藻酸钙微载体培养胎儿关节软骨细胞

目的观察胎儿关节软骨细胞在藻酸钙微载体培养中的特征,探讨用藻酸钙微载体培养胎儿关节软骨细胞的优缺点。方法用藻酸钙微载体和体外单层培养法培养胎儿关节软骨细胞,观察细胞形态学变化,测定细胞数量变化及其生长曲线,观察细胞增殖;借助免疫组织化学的方法了解细胞II型胶原的合成情况。结果体外单层培养的胎儿关节软骨细胞传至第5代已出现明显的反分化,多数细胞变为成纤维细胞状,合成II型胶原的能力明显减弱;而用藻酸钙微载体培养的软骨细胞3个月后仍保持有旺盛的合成Ⅱ型胶原的能力。结论用藻酸钙微载体培养胎儿关节软骨细胞可较长时间保持其表型及合成基质能力,防止反分化的发生。

人胚肋软骨静止区细胞的体外培养及生物学特性研究

目的 :研究体外培养的人胚肋软骨静止区细胞的生物学特性及分化规律 ,为组织工程生长板的研究提供种子细胞。方法 :采用Ⅱ型胶原酶消化的方法获取人胚肋软骨静止区细胞 ,观察细胞形态学变化 ;测定细胞生长曲线 ;借助特殊染色、免疫荧光染色的方法了解糖胺聚糖、碱性磷酸酶、Ⅱ型胶原酶的合成情况。结果 :贴壁后细胞呈多角形 ,从第 6代开始绝大多数细胞转变为成纤维细胞状 ,细胞培养至第 2代开始分泌大量Ⅱ型胶原。结论 :体外单层培养的人胚肋软骨静止区细胞具有正常的生长增殖与分化能力 ,可分化至成熟期软骨细胞。

寻找基因转染人脂肪来源的成体干细胞合适载体:脂质体介导质粒pEGFP-N1、重组腺病毒Ad5-EGFP与重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP

目的:观察脂质体介导质粒pEGFP-N1、重组腺病毒Ad5-EGFP、重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP基因转染人脂肪来源成体干细胞后增强型绿色荧光蛋白的表达及细胞毒性,探讨适用于脂肪来源的成体干细胞的转基因方法。方法:实验于2006-01/07在国家人类基因组北方中心和北京大学第三医院完成。全髋关节置换术患者的皮下脂肪由北京大学第三医院骨科提供,均征得患者及其家属同意。pEGFP-N1(Clotech公司),Ad5-EGFP,rAAV-2/1-EGFP(本元正阳公司)。②自成人皮下取少量脂肪组织,经机械剪切及Ⅰ型胶原酶消化后获取脂肪来源的成体干细胞,体外培养扩增。③采用脂质体介导质粒pEGFP-N1、重组腺病毒Ad5-EGFP、重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP3种转染方法,观察增强型绿色荧光蛋白的表达及对细胞毒性的影响。④细胞转染后24h,将5×104细胞悬液接种于24孔板中,每周换液3次,绘制细胞生长曲线。以正常未转染细胞作为正常对照。观察不同转染方法对细胞增殖的影响。结果:①不同转染方法的感染效率比较:pEGFP-N1脂质体转染后细胞毒性较大,且感染效率低,仅为10.5%。重组腺病毒Ad5-EGFP转染率高,当感染复数为5×102时,感染效率达82.5%;当感染复数低于1×103时,对细胞无明显损害。重组腺相关病毒rAAV-2/1-EGFP转染法不能有效感染人脂肪来源的成体干细胞。②不同转染方法对细胞增殖的影响:重组腺病毒Ad5-EGFP转染和重组腺相关病毒AAV-2/1-EGFP转染人脂肪来源的成体干细胞后,对细胞增殖能力无明显影响,基本同正常对照细胞(P>0.05)。而pEGFP-N1脂质体转染后细胞增殖能力较正常对照明显下降,转染后3～10d差异有显著性意义(P<0.05)。结论:重组腺病毒Ad5-EGFP可作为一种高效的脂肪来源成体干细胞的示踪工具,提示5型复制缺陷型腺病毒是其合适的转基因载体。

四川省雷电探测网探测效率评估和改进方法研究

文章综述了闪电探测技术和方法的发展状况,介绍了ADTD探测仪的原理和构成,详细分析了四川省雷电探测网的探测效率,并根据雷电探测网的探测效率分析结果,得出四川省雷电探测网的下一步建设方向。

