高脂饮食对雄性小鼠生殖功能和睾丸内氧化低密度脂蛋白变化的影响

目的脂代谢紊乱可导致雄性不育,但其影响精子发生及睾丸微环境的机制尚不明确。文中旨在探讨高脂饮食对雄性小鼠生殖功能以及睾丸内氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)表达变化的影响。方法 16只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机数字表法分为正常饮食组和高脂饮食组,每组8只。分别给予标准饲料与高脂饲料维持饮食干预连续喂养16周。检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)以及睾酮水平;取附睾尾测定精子数量和活力,HE染色观察睾丸结构变化,免疫组织化学分析小鼠睾丸组织中Ox-LDL的免疫定位和表达变化。结果与正常饮食组相比,高脂饮食组小鼠体重显著增加(P<0.05),血清TG差异无统计学意义(P>0.05),高脂饮食组较正常饮食组血清TC升高[(2.31±0.33)mmol/L vs(6.54±0.31)mmol/L,P<0.01],血清Ox-LDL升高[(0.32±0.03)mg/L vs(0.44±0.06)mg/L,P<0.01],血清睾酮降低[(3.64±0.43)mg/L vs(0.40±0.14)mg/L,P<0.01],小鼠精子浓度降低[(9.95±0.75)106/m L vs(5.66±1.51)106/m L,P<0.01]和精子活动率降低[(54.69±17.84)%vs(32.48±5.80)%,P<0.01]。HE染色显示高脂饮食组较正常饮食组睾丸间质细胞、睾丸生精细胞与腔内精子数量明显减少,同时免疫组织化学显示Ox-LDL定位于睾丸间质细胞周围且表达明显升高(P<0.01)。结论睾丸局部微环境中,Ox-LDL升高可能抑制了Leydig细胞的睾酮合成,进而影响了睾丸生精功能。

Annexin5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中StarD7表达的影响

目的先前研究发现annexin 5刺激大鼠睾丸间质细胞后,3β-羟类固醇脱氢酶(3βbeta-hydroxysteroid dehydro-genase,3β-HSD)及睾酮水平都增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在联系。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中的StarD7(START domain containing 7)表达的影响,探讨annexin 5影响睾酮分泌的机制。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,1nmol/L的annexin 5处理间质细胞24h,分别提取细胞总mRNA和总蛋白。RT-PCR检测StarD7的mRNA表达改变。Western blotting方法分析睾丸间质细胞中StarD7的蛋白表达变化。收取细胞爬片,利用免疫细胞化学的方法对StarD7在睾丸间质细胞中进行定位。结果与对照组相比,在mRNA水平上,加药组StarD7 mRNA的表达增加了44.5%(1.10±0.02 vs 1.59±0.09,P<0.05)。在蛋白水平上,加药组StarD7蛋白的表达增加了44.3%(1.49±0.10 vs 2.15±0.16,P<0.05)。StarD7主要定位在大鼠睾丸间质细胞的胞浆内,加药组的染色强度明显强于对照组。结论 StarD7在基因和蛋白水平均受annexin 5的调控,结合先前发现annexin 5可调控睾丸间质细胞睾酮合成的结果,提示annexin 5调控睾酮合成可能是通过调控StarD7的表达来实现的。

Annexin 5刺激大鼠睾丸Leydig细胞后的差异表达蛋白的研究

目的:研究annexin 5作用于大鼠睾丸Leydig细胞后的差异表达蛋白。方法:原代培养大鼠睾丸Leydig细胞,1 nmol/L的annexin 5处理Leydig细胞24 h,提取细胞蛋白用二维电泳分离蛋白并进行比较。选择与对照组有明显差异表达的蛋白点,进行质谱分析。结果:获得了分辨率和重复性均很好的差异蛋白图谱。筛选出的显著差异表达的50个蛋白点,共有36个蛋白点被成功鉴定,其中annexin 5处理组中高表达的为23个,低表达的为13个。结论:初步建立了annexin 5作用于大鼠睾丸Leydig细胞后的差异蛋白谱,筛选并鉴定出的这些蛋白质可能是影响睾丸Leydig细胞合成睾酮过程中的关键蛋白,研究结果为阐明annexin 5调控大鼠睾丸Leydig细胞分泌睾酮的具体机制奠定了基础。

