全外显子组测序对性发育异常患者的分子遗传学病因分析

目的通过全外显子组测序(WES)技术分析性发育异常(DSD)患者的分子遗传学病因,以加深对DSD致病机制的认识。方法收集2008年3月-2021年8月于云南省第一人民医院就诊的60例DSD患者的临床资料进行回顾性分析,并对其中1个先证者进行家系研究。提取所有患者的外周血基因组DNA进行WES测序分析,WES结果利用SAMtools软件、单核苷酸多态性(SNP)数据库、InDel数据库进行SNP和InDel检测;采用ExomeDepth进行外显子水平的拷贝数变异(CNV)检测;应用PolyPhen-2、Mutation taster、PyMol软件进行突变的有害性预测,并采用Sanger进行测序验证。结果60例DSD患者中,22例为46,XX DSD,38例为46,XY DSD。22例46,XX DSD患者中14例存在SRY基因;在另外8例患者和其中1个先证者家系中,2例患者的NR5A1、PROKR2和ANOS1基因发生单核苷酸变异(SNV),4例患者中的CYP21A2基因发生CNV,其中CYP21A2 EX1 Dup已有该变异的相关致病性报道,其余3个CNV为意义未明的变异,2例未检出与DSD相关的基因突变位点。38例46,XY DSD患者WES分析结果中,14例中检出了10个致病或疑似致病变异位点,包括SRY、AR、SRD5A2、CYP17A1、NR5A1等5个基因;5例中检出CYP21A2、AKR1C2、CBX2、NR5A1基因的5个疑似致病的CNV,其中3个微缺失,2个微重复。WES结果中NR5A1(c.722G>T、c.48C>G)、ANOS1 c.564A>T变异为首次报道的位点,在检出的CNV中,CYP21A2 EX1 Dup在相关数据库中有致病性的报道,其余未见报道。结论WES技术的应用提高了对DSD的诊断能力,拓展了现有的DSD相关致病基因突变谱数据,丰富了对DSD致病机制的认识,可为开展遗传咨询提供帮助。

中国云南汉族和傣族育龄人群的地中海贫血基因分析

目的:了解云南汉族和傣族育龄人群地中海贫血(简称地贫)的常见基因突变类型。方法:对血液学筛查阳性的小细胞低色素携带者或贫血患者DNA样本,采用Gap-PCR方法和PCR-寡核苷酸探针反向斑点杂交法检测α-或β-珠蛋白基因常见突变类型;采用DNA直接测序法检测可能存在的未知突变;统计分析云南汉族和傣族人群中珠蛋白突变的类型。结果:在685例受检者中共检出40种基因型,其中α-地贫携带者前3位的基因型分别是--^(SEA)/αα(占49.09%)、-α^(3.7)/αα(36.67%)和α^(CS)α/αα(8.79%);β-地贫携带者前3位的基因型分别是CD26(GAG>AAG)/N(43.78%)、CD41-42(-CTTT)AA(20.1%)和CD17(AAG>TAG)/N(18.9%)。在685例样本中,汉族348例,傣族212例,这2个民族的珠蛋白基因常见突变顺位各有不同,但傣族人群中地中海贫血基因突变类型比较集中。在38例α-地中海贫血复合β-地中海贫血双重杂合子中,傣族就有28例。结论:云南人群中α-和β-珠蛋白基因突变类型的多样性较为丰富,突变谱与国内其他地区的人群不同。

脊髓性肌萎缩症患儿SMN1和SMN2基因拷贝数与临床表型的相关性分析

目的对脊髓性肌萎缩症(SMA)患儿的运动神经元存活基因1(SMN1)和SMN2拷贝数与临床表型之间的关系进行分析,提高对SMA患儿的早期诊断和临床干预水平。方法选取45例SMA患儿,应用多重连接依赖性探针扩增技术对SMN1和SMN2基因拷贝数进行检测,分析SMN基因拷贝数同临床表型之间的关系。结果 45例SMA患儿中,SMN1第7和8外显子纯合缺失者为42例,占93%(42/45);仅有第7外显子缺失者为3例,占7%(3/45)。SMA不同临床分型和SMN1基因第7、8外显子缺失类型间无相关性(P>0.05);SMA患儿和健康儿童的SMN2基因拷贝数分布差异有统计学意义(P<0.05),前者以2和3拷贝者居多,后者以1和2拷贝者居多;不同SMA临床分型间SMN2拷贝数分布差异有统计学意义(P<0.05),SMN2基因为2拷贝者发病年龄明显小于3和4拷贝者。Ⅰ型SMA患儿中SMN2拷贝数以2或3拷贝者居多,Ⅱ型以3拷贝者居多,Ⅲ型以3或4拷贝者居多。随着SMN2拷贝数增加,患儿发病年龄越大,保有的运动功能和临床结局越好,SMN2基因拷贝数同临床结局间的关系存在显著性差异(P<0.05)。结论 SMN2基因通过剂量补偿效应减轻SMA疾病严重程度,SMN2拷贝数同SMA临床表型具有相关性,可将其作为预测疾病严重程度的依据之一。