兔髂骨生长板细胞的培养及体内成软骨作用的研究

目的 建立大量生产髂骨生长板软骨细胞的培养及保存方法,观察髂骨生长板细胞在裸鼠体内的成软骨作用,为生长板组织工程提供种子细胞。方法 取二周龄兔髂骨生长板软骨,经机械剪切和化学消化作用后,接种、培养及液氮保存,通过显微镜观察其生物学表现,并通过甲苯胺兰、碱性磷酸酶染色及Ⅱ型胶原染色对其生物学特性进行签定。将生长良好的第二代细胞注入裸鼠背部,于第四周取材,进行组织学观察。结果 细胞可在体外大量增殖并在六代内无明显反分化,但缺乏向肥大细胞进一步分化的能力。冷冻复苏细胞存活率为92％。注射的细胞悬液可在裸鼠体内形成软骨组织,并进一步向肥大细胞转化。结论 成功建立了髂骨生长板细胞的培养及冻存方法,证明髂骨生长板细胞可在体内进一步形成软骨组织并向肥大期细胞转化。

以纤维蛋白胶为载体复合BMP和bFGF的注射型骨修复材料诱导异位成骨的实验研究

目的 :了解以纤维蛋白胶 (Fibrinsealant,FS )为载体的注射型骨修复材料异位诱导成骨的作用 ,为其临床的应用提供实验依据。方法 :实验分组为 :实验组b (FS +bFGF+bBMP)、对照组b1(FS +bBMP)、对照组b2 (bBMP)、实验组r (FS +bFGF +rhBMP 2 )、对照组r1(FS +rhBMP)、对照组r2 (rhBMP)、对照组FS及空白对照组。将各组材料注射或植入小鼠肌袋内 ,采用放射学、形态学、碱性磷酸酶 (ALP)检测等方法对其成骨效应进行研究。结果 :在以bBMP为成骨因子的实验区中 ,实验组b具有高效的骨诱导活性 ,其成骨量显著高于对照组b1、对照组b2、对照组FS及空白对照组(P <0 .0 1) ;在以rhBMP 2为成骨因子的实验区中 ,实验组r同样具有高效的骨诱导活性 ,其成骨量也显著高于对照组r1、对照组r2、对照组FS及空白对照组 (P <0 .0 1)。结论 :以FS为载体复合BMP和bFGF的注射型骨修复材料具有高效的骨诱导活性 ,bFGF可明显增强BMP的骨诱导活性。

可注射型骨修复材料对兔MSC增殖及分化的影响

目的 :观察以纤维蛋白胶为载体的骨修复材料对兔骨髓基质细胞 (marrowstromalcell,MSC)增殖及分化的影响。方法 :采用细胞培养及组织化学等方法对各材料组兔MSC的增殖、碱性磷酸酶 (alkalinephosphase ,ALP)的活性和染色、细胞贴壁率及Ⅰ型胶原表达进行研究。结果 :( 1)各组材料对细胞贴壁率及促增殖作用的影响总体上由强到弱依次是 :对照组 2→实验组→对照组 1[纤维蛋白胶 (fibrinsealant ,FS) ]→对照组 3→单纯对照组 ,差异有显著性 (p <0 .0 5 )。( 2 )各组细胞的Ⅰ型胶原表达水平和ALP活性由强到弱依次是 :实验组→对照组 3→对照组 1→对照组 2→单纯对照组 ,差异有显著性 ( p <0 .0 5 )。结论 :以纤维蛋白胶为载体的注射型骨修复材料可显著促进MSC贴壁率和向成骨细胞方向的分化水平。

关节软骨细胞体外培养不同时间去分化现象发生过程及规律

目的研究软骨细胞体外培养不同时间去分化现象发生过程及规律。方法倒置显微镜观察体外培养软骨细胞形态变化;根据每代每日细胞计数结果,绘制生长曲线,检测细胞增殖能力;采用免疫组织化学方法检测软骨细胞分泌II型胶原的变化规律。结果随着培养时间的延长,软骨细胞形态发生明显的改变;细胞增殖能力及分泌细胞外基质II型胶原的能力逐渐减低。结论兔关节软骨细胞体外培养时第3代开始出现去分化现象,至第5代(8周)时去分化现象明显。

