犬β防御素-1真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达

哺乳动物的β-防御素是一类具有广谱抗微生物活性的阳离子小肽。为了克隆和分析犬β防御素-1基因,并建立一套在HEK293T细胞中高效表达犬β防御素-1的方法,本研究采用RT-PCR方法从犬睾丸组织中扩增出犬β防御素-1(cBD-1)的cDNA基因,并将其克隆到pcDNA3.1A载体中,构建了犬β防御素-1基因的真核表达载体pcDNA3.1A-cBD-1,经磷酸钙介导转染HEK293T细胞进行表达。结果表明:克隆的犬β防御素-1基因序列与已发表序列(GenBank编号:NM-001024641)的同源性为99.7%。表达犬β防御素-1经Western-blot检测,证明构建的犬β防御素-1基因表达载体能够在真核细胞中表达,表达产物能够分泌到细胞外。为进一步研究犬β防御素的功能奠定了基础。

重组犬IFN-γ在HEK293T细胞中的表达

为了建立一套犬IFN-γ(cIFN-γ)在HEK293T细胞中表达的方法,用伴刀豆球蛋白A(ConA)刺激犬脾细胞,通过RT-PCR方法从脾细胞中扩增犬IFN-γ基因,并将其克隆到pcDNA3.1A载体中,构建的真核表达载体pcDNA3.1A-cIFN-γ经磷酸钙介导转染HEK293T细胞进行表达。结果表明:克隆的犬IFN-γcDNA基因与GenBank上发表的序列一致,同源性100%。表达产物经Western-blot方法检测,证明克隆的犬IFN-γ基因能够在HEK293T细胞中进行表达,并且表达产物能够分泌到细胞外。

猪β防御素-2基因在HEK293T细胞中的表达

用Trizol试剂提取猪血白细胞总RNA,根据已发表的序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增出猪β防御素-2(pBD-2)基因,并将该基因插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,构建成猪β防御素-2基因的真核表达载体pcDNA3.1A/pBD-2,经磷酸钙介导转染HEK293T细胞进行表达。结果表明:本试验扩增的pBD-2基因与已发表的序列完全一致。表达产物经Western-blot检测,证明pBD-2能够在真核细胞HEK293T中表达。

番茄水肥一体化高效栽培技术

番茄水肥一体化高效栽培技术是将滴灌施肥与作物高效栽培融为一体的农业综合栽培新技术，借助滴灌系统，将可溶性固体肥料或液体肥料配成的肥液与滴灌水一起，均匀、准确地输送到作物根部土壤。与常规栽培方式相比节水1／3～1／2，肥料利用率提高10％～15％，还能节省劳动力，提高工效。

冬小麦中期管理技术

从拔节期至孕穗期为小麦的生长中期，这一时期是小麦生长发育最旺盛的阶段，该阶段的生长特点是根、茎、叶等营养器官与小穗、小花等生殖器官分化建成同时并进。因此，做好小麦生长中期管理是决定小麦增产的关键时期。合理运用水肥，协调好个体和群体、营养生长和生殖生长之间的关系，促其穗足、穗大、秆壮不倒，是小麦中期管理的主要目标。

冬季温室大棚玫瑰嫁接快速育苗新技术

近几年，平阴县科技人员经过不断探索和实践，总结出一套冬季温室大棚玫瑰嫁接快速育苗新技术，并取得了良好的应用效果，在当地花农中推广开来。现将该技术进行介绍。

果园覆草技术

一、果园覆草要点 1.覆草时间:一年四季均可进行,一般在春季整地、施肥、浇水的基础上进行覆草。也可在麦收后利用麦糠进行夏季覆草。 2.覆草种类:各种杂草、麦秸、麦糠或稻草,也可将玉米秸秆铡成5-10厘米的小段。