云南汉族15个短串联重复序列基因座遗传多态性特征及分析

目的：调查云南地区汉族的D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539、D2S1338、D19S433、VWA、TPOX、D18S51、D5S818、FGA 15个短串联重复序列（Short tandem repeat,STR）基因座的遗传多态性。方法：收集云南汉族313名无关个体血样,提取DNA,PCR复合扩增并利用ABI-3130型基因分析仪进行毛细管电泳检测每个样本各基因座的等位基因大小,分别统计每个STR基因座各基因型的频率,并进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验。结果：云南汉族这15个STR基因座各基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡（P〉0.05）,杂合度在0.636～0.901,匹配概率在0.034～0.220,单一STR位点的个体识别率在0.780~0.966、非父排除率在0.336～0.797、多态性信息总量在0.555～0.860,联合使用这15个位点所产生的累积个体识别率大于0.999 999 99,累积非父排除率等于0.999 998 408。与中国其他地区汉族群体这15个STR基因座等位基因频率分布相比有较高的相似性,但也有轻微的地区差异。结论：云南汉族的D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539、D2S1338、D19S433、VWA、TPOX、D18S51、D5S818、FGA这15个STR基因座具有高度的多态性,与中国其他地区汉族群体有较高的相似性,在法医学中的亲子鉴定和个人识别方面具有较高应用价值。

软骨发育不全患者的FGFR3基因诊断

目的建立软骨发育不全(ACH)患者的FGFR3基因检测方法。方法用PCR扩增和测序技术对临床上疑似ACH的14例患者的FGFR3基因突变进行测序。结果 FGFR3基因的外显子10测序结果显示,14例疑似ACH患者中10例检出FGFR3基因1138位G→A突变。对4例未检出突变的样本进行FGFR3基因的全部外显子测序,有2例样本检出FGFR3基因882位T→C杂合突变,最后确定其为已知的单核苷酸多态性(SNP)位点(rs2234909)。对4例样本中的1例进行了后续检查,证实该受检者不是ACH患者。结论 FGFR3基因的突变检测有助于疑似ACH患者的明确诊断,对遗传咨询具有重要意义。

一例Bainbridge-Ropers综合征患儿遗传病因分析

目的:运用遗传学检测方法分析一例具有重度发育迟缓合并先天性心脏病等多发畸形的罕见病患儿的遗传学病因。方法:采集患儿病史、进行临床辅助检查,提取患儿及父母的外周血基因组DNA。用Agilent SureSelect系统构建患儿DNA全外显子组测序文库,用Illumina平台进行测序,对检测到的疑似致病突变在患者及其父母亲血样中进行Sanger测序法验证。结果:全外显子组测序和家系验证发现患儿ASXL3基因存在c.1349dupT;p.I450fs杂合移码突变,为新发突变,根据ACMG变异解读标准与指南判定该变异为致病变异,该突变国内外未见报道。患儿具有喉骨软化、手指背屈特征,目前尚无Bainbridge-Ropers综合征(Bainbridge-Ropers syndrome,BRS)患者携带上述表型的报道。同时患儿DCHS1基因携带已知二尖瓣脱垂2(mitral valve prolapse 2,MVP 2)杂合致病突变c.G7538A;p.R2513H,该突变已经过细胞和动物试验验证。敲除DCHS1基因可导致斑马鱼房室管畸形,因此DCHS1基因c.G7538A突变可能与患儿房间隔缺损(asparagine,Asn)有关。DCHS1基因突变遗传自患儿父亲,但其父经超声心动图和心电图检查未见心脏结构及功能异常,该致病突变在本家系中外显不全。结论:本研究丰富了ASXL3基因的致病突变谱和BRS表型谱,第一次报道了携带多个致病突变的BRS患者。