人精子CatSper1 mRNA表达与精子活力的相关性研究

目的研究不同精子活力的人精子中精子特异性阳离子通道蛋白1(CatSper1)mRNA的表达差异,以及其与精子活力相关指标的相关性。方法分别收集少、弱精症患者精液标本和健康人对照精液标本各25份,用Trizol试剂提取精子中的总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CatSper1 mRNA表达改变。结果少、弱精症组CatSper1 mRNA表达水平与健康人对照组相比,差异具有统计学意义[(0.54±0.01)vs(1.13±0.05),P<0.01]。CatSper1 mRNA表达与精子活率以及a+b级精子百分率之间呈显著正相关。结论人精子CatSper1 mRNA表达与人精子活力呈正相关。

膜联蛋白5刺激大鼠Leydig细胞增殖过程中RhoA、RockⅠ的表达

目的研究RhoA、RockⅠ促进大鼠Leydig细胞增殖的机制,探讨膜联蛋白5调控Leydig细胞增殖的新途径。方法用1 nmol/L膜联蛋白5处理原代培养大鼠Leydig细胞12、24、48 h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,western blot检测RhoA和RockⅠ的蛋白质表达情况。结果 MTT法结果显示,1 nmol/L膜联蛋白5呈显著的时间依赖的促进Leydig细胞增殖作用,且24 h组细胞增殖能力与对照组差异最为显著(0.251±0.019 vs 0.207±0.009,t=4.380,P<0.01);流式细胞分析发现,1 nmol/L膜联蛋白5作用于Leydig细胞,以作用24 h时对细胞周期的影响最为显著,可使G2+M期比例比对照组升高(12.24±0.84 vs 7.79±1.15,t=5.407),G0/G1期比例下降(67.61±0.37 vs 74.49±0.73,t=-14.64),P均<0.01;western bolt结果表明,膜联蛋白5作用12、24、48 h后Leydig细胞RhoA表达结果分别为1.39±0.29、2.21±0.38、1.46±0.19,与0 h组结果 0.89±0.41比较,均有升高(t=2.028,P<0.05;t=4.736,P<0.01;t=2.550,P<0.05);膜联蛋白5作用24、48 h后Leydig细胞RockⅠ表达结果分别为1.14±0.18、1.03±0.17,与0 h组结果 0.72±0.22比较均升高(t=2.944,P<0.01;t=2.246,P<0.05)。结论 RhoA、RockⅠ可能参与膜联蛋白5促进细胞周期G0/G1进程,最终促进Leydig细胞的增殖。

膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞增殖过程中Ect2表达的影响

目的研究膜联蛋白5(annexin 5)对大鼠睾丸间质细胞增殖过程中上皮细胞转化序列2癌基因(epithelial cell transfor-ming sequence 2 oncogene,Ect2)表达的影响,探讨annexin 5影响睾丸间质细胞增殖的机制。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,不同剂量的annexin 5处理后,采用MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR检测Ect2的mRNA表达改变,western blot分析睾丸间质细胞中Ect2蛋白质表达变化。结果 MTT法检测结果显示,annexin 5对大鼠睾丸间质细胞增殖有明显的促进作用,且在2～3 d呈显著的剂量-时间依赖关系(P<0.01),在第5天细胞增殖作用已明显减弱。流式细胞分析发现,1 nmol/L annexin 5作用48 h时G2/M期细胞减少为24.49%,72 h时减少为16.43%,与对照组比较差异显著(P<0.05)。RT-PCR结果表明,0.1 nmol/L组和1 nmol/L组Ect2 mRNA表达[(0.77±0.06)和(0.85±0.04)]与对照组(0.67±0.06)比较,分别增加了14.9%(P<0.05)和26.9%(P<0.01),而10 nmol/L组Ect2 mRNA表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。western blot结果表明,1 nmol/L annexin 5作用组的Ect2蛋白质表达比对照组增加了20.9%[(1.50±0.15)vs(1.24±0.07),P<0.05],而0.1 nmol/L组和10 nmol/L组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 annexin 5对大鼠睾丸间质细胞增殖的促进作用是通过促进细胞周期由G2期向M期的转变来实现的。Ect2在基因和蛋白质水平均受annexin 5的影响,提示annexin 5调控睾丸间质细胞增殖可能通过增加Ect2的表达而实现。