复合骨形态发生蛋白2及碱性成纤维细胞生长因子注射型骨修复材料对兔骨髓基质细胞增殖和超微结构的影响

目的观察以纤维蛋白胶(fibrinsealant,FS)为载体的注射型骨修复材料对体外培养的兔骨髓基质细胞(marrowstromalcell,MSC)增殖和超微结构的影响。方法实验分组为实验组(FS+bFGF+rhBMP-2)、对照组1(FS)、对照组2(FS+bFGF)、对照组3(FS+rhBMP-2)及单纯对照组。采用细胞培养、MTT及电镜等方法对各组兔MSC的增殖及超微结构进行研究。结果(1)各组材料对细胞促增殖作用由强到弱依次是:对照组2(FS+bFGF)、实验组(FS+bFGF+rhBMP-2)、对照组1(FS)、对照组3(FS+rhBMP-2)、单纯对照组,差异有显著性(P<0.05);(2)扫描电镜观察发现,材料表面粗糙,有微孔存在,各组细胞与材料融合生长。透射电镜观察发现:实验组的绝大部分细胞呈成骨细胞表型,细胞增殖状态旺盛,分化好。各对照组细胞或是细胞增殖活性高,但向成骨细胞表型分化差,或是向成骨细胞表型分化好,但细胞增殖活性较差。结论FS+bFGF+rhBMP-2即可显著促进MSC增殖和兔MSC向成骨细胞方向的分化水平。

遗传性多发性骨软骨瘤临床及影像学特征观察与分析

目的: 探讨遗传性多发性外生骨软骨瘤 (hereditarymultipleexostosis, HME) 的临床及影像学特征, 以说明发病部位特点及规律。方法: 分析经临床诊断及病理证实的 2个HME家系。结果: 男性患者占 51. 6%, 女性患者占 48. 4%; 其临床表现有随遗传代次增加而加重的现象; 肿瘤好发部位位于长骨的干骺段, 颅面骨没有发现。结论: HME的发病率无性别差异, 其临床表现有遗传递增性, 发病部位具有选择性。该研究有利于进一步探索其发病机制及基因型与表现型的关系。

遗传性骨软骨瘤软骨细胞的生物学特性

目的:观察遗传性骨软骨瘤软骨细胞的生物学特性。方法:采用透射电镜、细胞培养等方法观察肿瘤软骨细胞形态特征;同时观察肿瘤软骨细胞的增殖、贴附能力,与正常人关节软骨细胞做对照。结果:透射电镜(TEM)发现肿瘤软骨细胞膜附近含有大量的微丝结构,集结成束,与细胞突起有关;体外单层培养发现肿瘤软骨细胞突起增多,细胞呈现星形;骨软骨瘤软骨细胞的增殖与贴附能力随着传代的增加减慢和减低,传4代细胞增殖能力和贴附能力均与肿瘤原代细胞及正常关节软骨细胞具有明显差别(P<0.1)。结论:骨软骨瘤软骨细胞虽然与正常软骨细胞大体相似,但生物学特性存在明显区别:细胞形态改变,微丝增加,细胞增殖与贴附能力等均不同于正常软骨细胞。

中国遗传性多发性骨软骨瘤的临床资料及突变检测1例报告

目的:通过对1例中国遗传性多发性外生骨软骨瘤(hereditarymultipleexostosis,HME)家系临床资料的整理及在EXT18q23～24.1,EXT211p11～12的基因编码序列进行突变检测,寻找HME的致病基因,为发现该病临床表现的遗传学特点及发现新的基因突变以期待此研究可能预防遗传性多发性外生骨软骨造成患者肢体功能残存的发生。方法:在EXT1、EXT2基因内设计引物,经PCR和DNA测序对基因编码序列及其临近内含子进行突变检测。结果:在EXT1、EXT2的编码序列内没有发现突变。结论:排除了EXT1、EXT2为该遗传性多发性外生骨软骨瘤家系治病基因的可能,为进一步研究发现新的基因突变提供了可能。

