α7nAChR抑制MyD88依赖性Zonulin释放改善脑梗死大鼠肠道炎症和肠屏障损伤

目的:观察α7型烟碱乙酰胆碱受体(α7nAChR)激动剂PNU282987对脑梗死大鼠肠道炎症和肠屏障损伤的影响。方法:将36只雄性SD大鼠随机分为假手术(sham)组、中脑动脉栓塞(MCAO)组和PNU282987组。MCAO组和PNU282987组采用Longa改良线栓法制备MCAO模型,PNU282987组腹腔注射1 mg/kg PNU282987,连续7 d。苏木精—伊红(HE)染色观察肠道黏膜病理改变,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结肠组织肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-6)水平及血清二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(DLA)、内毒素(ET)水平,免疫组化法检测结肠组织Toll样受体2(TLR2)蛋白表达,western blotting法检测结肠组织紧密连接关键蛋白咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白(Claudin-1)、连蛋白(Zonulin)、带状闭合蛋白(ZO-1)、TLR2、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)和磷酸化NF-κB(p-NF-κB)蛋白表达。结果:与sham组比较,MCAO组大鼠肠上皮脱落、肠绒毛排列紊乱及黏膜下层炎性浸润,血清DAO、DLA、ET水平及结肠组织TNF-α、IL-6含量显著增高,结肠组织Occludin、Claudin-1、ZO-1蛋白表达显著下调,Zonulin、TLR2、MyD88、p-NF-κB蛋白表达显著上调(均P<0.05)。与MCAO组比较,PNU282987组大鼠肠上皮损伤减轻,血清DAO、DLA、ET水平及结肠组织TNF-α、IL-6含量显著降低,结肠组织Occludin、Claudin-1、ZO-1蛋白表达显著上调,Zonulin、TLR2、MyD88、p-NF-κB蛋白表达显著下调(均P<0.05)。结论:PNU282987可以显著改善脑梗死大鼠肠道炎症及肠屏障损伤,其机制可能与抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路有关。

电针足三里、内关穴对大鼠缺血性损伤后神经可塑性相关因子GAP-43和SYN的影响

目的探讨电针(electroacupuncture,EA)治疗足三里、内关穴对脑缺血大鼠神经可塑性因子GAP-43、SYN和MAP-2的影响。方法将80只大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham)组、EA 3 d组、大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)3 d组、EA 14 d组、MCAO 14 d组,每组16只。除Sham组外,其余组采用Longa线栓法构建MCAO大鼠模型,EA组术后每日治疗“足三里”和“内关”穴20 min。平衡木试验评估大鼠运动功能,Western blot法检测梗死对侧大脑皮层中神经可塑性因子GAP-43、SYN蛋白的表达,实时荧光定量PCR法检测GAP-43、SYN mRNA的表达,免疫荧光法检测GAP-43/MAP-2、SYN/MAP-2的共定位表达。结果与Sham组相比,MCAO组在各时间点平衡木试验评分显著升高(P<0.05),MCAO 3 d组(P<0.05)和14 d组(P<0.05)的GAP-43、SYN mRNA表达均显著降低,MCAO 14 d组(P<0.05)的SYN/MAP-2共定位平均光密度表达显著减少,GAP-43和SYN蛋白表达在MCAO 3 d组和14 d组均未见明显差异;与MCAO组相比,EA组在1 d、3 d、7 d时平衡木试验评分未见明显差异,14 d时平衡木试验评分显著降低(P<0.05),与MCAO 3 d组相比,EA 3 d组GAP-43、SYN mRNA的表达均显著升高(P<0.05),与MCAO 14 d组相比,EA 14 d组的GAP-43、SYN mRNA表达均显著增加(P<0.05),以及GAP-43和SYN蛋白表达均显著增加(P<0.05),GAP-43/MAP-2、SYN/MAP-2的共定位平均光密度均显著增加(P<0.05)。结论EA刺激“足三里”和“内关”穴可改善缺血性损伤后运动功能,其机制可能与促进神经可塑性因子的表达来诱导轴突萌发,进而激活损伤后的神经可塑性有关。