褪黑素对放疗后大鼠卵巢功能保护作用的探讨

目的放射治疗(radiotherapy,RT)已成为治疗恶性肿瘤的主要手段之一,年轻女性患者经放疗后往往会导致卵巢功能减退甚至衰竭,如何减轻放疗所致的卵巢功能损伤至关重要。本研究探讨褪黑素(melatonin,MT)对射线照射后大鼠卵巢功能的保护作用。方法 30只雌性SD大鼠随机均分为对照组、RT组、RT+MT(25mg/kg)组、RT+MT(50mg/kg)组、RT+MT(100mg/kg)组,分别接受等渗盐水注射、200cGy射线照射+等渗盐水注射和200cGy射线照射+不同剂量的MT注射。射线照射两周后处死,采用酶联免疫吸附法测定各组大鼠血清卵泡刺激素(serum follicle stimulating hormone,FSH)和雌二醇(estradiol,E2)浓度,计数各组卵泡数量,并采用分光光度法测定卵巢组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)活性。结果对照组、RT+MT(100mg/kg)组、RT+MT(50 mg/kg)组、RT组的血E2水平依次降低,分别为(6.68±0.48、5.73±1.36、4.26±0.44、2.83±0.51)pmol/L;FSH水平依次升高,分别为(0.340±0.011、0.431±0.053、0.479±0.023、0.604±0.028)ng/mL;卵巢组织卵泡总数依次减少,分别为(21.67±1.97、18.00±2.28、15.50±1.05、11.50±2.43);Caspase3活性依次增强,分别为(0.14±0.03、0.26±0.06、0.36±0.05、0.50±0.05);除RT+MT(50mg/kg)组与RT+MT(100mg/kg)组FSH水平比较差异无统计学意义(P>0.05);其余各项指标组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MT能减少射线对大鼠卵巢功能的损伤,其机制可能与MT抑制射线诱导的Caspase3激活有关。

腹型肥胖男性腰臀比与生殖内分泌激素的相关性分析

目的:探讨腹型肥胖对男性生殖内分泌激素产生的影响。方法:随机选取男科门诊342例年龄19～47岁、身高>1.6 m的男性患者,测量其腰围、臀围,计算腰臀比。用化学发光法测定血清雌二醇(E2)、睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH),放射免疫法测定游离睾酮(FT),比较生殖内分泌激素与腰臀比之间的相关性。结果:342例男性中,腹型肥胖者62例(腰臀比>0.9),正常体型者280例(腰臀比≤0.9),腰臀比与T(r=-0.163,P=0.003)、T/LH比值(r=-0.13,P=0.02)呈显著负相关。腹型肥胖组与正常体型组比较,T[(14.51±4.53)nmol/L vs(17.21±4.23)nmol/L]、T/LH比值(2.26±0.36 vs 4.61±0.19)显著降低(P均<0.05)。结论:腰臀比与T、T/LH比值呈负相关,男性腹型肥胖者的血清T明显低于正常体型者。

血清Glycodelin-A水平对宫腔内人工授精妊娠结局的作用

目的 Glycodelin-A是子宫内膜腺上皮细胞分泌的一种糖蛋白,其在胚胎着床以及植入期抑制母体对胚胎的免疫排斥反应、维持妊娠中发挥重要作用,并有望成为评价子宫内膜容受性、预测妊娠结局的一个重要指标。文中探讨宫腔内人工授精(intrauterine insemination,IUI)周期中,HCG日检测血清Glycodelin-A水平与子宫内膜容受性之间的关系及其对妊娠结局的影响。方法选择2012年10月至2014年2月在南京军区南京总医院生殖医学中心门诊就诊的女性患者共107例。纳入研究条件为接受IUI治疗且须双侧输卵管检查证实通畅,排除子宫内膜病变、子宫内膜息肉以及宫腔粘连。根据妊娠结局分为妊娠组和非妊娠组。采用ELISA方法检测IUI患者HCG日血清Glycodelin-A水平,化学发光免疫法检测血清雌二醇、孕酮、黄体生成素水平,同时经阴道超声评价子宫内膜情况。结果 HCG日妊娠组血清Glycodelin-A[(1.47±0.38)ng/m L]较未妊娠组血清[(0.62±0.13)ng/m L]显著升高(P<0.05),子宫内膜厚度<7 mm的患者较≥7 mm的患者HCG日血清Glycodelin-A水平显著降低[(0.51±0.17)ng/m L vs(1.53±0.49)ng/m L,P<0.05]。结论 HCG日血清Glycodelin-A水平在一定程度上反映了子宫内膜的容受性,对IUI后妊娠结局的预测具有一定参考价值。