注射型骨修复材料诱导成骨活性的研究

目的:了解以纤维蛋白胶(Fibrinsealant,FS)为载体的注射型骨修复材料犤骨形态发生蛋白(BMP)犦异位诱导成骨的作用。方法:实验分组为:实验组b(FS+bBMP)、对照组b(bBMP)、实验组r(FS+rhBMP-2)、对照组r(rhBMP)、对照组FS(FS)及空白对照组。将各组材料注射或植入小鼠肌袋内,采用用放射学、形态学、碱性磷酸酶(ALP)检测等方法对其成骨效应进行研究。结果:在以bBMP为成骨因子的实验区中,实验组b具有高效的骨诱导活性,其成骨量显著高于对照组b、对照组FS及空白对照组(P<0.01);在以rhBMP-2为成骨因子的实验区中,实验组r同样具有高效的骨诱导活性,其成骨量也显著高于对照组r、对照组FS及空白对照组(P<0.01)。结论:以FS为载体复合BMP的注射型骨修复材料具有高效的骨诱导活性。

遗传性骨软骨瘤软骨细胞的体外培养

目的:通过对人遗传性骨软骨瘤软骨细胞的体外培养,观察肿瘤软骨细胞的生长特性及相关生物学特点,为进一步研究骨软骨瘤细胞学起因奠定基础。方法:原代培养遗传性骨软骨瘤组织中的软骨细胞并进行传代,进行活细胞形态观察,同时测定细胞增殖能力及贴壁率,与正常人关节软骨细胞做对照。结果:原代细胞在经过完全消化后,细胞活力仍达到95%。传代后骨软骨瘤细胞体积增大,细胞呈现星形,树突增多,细胞内颗粒多且明显。骨软骨瘤细胞增殖随着传代的增加减慢,第2代细胞增殖能力已经与原代细胞产生明显差别(P<0.01,t=3.203)。原代骨软骨瘤细胞在24h内大部分贴壁,随着传代的增加,细胞贴附能力下降,第4代细胞贴壁率与原代细胞产生明显区别(P<0.01,t=4.611)。结论:体外培养的骨软骨瘤细胞从形态,生物学特性(细胞增殖情况、细胞贴附能力)均不同于正常软骨细胞,为今后更加深入的研究遗传骨软骨瘤的病因学奠定一定的体外培养基础。

基于雷电监测的大气电场地震短临异常研究

本研究通过对2014年至2019年基于雷电监测的大气电场观测资料的分析,发现同期在四川省的16次中强地震前,在排除雷电干扰的情况下,存在以下特征:1) 日均值呈低值异常变化;2) 日均值的异常变化形态呈不规则的“W”型、“V”型及“U”型变化;3) 日均值低值异常出现后,第10天至19天时间范围内,周围r = eM空间范围内发生中强以上地震的概率为33%。

抽水蓄能电站尾水斜井衬砌工程施工新技术

在介绍新疆阜康抽水蓄能电站尾水斜井工程概况的基础上,阐述了该尾水斜井工程使用液压穿心式模板台车进行衬砌施工的施工方案、模板台车的功能、衬砌模板的结构、衬砌模板的组合、衬砌模板的拆装、混凝土衬砌施工等方面的新技术,可供从事抽水蓄能电站尾水斜井工程施工的技术人员参考。

基于四川雷电监测网的地震前兆静电信息研究

川滇地区是我国地震活动较为频繁的地区之一,孕震期间,地质构造活动引起的动电效应和压电效应伴随着地面静电场异常变化。汶川、金口河、漾濞、九寨沟等多次中强地震前,均观测到震前地面静电异常变化。本研究利用川滇地区地震活跃地带的地面电场监测资料结合地震信息,通过雷电监测网排除雷电对地面静电场干扰,研究分析地震发生前后地面静电场异常变化特征及参考量,提出利用气象部门的地面静电观测对地震监测和地震前兆短临预报的新方法,建立地震前兆与地面静电场变化的短临预测模型,揭示地震与地面静电场变化的统计学分析意义和短临响应机制,利用气象和地震交叉学科推动地震前兆预报研究和发展。

四川地区大气静电场的地震信息研究

基于2014—2019年四川气象监测的雷电大气静电场资料,研究了同期四川M_(S)≥5.0地震前的异常信息。结果显示,50%的M_(S)≥5.0地震前,大气静电场日均值有异常变化,主要表现为低值突跳,异常形态呈多样性,较突出的有不规则"W""V""U"型等。日均值低值异常出现后114天r=e^(M)空间范围内发生M_(S)≥5.0地震的可能性较大,其中,第10—19天,发震概率为33%;第2—9天,发震概率为17%。基于气象雷电监测的大气静电场观测资料,在排除雷电等干扰的情况下,可用于地震监测预报。