新世纪以来上海市形成全域创新的进展与前沿——基于CiteSpace和VOSviewer的文献计量

创新是高质量发展的动力源泉,城市是区域创新的重要载体。上海国际化水平较高,为了更好完善上海高效能创新网络与治理,也为提升上海向具有全球影响力的科技创新中心进军的步伐,文章以CNKI中国知网数据库2012~2022年关于全域创新领域的1354篇文献为基础,借助CiteSpace、VOSviewer等可视化工具,综合运用共现分析、关键词突现性分析、聚类分析图谱及时间线图谱分析相结合的方法绘制关于上海形成全域创新格局的知识图谱并展开研究。结果表明:在新时代上海地区建设“创新之城”上升为国家战略的背景下,分析其建设面临的主要问题。展望未来中国创新型城市研究、创新型实践路径研究,基于创新空间布局、创新要素的空间分布等进行分析,聚焦领域前沿,探究上海全域创新空间集聚、形成机制和演化规律。希望文章可以为我国创新型城市的理论研究和规划建设提供思考和借鉴。

多元共治的网络化治理研究述评:2001~2022

治理就是对网络的管理,网络化治理有利于解决当今出现的一系列复杂、动态、相互依赖的公共难题,它强调多主体平等、相互依赖、民主协商的合作网络模式,打破了传统自上而下的管理;与市场制、层级制相比有不可比拟的优势,越来越被学界所重视。文章以CNKI中国知网数据库2012~2022年关于全域创新领域的652篇文献为基础,借助CiteSpace、VOSviewer等可视化工具,综合运用共现分析、关键词突现性分析、聚类分析图谱及时间线图谱分析相结合的方法绘制关于多元共治的网络化治理的知识图谱并展开研究。分析梳理国内学者关于网络化治理理论的研究文献,在此基础上进行比较分析,阐述目前国内研究中存在哪些不足;最后对其进行评述与展望,试图以网络化治理理论探索国内基层社会的治理创新,通过构建政府、社会、公民等主体多元合作网络,实现对社会的“善治”,为当下集体行动的困境提出对策建议。

HBG基因启动子区rs368698783、rs7482144位点多态性与HbF表达相关

目的探讨云南β-地中海贫血(地贫)患者rs368698783和rs7482144多态性位点与胎儿血红蛋白(HbF)表达的相关性。方法收集β-地贫样本51例,HbE纯合样本40例,HbF>5%(β^(N)/β^(N))样本113例,HbF>5%(β^(M)/β^(N))样本113例,对照组262例,共579例样本。采用Sanger测序法对rs368698783及rs7482144位点进行检测,比较各组血液学参数、突变基因检出率和最小等位基因频率(MAF),分析该多态性位点与HbF水平之间的关系。结果非输血依赖性β-地贫患者的rs368698783与rs7482144位点的突变基因检出率和MAF显著高于对照组(P<0.05)。HbE纯合样本的rs368698783与rs7482144位点的突变基因检出率和MAF显著高于对照组(P<0.001)。HbF>5%(β^(N)/β^(N))、HbF>5%(β^(M)/β^(N))样本rs368698783与rs7482144位点突变基因检出率和MAF显著高于对照组(P<0.001)。结论rs368698783与rs7482144位点的多态性与HbF水平升高有关,并且与HbE突变存在相关性,rs368698783的A等位基因与rs7482144位点的T等位基因可以减轻β-地贫的贫血程度,缓解β-地贫的临床症状。

老年人健康行为对其健康生活方式的影响研究——基于cgss2017年数据

基于“中国综合社会调查”2017年截面数据,研究老年人健康行为对其健康生活方式的影响。研究结果发现体育运动行为、心理健康行为对老年人健康生活方式有显著影响。体育运动行为倾向、心理健康行为倾向越高的老年人,越不会由于健康问题影响工作或其他日常活动,其生活方式也越科学合理和健康。可见,老年人健康行为能够对其生活方式产生直接、显著的影响,不健康的生活方式能够通过保持健康行为去改变。此外,本文还发现老年人的受教育程度、婚姻状况等个体特征也是健康生活方式的重要影响因素。