StarD7与Wnt/β-catenin信号通路对Annexin 5刺激大鼠Leydig细胞睾酮分泌的影响

目的:研究StarD7以及Wnt/β-catenin信号通路促进睾酮合成的内在机制,探索睾酮合成的调控新途径。方法:用1 nmol/L的Annexin 5处理大鼠原代Leydig细胞24 h,化学发光法检测睾酮含量,利用RT-PCR和Westernblot方法分析StarD7和β-catenin在mRNA和蛋白水平上的表达变化,并利用免疫荧光法对β-catenin进行定位。结果:在Annexin 5的刺激作用下,与对照组相比,睾酮合成水平明显增加了176%[(7.83±0.32)vs.(21.6±1.1),P<0.05];在Annexin 5作用下,与对照组相比,StarD7在mRNA水平表达增加55%[(1.12±0.08)vs.(1.74±0.11),P<0.05],β-catenin表达增加48%[(1.15±0.08)vs.(1.70±0.05),P<0.05]。在蛋白水平上,与对照组相比,StarD7增加42%[(1.06±0.09)vs.(1.51±0.07,P<0.05)],β-catenin增加55%[(1.02±0.01)vs.(1.58±0.02),P<0.05],此外在Annexin 5作用下,β-catenin有入核积聚的趋势。结论:在Annexin 5作用下,StarD7和β-catenin的表达均有显著增加,且β-catenin有入核积聚的趋势,提示StarD7和β-catenin对Annexin 5刺激Leydig细胞睾酮的合成均有调控作用,该过程可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路,从而促进StarD7表达上升,最终导致睾酮合成增加。

男性不育患者精液pH值与精液参数相关性分析

目的探讨不育患者精液pH值与精液参数的相关性,为男性不育症的诊断与治疗提供临床依据。方法将2014年4-9月就诊的122例男性不育患者予pH计检测精液pH值、计算机辅助的精液分析系统（CASA）分析精液常规参数、流式细胞仪分析精子DNA碎片指数（DFI）、ELISA检测精浆弹性蛋白酶,分析精液pH值与精液参数、DFI及精浆弹性蛋白酶等的相关性。结果不育患者精液pH值5.5-8.2,精液pH值与精子浓度呈正相关（r=0.244,P〈0.05）,与精浆弹性蛋白酶也呈正相关（r=0.190,P〈0.05）,而与精液量、前向运动精子百分率、精子活动率、DFI及正常形态精子百分率均无相关性（P〉均0.05）。结论不育患者精液pH值和精子浓度及精浆弹性蛋白酶均呈相关性,提示精液pH值的准确测定可能对男性不育的诊断和治疗有一定临床意义。

Annexin 5对雄性SD大鼠应激损伤的保护作用

目的研究膜联蛋白5(annexin 5,A5)对坐骨神经选择性损伤引起的慢性疼痛应激致雄性SD大鼠生殖损伤的保护作用。方法 32只雄性SD大鼠随机分为4组,分别建立对照组、假手术组、手术组和手术+A5组模型。手术+A5组于术后第2天腹腔注射15μg/kg剂量的A5,其他实验组腹腔注射等量的pH 8.0 Tris-HCl,每日1次,连续21 d。分别测各组SD大鼠体重、称重睾丸和附睾,计算其脏器系数,并对附睾尾进行精子计数。HE染色观察睾丸组织结构变化。用化学发光法检测各组大鼠血清中睾酮浓度。结果手术组大鼠与对照组相比,睾丸系数、附睾系数以及精子相对计数均降低(P<0.05);睾酮水平下降显著[(5.10±2.61)vs(22.40±4.30)mmol/L,P<0.01)];病理切片见睾丸生精细胞与腔内精子数量明显减少。假手术组大鼠与对照组比,上述指标均无统计学差异。手术+A5组与手术组比,精子相对计数与睾酮含量[(19.67±2.02)vs(5.10±2.61)mmol/L,P<0.01]均显著提高,其他参数均有不同程度的恢复,睾丸生精细胞与腔内精子数量减少程度显著恢复。结论 A5对慢性疼痛应激引起的生殖损伤具有一定的保护作用。

