pUC18-CpG重组质粒对鸭疫里默氏菌灭活疫苗的免疫增强效应

【背景】鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)是造成禽养殖业损失的重要病原体,可引起鸭等多种禽类浆膜炎和败血症。疫苗存在反应弱、免疫原性低、使机体产生抗体水平低等问题。【目的】探究pUC18-CpG佐剂的免疫反应及保护作用,为CpG佐剂疫苗预防鸭浆膜炎提供依据。【方法】通过鸭外周血淋巴细胞增殖试验和实时荧光定量PCR试验确定最优序列。构建重组质粒pUC18-CpG,并与CpGODN进行免疫原性比较。以灭活RA-GH5为抗原,pUC18-CpG重组质粒为佐剂,分别皮下免疫雏鸭2次,检测其血清抗体滴度和细胞因子水平;以RA-GH5肌肉注射攻毒,观察组织病理学变化及免疫保护率。【结果】筛选出免疫刺激活性最佳序列CpG-3,含CpG-3的pUC18-CpG重组质粒与CpG-3的免疫原性无明显差异。与RA疫苗相比,添加pUC18-CpG重组质粒组显著提高了血清抗体滴度以及IL-2和IL-4细胞因子水平。80μg pUC18-CpG佐剂疫苗对鸭的免疫保护率为70%,20、40μg pUC18-CpG佐剂疫苗均为60%。【结论】pUC18-CpG佐剂与RA-GH5灭活疫苗联用能够引起更强的体液免疫和细胞免疫应答。

细菌Ⅵ型分泌系统结构和功能的研究进展

细菌Ⅵ型分泌系统(typeⅥsecretion system, T6SS)是由多种蛋白组成的复合跨膜装置,广泛存在于革兰阴性细菌中,通过传递各种效应蛋白作用于不同靶标介导诸多生物学功能。Ⅵ型分泌系统主要包含2个部分即跨膜复合物和穿刺结构,是一种类似于噬菌体尾部的可收缩系统。效应蛋白能通过该收缩装置释放到细菌或真核细胞中,影响靶目标的正常生理活性。因此,Ⅵ型分泌系统在细菌与细菌、细菌与真核细胞相互作用过程中扮演着重要的角色,能够提高细菌竞争能力,增强细菌毒力,促进基因水平转移,利于细菌抵抗外部环境的压力。研究细菌Ⅵ型分泌系统,可以加深对细菌致病机理和宿主的认识,为细菌性疾病防治提供新的方法策略。

鸭疫里默氏菌DnaK、OmpA和OmpA-DnaK蛋白的免疫原性

【背景】鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)可引起鸭等多种禽类败血症和浆膜炎,给禽养殖业造成严重经济损失。蛋白疫苗是预防RA感染的重要策略之一。目前,有关RA重组蛋白免疫原性报道较少,且其应用也受到单一蛋白抗原诱导的特异性免疫反应不足的限制。【目的】探究分子伴侣DnaK、外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)和OmpA-DnaK蛋白疫苗在鸭体内诱导的免疫应答,评估其免疫原性,为RA疫苗抗原研发提供依据。【方法】克隆DnaK和OmpA基因并分别与pET-32a(+)载体相连,利用限制性酶切位点Nco I和BamH I将OmpA连接至DnaK基因上游,经原核表达和纯化制得重组蛋白DnaK、OmpA和OmpA-DnaK。3种重组蛋白分别皮下免疫雏鸭2次,检测其血清抗体滴度、淋巴细胞增殖和细胞因子(IL-2和IL-4)水平;以RA-GH5肌肉注射攻毒,检查其组织病理学变化及免疫保护率。【结果】成功表达了DnaK、OmpA和OmpA-DnaK重组蛋白,分子量分别约为90、60和130 kDa。3种蛋白疫苗均能诱导宿主产生体液和细胞免疫应答,并且诱导的免疫保护反应减轻了RA引起的组织病理学损伤。与单独DnaK或OmpA免疫相比,OmpA-DnaK显著提高了血清抗体滴度、淋巴细胞增殖指数,以及IL-2和IL-4细胞因子水平。OmpA-DnaK对鸭的免疫保护率为50%,DnaK和OmpA均为30%。【结论】RA重组OmpA、DnaK和OmpA-DnaK蛋白疫苗均能诱导鸭免疫反应,并且DnaK与OmpA融合表达可引起更强的体液免疫和细胞免疫应答。