产前诊断中采用拷贝数变异测序技术检测胎儿DMD基因缺失或重复的效能

目的评估产前诊断中采用低深度高通量全基因组拷贝数变异测序(CNV-seq)技术对胎儿DMD基因缺失或重复的诊断效能。方法对2018年1月至2023年7月于云南省第一人民医院行产前诊断的34544例胎儿的CNV-seq检测结果进行回顾性分析,共纳入156例胎儿,包括:有假性肥大型进行性肌营养不良[DMD;包括表型较轻的贝氏肌营养不良(BMD)]生育史或家族史的胎儿125例;无DMD/BMD生育史或家族史但因其他指征行产前诊断检出DMD基因缺失或重复的胎儿31例。采用多重连接依赖性探针扩增(MLPA)技术对胎儿样本进行检测验证,对CNV-seq和MLPA结果进行一致性检验,获得CNV-seq对胎儿DMD基因缺失或重复的检测效能。结果与MLPA相比,CNV-seq对胎儿DMD基因缺失或重复的检出总符合率为92.3%(144/156),敏感度和阳性预测值均为88.2%,特异度和阴性预测值均为94.3%,漏检率为3.8%,Kappa系数为0.839。有DMD/BMD生育史或家族史的胎儿中,MLPA共检出20例缺失和6例重复,其中4例缺失和2例重复因变异片段<100 Kb被CNV-seq漏检。无DMD/BMD生育史或家族史的胎儿中,CNV-seq检出缺失占42%(13/31),重复占58%(18/31),重复占比高于有DMD/BMD生育史或家族史的胎儿,其中3例位于第42~67号外显子(可能致病),9例覆盖DMD基因5’或3’末端,均包含第1或第79号外显子(临床意义未明),其余6例CNV-seq检出重复片段位于chrX:32650635_32910000(临床意义未明),但MLPA检测结果均为阴性。结论CNV-seq可有效检出胎儿DMD基因缺失或重复,但存在少量漏检风险,结果需MLPA验证。CNV-seq检测到chrX:32650635_32910000区域重复及检出覆盖DMD基因5′端或3′端重复的变异可能并不致病。

云南地区3049名育龄人群脊髓性肌萎缩症携带者筛查结果分析

目的对云南地区3049名育龄人群进行脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)的携带者筛查,探讨本地区人群运动神经元存活基因(survival motor neuron,SMN)的拷贝数情况及携带频率。方法应用多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)对SMN1及SMN2基因第7外显子的拷贝数进行检测,筛查出SMN1基因第7外显子拷贝数为1的SMA携带者。对双方均为携带者的夫妇提供产前诊断。结果在3049名育龄人群中,共检测出SMA携带者62例,携带率为1/49(2.03%)。男性携带率为1.91%(40/2094),女性携带率为2.30%(22/955),二者的差异无统计学意义(P>0.05)。SMN1杂合缺失占1.30%(41/3049),由SMN1转换为SMN2者占0.69%(21/3049)。SMN1等位基因的平均拷贝数为1.99。检出双方均为SMA携带者的夫妇2对,通过产前诊断避免了1例患病胎儿的出生。结论云南地区SMA男女携带者的频率无显著差异,符合常染色体隐性遗传模式。阐明SMA携带者的频率和SMN基因的拷贝数情况,可为遗传咨询和产前预防提供依据。

云南省地中海贫血的血液学初筛与分析

目的通过血液学表型筛查初步了解云南省各地人群地中海贫血的流行病学现状。方法收集云南省各地州人群样本进行血常规和血红蛋白电泳检测,统计分析各地区人群小细胞低色素贫血患者和携带者频率。结果共检测云南省少儿组与成人组合计19477例,成人组地贫携带率为9.40%,携带率最高的州市分布在靠近西南边境的少数民族自治州,依次为德宏州(42.48%)、西双版纳州(22.12%)和文山州(18.69%);全省各州市地贫携带率及携带类型有明显差异,少儿组中异常Hb携带率显著高于成人组的携带率。结论云南全省为地贫高发区,德宏州、西双版纳州和文山州为特别高发地区,是对当地儿童健康造成影响的重要疾病;联合血常规和血红蛋白电泳检测可减少漏筛地贫携带者的几率。

软骨发育不全的研究进展

软骨发育不全（Achondroplasia,ACH）又称胎儿型软骨营养障碍、软骨营养障碍性侏儒。ACH是一种最常见的遗传性侏儒,在新生儿中发病率约为1/15 000～1/77 000,属于常染色体显性遗传病,外显率为100%。在ACH患者中约80%～90%由新生突变所引起,其发生与父龄较大有关,另外10%～20%是由家族遗传所致〔1〕。成年ACH患者身材矮小,