双通道组合测角系统的温漂误差抑制方法

高精度的惯导测试设备常用感应同步器作角位置测量元件,与一对极旋转变压器一起组成粗精组合测角系统。在实际工作环境中,由于温度的变化,鉴相型粗精组合测角系统存在着动态温漂误差,限制了系统的使用范围。通过对系统工作原理和动态温漂误差产生原因的分析,提出了动态温漂误差的抑制方法,在硬件上优化了滤波器设计,在软件上提出并实现了一种新的组合测角算法,实现了高稳定性高精度的角度测量。经过分析和试验,证明以上措施可有效抑制正负0.5o以内的温漂误差。

Annexin 5对人精子线粒体功能的影响

目的观察膜联蛋白5(annexin5)对人精子线粒体功能的影响。方法收集38例少弱精症患者精液标本。精子与an-nexin5共温育,用罗丹明(Rh123)和碘化吡啶(PI)染色并用流式细胞术检测人精子线粒体功能。结果添加annexin5组与对照组相比,线粒体功能良好的活精子百分率[(38.77±9.20)%vs(26.12±10.09)%,P<0.05]和线粒体荧光值[(509.72±45.02)vs(452.88±39.39),P<0.05]均有显著性升高。结论体外添加annexin5能增强精子线粒体的活性。

甲状腺激素阴茎神经电生理诱发早泄的作用机制

目的甲状腺激素功能改变影响男性性功能的具体生理机制尚不明确。文中旨在探讨甲状腺激素通过影响阴茎神经电生理而诱发早泄的作用。方法回顾性分析2015年10月至2016年12月于南京总医院男科门诊就诊,并诊断为继发性早泄患者52例(早泄组),同期来院进行体检的24名健康男性作为对照组。所有被纳入者经过男科体检及甲状腺激素检验。此外,继发性早泄患者经过阴茎交感皮肤反应(PSSR)检查,根据PSSR潜伏期长短,将早泄组分为PSSR正常组及异常组。结果早泄组总四碘甲状腺原氨酸(TT4)水平显著高于对照组,差异有统计学意义[(92.68±11.56)nmol/L vs(102.81±18.37)nmol/L,P=0.018)];与PSSR正常组相比,异常组的TT4及游离四碘甲状腺原氨酸(FT4)水平均显著增高,分别为[(95.72±12.42)nmol/L vs(113.28±20.89)nmol/L,P<0.01]和[(10.81±1.63)nmol/L vs(12.02±0.88)nmol/L,P=0.003]。FT4与PSSR潜伏期呈负相关(r=-0.363,P=0.008),与PEDT呈正相关(r=0.455,P=0.001)。结论继发性早泄患者异常的PSSR可能与甲状腺激素的水平升高相关;调节伴有异常PSSR的继发性早泄患者的甲状腺激素水平有利于改善其早泄症状。

