的]探究胃癌组织中与胃癌进展相关的趋化因子受体4 (C-X-C motif chemokine receptor4,CXCR4)的表达量及其临床意义。[方法]先根据TCGA数据库,对300余例患者胃癌组织及癌旁组织的CXCR4 mRNA表达量进行差异性分析,并与病理参数进行相关性分析。再使用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组化(immunohistochemistry,IHC)技术检测2018年7月至2022年11月陕西省人民医院收治的92例患者胃癌组织标本中CXCR4 mRNA的表达量并分析其与预后和病理参数的相关性。[结果] TCGA数据及临床数据分析均显示,胃癌组织的CXCR4 mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.001)。TCGA数据分析显示,CXCR4 mRNA表达量与肿瘤浸润深度及低分化程度呈正相关(OR=1.297、1.437,P均<0.05)。临床数据分析显示,CXCR4 mRNA表达量与肿瘤远处转移及分化程度呈正相关(OR=7.717、3.254,P均<0.05)。TCGA数据及临床数据Kaplan-Meier生存分析均显示,与CXCR4 mRNA低表达组相比,高表达组胃癌患者生存时间明显缩短(P=0.008、0.001)。[结论]胃癌组织中CXCR4 mRNA过表达,与肿瘤的进展、浸润、转移密切相关,其高表达提示胃癌患者的不良预后。CXCR4 mRNA可能成为胃癌诊断和靶向治疗新的候选标志物。