不同饲养方式肉鸡舍环境参数差异性比较

为了便于商品肉鸡饲养方式的科学筛选,试验采用地面平养方式(对照组)和阶梯笼养方式(试验组)饲养肉鸡,对照组按照饲养平面区域平均分为9个采样区域作为9个重复,试验参照对照组在上中下层分别设9个重复(S1~9、Z1~9、X1~9),利用自动环境测定仪对每个重复的主要环境参数温度、湿度、风速及PM2.5、PM10、CO_(2)、NH_(3)浓度进行测定,每个重复采集数据5 min,每隔5 s采集数据1次,统计分析组内和组间环境参数差异,并计算差异倍数。结果表明:在温度、湿度和风速方面,对照组各参数平均值分别为27.46℃、55.38%、0.06 m/s,差异倍数分别为0.09,0.15,2.00;试验组上层各参数平均值分别为26.99℃、50.45%、0.04 m/s,差异倍数分别为0.03,0.38,4.50;试验组中层各参数平均值分别为26.71℃、48.47%、0.07 m/s,差异倍数分别为0.08,0.54,1.71;试验组下层各参数平均值分别为25.96℃、48.45%、0.07 m/s,差异倍数分别为0.13,0.46,2.57。在PM2.5、PM10、CO_(2)、NH_(3)浓度方面,对照组各参数平均值分别为104.42μg/m^(3)、386.47μg/m^(3)、5 381.32 mg/m^(3)、58.12 mg/m^(3),差异倍数分别为0.58,0.13,0.53,0.99;试验组上层各参数平均值分别为220.04μg/m^(3)、433.38μg/m^(3)、5 392.85 mg/m^(3)、9.11 mg/m^(3),差异倍数分别为3.33,2.93,0.74,1.29;试验组中层各参数平均值分别为225.44μg/m^(3)、446.67μg/m^(3)、5 263.13 mg/m^(3)、8.13 mg/m^(3),差异倍数分别为3.01,2.57,0.90,0.54;试验组下层各参数平均值分别为223.22μg/m^(3)、443.27μg/m^(3)、5 142.66 mg/m^(3)、7.49 mg/m^(3),差异倍数分别为2.88,2.36,0.73,0.74。在温度方面,除相对应的重复X1与重复1、重复X2与重复2、重复X5与重复5之间差异不显著(P>0.05)外,其余均差异显著(P<0.05);在湿度方面,除相对应的重复X4与重复4、重复X7与重复7、重复X8与重复8之间差异不显著(P>0.05)外,其余均差异显著(P<0.05);在风速方面,除相对应的重复X1与重复1、重复X4与重复4、重复X6与重复6、重复X7与重复7之间差异显著(P<0.05)外,其他重复间差异不显著(P>0.05);在有毒有害物质方面,PM2.5浓度对应重复间均差异显著(P<0.05);PM10浓度除重复X6与重复6之间差异不显著(P>0.05)外,其他重复间差异显著(P<0.05);CO_(2)浓度除重复X2与重复2、重复X6与重复6、重复X9与重复9之间差异显著(P<0.05)外,其他重复间差异不显著(P>0.05);NH_(3)浓度各对应重复之间均差异显著(P<0.05)。说明试验组与对照组无论是组内还是组间均存在一定程度环境差异,且试验组舍内环境小气候均匀性较对照组差,颗粒物、浮尘较多,而像NH_(3)类有毒有害气体浓度偏低。地面平养方式环境控制易于阶梯笼养方式,而阶梯笼养方式较地面平养方式的环境相对更好,从饲养环境及规模效益整体分析来看,笼养更适合我国目前肉鸡规模化、机械化及健康养殖的发展需要,但从福利角度来看世界大多数地区可能更倾向于地面平养方式。

红树莓枝叶提取液对肉鸡生长性能和免疫功能的影响

本试验旨在研究红树莓枝叶提取液对肉鸡生产性能和免疫功能的影响,采用单因素分组设计,将1日龄肉鸡随机分为红树莓枝叶提取液高、中、低剂量添加组和空白对照组4组,前3组在基础日粮中添加红树莓枝叶提取液,剂量分别为2.0mL/只、1.0mL/只、0.5mL/只,药物添加期为7 d,空白对照组按常规饲喂,均常规免疫,于6、14和35日龄时进行采样,测定肉鸡体重、法氏囊和脾脏脏器指数和新城疫抗体水平。结果显示,红树莓枝叶提取液对肉鸡体重无显著影响(P>0.05),但能不同程度提高肉鸡免疫器官指数和新城疫抗体水平,建议把红树莓枝叶提取液1.0mL/只作为临床推荐剂量。