人精子过氧化氧化还原蛋白2表达与精子DNA损伤的相关性

目的精子DNA损伤的分子机制尚不明确。文中旨在通过检测精子DNA正常者和精子DNA损伤患者过氧化氧化还原蛋白2(Prdx2)表达差异,分析Prdx2表达与精子DNA损伤指数(DFI)的相关性。方法收集2017年7月至2018年7月南京军区南京总医院生殖医学中心门诊67份男性不孕患者的精液标本。按DFI值分为3组:DFI正常组(DFI≤15%,n=38)、轻度损伤组(15%<DFI<30%,n=20)和重度损伤组(DFI≥30%,n=9)。通过计算机辅助精子分析系统(CASA)进行精液检测,获得精液常规参数:前向运动精子百分率(PR)、精子密度及精子总活率。提取精子中的总蛋白,Western blot检测Prdx2的表达,免疫荧光检测精子中Prdx2的定位。并分析Prdx2表达与DFI、精液常规参数的相关性。结果与DFI正常组Prdx2相对表达水平(9.06±1.80)比较,轻度损伤组(6.32±1.89)和重度损伤组(2.87±0.83)分别下降了30.2%、68.2%,差异有统计学意义(P<0.01)。免疫荧光结果显示,Prdx2主要定位于人精子中段线粒体以及精子头部核区域;重度损伤组和轻度损伤组Prdx2表达较DFI正常组均降低,其中重度损伤组的Prdx2阳性反应明显减弱。Prdx2蛋白表达与DFI呈负相关(r=-0.478,P<0.01),与PR、精子总活率呈正相关(r=0.135、0.128,P<0.01)。结论 Prdx2对精子DNA损伤患者中DNA完整性的影响可能通过维持细胞内氧化还原平衡,参与保护精子DNA免受损伤,同时影响精子运动能力来实现。

Omega-3多不饱和脂肪酸改善奥硝唑致少弱精子症雄性小鼠精子发生的作用机制

目的探讨Omega-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)对小鼠精子发生改善作用的机制。方法18只6周龄C57BL/6J雄性小鼠随机数表法分为对照组、少弱精子症组和Omega-3 PUFAs挽救组,每组6只。用奥硝唑造少弱精子症模型。取附睾尾测精子浓度和活动率;ELISA法检测生殖激素水平[血清促卵泡生成激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、抑制素B(INHB)、睾酮(T)];HE染色观察睾丸和附睾组织结构;组织免疫荧光和逆转录-荧光定量PCR(RT-qPCR)分析小鼠生精细胞Marker基因(DDX4、Lin28、C-Kit、SYCP3、Tex21、Tnp1)的表达变化;精母细胞染色质铺展和免疫荧光实验观察小鼠精母细胞减数分裂情况;RT-qPCR和蛋白质免疫印迹检测小鼠睾丸抗氧化应激基因的mRNA和蛋白表达水平变化。结果与少弱精子症组比较,Omega-3 PUFAs挽救组小鼠的精子浓度与活动率显著提高(P<0.01);血清中FSH、LH、INHB、T水平均无显著变化(P>0.05);睾丸结构改善,生精细胞数量与腔内精子数量显著增加,附睾结构也得到改善,腔内精子数量增加;生精细胞Marker(DDX4)阳性细胞数量增加,精母细胞Marker(SYCP3)、圆形精子细胞Marker(Tex21)和长形精子Marker(Tnp1)基因的mRNA表达水平显著升高(P<0.01),减数分裂过程中细线期(P<0.01)、偶线期(P≤0.05)和粗线期(P≤0.05)的精母细胞比例恢复正常;抗氧化应激基因HO-1的mRNA表达水平有上升的趋势(P>0.05),NQO1、SOD3和CAT的mRNA表达水平均显著升高(P<0.01),Nrf2和HO-1的蛋白表达水平也显著升高。结论Omega-3 PUFAs可能通过提高睾丸抗氧化应激水平,改善精母细胞减数分裂过程,进而维持精子发生的正常进程。

单细胞测序技术在男性不育病因研究及诊疗应用中的进展

男性不育病因复杂,且精确诊疗困难,单细胞测序技术为男性不育相关研究提供了新的思路。该技术提供了单个细胞水平庞大的mRNA等组学信息,有利于分析男性不育疾病中的关键基因、重要信号通路、新细胞类型、细胞分化方向及细胞相互作用等。近年来,单细胞测序技术在高促性腺激素型性腺功能减退症、克莱恩费尔特综合征、2型糖尿病、非梗阻性无精子症、梗阻性无精子症、勃起功能障碍等男性不育疾病中显示出较高的病因研究及精确诊疗应用价值。该文从病因机制、特殊细胞类型、潜在的诊断标志物及治疗靶点等角度对单细胞测序技术在男性不育疾病中的应用进行综述。