电针“内关”和“足三里”对脑梗死大鼠神经损伤修复及Orexin-A、炎性因子表达的影响

目的:观察电针“内关”和“足三里”对脑梗死大鼠神经损伤修复及食欲素A(Orexin-A)、血清炎性因子表达的影响。方法:54只成年雄性SPF级大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,电针组和模型组制备大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,24 h后电针组大鼠取双侧“内关”和“足三里”电针治疗14 d。假手术组仅做颈部皮肤切开缝合处理。各组做神经功能缺损评分、称重,取材后行TTC、HE和尼氏染色,蛋白印记和荧光定量PCR检测Orexin-A表达。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清Orexin-A、血清炎性因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)等。结果:与假手术组相比,模型组神经功能缺损评分和脑梗死体积升高,体重降低(P<0.05),模型组神经元数量、血清Orexin-A表达和脑组织Orexin-A蛋白及mRNA表达量明显降低,血清炎性因子水平明显升高(P<0.01);与模型组相比,电针组神经功能缺损评分和脑梗死体积降低,体重升高(P<0.05),电针组神经元数量、血清Orexin-A表达和脑组织Orexin-A蛋白及mRNA表达量明显升高,血清炎症因子水平明显降低(P<0.01)。模型组大鼠脑组织完整神经细胞数量减少,细胞胞核分离,电针组神经细胞形态相对完整,趋于正常。结论:电针疗法可以改善脑梗死大鼠的神经功能缺损情况,减小脑梗死体积,改善体重情况,其机制可能与调节Orexin-A水平,抑制血清炎性因子产生,促进神经损伤修复有关。

电针足三里、内关穴抑制mTOR信号通路缓解大鼠脑缺血损伤作用的研究

目的探讨电针(EA)刺激足三里、内关穴对脑缺血大鼠的影响及对mTOR信号通路的调控作用。方法将75只大鼠按随机数字表法分为假手术(Sham)组、大脑中动脉阻塞(MCAO)模型3 d组、EA干预3 d组、MCAO模型7 d组、EA干预7 d组,每组15只。除Sham组外,其余组采用Longa线栓法构建永久性MCAO大鼠模型,EA干预组术后每日治疗内关和足三里穴20 min。于相应时间点对各组行神经功能缺损评分,采用2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)染色分析脑梗死体积,HE和尼氏染色评估脑缺血后病理改变,Western blot法检测梗死侧大脑皮层中雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关因子蛋白激酶B(AKT)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、总mTOR蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测梗死侧大脑皮层中LC3B、Beclin-1和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白X(Bax)mRNA的表达。结果与Sham组相比,MCAO模型组各时间点神经功能缺损评分升高(P<0.05),大脑皮层区出现大片坏死及炎性浸润,大量神经元坏死,细胞排列紊乱,完整神经元数量显著减少(P<0.05),LC3B、Beclin-1 mRNA表达显著降低(P<0.05),MCAO模型7 d组的Bax mRNA表达显著增加(P<0.05),并且mTOR磷酸化水平(p-mTOR/t-mTOR)显著高于MCAO模型3 d组(P<0.05)。与MCAO模型组相比,EA干预7 d组大鼠神经功能缺损评分降低,EA干预3 d组和7 d组脑梗死面积百分比均明显降低(P<0.05),大脑皮层区坏死灶显著减小,炎性浸润改善,细胞排列不规律,完整神经元数量显著增加(P<0.05)。与MCAO模型7 d组相比,EA干预7 d组LC3B、Beclin-1 mRNA表达显著增加,Bax mRNA表达显著降低,p-mTOR/t-mTOR水平显著降低(均P<0.05)。AKT蛋白在各组中表达无明显差异。结论EA刺激足三里、内关穴对脑缺血性损伤具有神经保护作用,并诱导自噬发生,抑制凋亡反应,其机制可能与抑制mTOR信号通路活化有关。