二十二碳六烯酸(DHA)通过PPARγ/Nrf2通路保护氧化应激对精母细胞线粒体功能及DNA损伤的作用机制

目的探讨二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic Acid,DHA)对精母细胞的线粒体功能及DNA损伤的影响及作用机制。方法培养GC2精母细胞,用不同浓度(0、50、100、200、400μmol/L)的过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))处理2 h,通过检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)确定构建氧化应激模型的最佳H_(2)O_(2)浓度。培养GC2精母细胞,添加不同浓度(25、50μmol/L)的DHA孵育24 h后,再给予H_(2)O_(2)(200μmol/L)处理2 h,分为Control组、H_(2)O_(2)组、DHA低浓度组(25μmol/L)和DHA高浓度组(50μmol/L)。GW9662(10μmol/L)是过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的不可逆抑制剂,与DHA同时处理细胞。流式细胞术检测MMP,荧光酶标法检测胞内ATP含量,免疫荧光检测胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)和γ-H2AX荧光强度。逆转录-荧光定量PCR(RT-qPCR)检测过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(PGC1α)、肉毒碱棕榈酸转移酶1α(CPT1α)、谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)、超氧化物歧化酶2(SOD2)的mRNA水平,蛋白质免疫印迹检测PGC1α、CPT1α、磷酸化DNA复制检查点激酶1(p-CHK1)、p-p53、PPARγ及核因子NF-E2相关因子(Nrf2)蛋白的表达变化。结果与Control组相比,200和400μM浓度的H_(2)O_(2)处理后,GC2细胞的MMP显著下降(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,DHA低浓度组、DHA高浓度组的MMP和胞内ATP含量上升(P<0.05)、胞内ROS浓度和DNA损伤降低,PGC1α、CPT1α、GPX4、SOD2的mRNA水平均显著上升(P<0.05),p-CHK1、p-p53蛋白表达量显著下降,PPARγ及Nrf2蛋白表达量显著上升(P<0.05);与DHA高浓度组相比,GW9662组MMP、胞内ATP含量、Nrf2、PGC1α、CPT1α蛋白表达量显著降低(P<0.05),胞内ROS浓度、DNA损伤、p-CHK1、p-p53蛋白表达量显著上升。结论DHA可能通过上调PPARγ/Nrf2通路来增强精母细胞的能量代谢和抗氧化作用。本研究为临床上通过多不饱和脂肪酸治疗由氧化应激导致的男性不育提供了理论依据和潜在靶点。

促胰液素对早期妊娠小鼠子宫内膜基质细胞cPLA_2和mPGEs-1表达的影响

促胰液素(secretin)属于一种胃肠肽,已证实它在早期妊娠小鼠子宫内膜基质细胞中有表达。本文旨在进一步研究促胰液素在胚胎着床过程中的功能。通过real-time PCR、ELISA和原位杂交方法检测促胰液素、促胰液素受体、胞质型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,c PLA2)和膜相关的前列腺素E合成酶-1(membrane prostaglandin E synthase 1,m PGEs-1)在小鼠妊娠第4到8天子宫中的表达。体外培养妊娠第4天小鼠子宫基质细胞,转染促胰液素表达质粒,使用PKA抑制剂H89处理,24 h收集细胞。Real-time PCR和Western blot检测c PLA2、m PGEs-1和环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMP responsive elementbinding protein,CREB)的表达,ELISA方法分析细胞上清液中前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)的水平。结果显示促胰液素、c PLA2和m PGEs-1的m RNA在妊娠第5到7天着床点表达量逐渐增加,表达趋势一致。促胰液素在妊娠第6、7、8天血清中的含量显著高于第5天的含量,并且在第6到7天着床点中的含量明显高于第5天非着床点含量。转染促胰液素表达质粒,促进小鼠子宫基质细胞c PLA2、磷酸化c PLA2(p-c PLA2)和m PGEs-1的表达,但对PGE2没有明显的诱导。H89能明显降低促胰液素对CREB、磷酸化CREB(p-CREB)、c PLA2和p-c PLA2的诱导。以上结果表明在小鼠胚胎着床过程中促胰液素在子宫内膜基质细胞中表达量增加,促进p-c PLA2、c PLA2和m PGEs-1的表达,并通过PKA信号通路调节c PLA2/p-c PLA2的水平。