河北省唐山地区商品肉鸡养殖情况调研报告

一、调研的基本情况(一)调研目的为推动我省肉鸡产业化健康发展,促进肉鸡养殖增收、加工增效,我们深入唐山地区对该地区肉鸡养殖情况进行了调研。唐山地区肉鸡养殖在河北省发展速度较快,但河北省肉鸡产业规模化、标准化、机械化水平不断扩大,加上"京津冀一体化"、环保压力、成本压力等多因素影响,肉鸡养殖品种、规模、方式、成本、经营模式等不断发生变化。为更深一步了解该地区肉鸡养殖情况,对该区开展相关调研。

山东平阴孝直镇：“三位一体”打造产业强镇

孝直镇隶属于泉城济南市,是“中国玫瑰之都”山东省平阴县辖区面积最大的农业主导镇,著名“和圣”柳下惠故里。2018年以来,孝直镇狠抓产业强镇建设,通过“三关严把、三权分置、三社并举”的“三位一体”组合,发展形成了“一红一白、一黄一绿”的主导产业。“一红一白”,即海升集团4300亩美国水果胡萝卜、伊利优然现代牧场万头奶牛;“一黄一绿”,即2万亩玉米良种繁育、5万亩绿色无公害大白菜。

山东平阴:“金十条”助力玫瑰产业振兴

为实现玫瑰产业振兴,近年来山东省平阴县强化工作机制,出台扶持政策,列支专项资金,对玫瑰产业从基地建设、科技研发、三产融合、品牌提升、市场培育、宣传推介等方面进行靶向扶持,倾力打造特色产业,开创乡村振兴之路。本文结合平阴县制订出台的十条"高含金量"的扶持政策,分析了玫瑰产业在乡村振兴中发挥的重要作用。

犬细小病毒VP2蛋白在真核细胞中的分泌表达及特性

【目的】利用真核细胞分泌表达犬细小病毒VP2蛋白和研究其特性。【方法】为构建犬细小病毒(Canineparvovirus,CPV)VP2基因的真核分泌型表达载体,首先通过酶切从含有人CD5信号肽序列的质粒中将CD5信号肽基因片段切出,将其连接到真核表达载体pcDNA3.1A的多克隆位点上,构建成pcDNA3.1-CD5sp质粒。然后再通过PCR方法从含有犬细小病毒VP2基因的质粒中扩增VP2基因,并将其插入到pcDNA3.1-CD5sp载体中CD5信号肽的下游,构建成VP2基因的真核分泌型表达载体pcDNA-CD5sp-VP2。经磷酸钙介导转染293T细胞,使其在真核细胞中进行分泌表达,并通过ELISA检测表达的VP2蛋白与犬转铁蛋白受体(TfR)结合的活性。【结果】序列分析结果表明,本实验构建的犬细小病毒VP2基因真核分泌型表达载体结构正确,将该表达载体转染的293T细胞,在培养基中通过Western-blot检测到有VP2重组蛋白的存在。经ELISA检测表明表达的重组VP2蛋白具有与犬转铁蛋白受体结合的活性。【结论】利用人的CD5信号肽实现了犬细小病毒VP2蛋白在真核细胞中的分泌表达,表达的VP2蛋白具有与犬转铁蛋白受体结合的活性。

腺病毒介导犬干扰素-γ基因的表达及其体外抗犬细小病毒的作用

【目的】构建含犬干扰素-γ(cIFN-γ)基因的重组腺病毒,并在培养的犬肾细胞MDCK中分析其抗犬细小病毒的活性。【方法】首先将cIFN-γcNDA基因克隆到腺病毒穿梭质粒中,构建成含cIFN-γ基因的腺病毒穿梭质粒pShuttle3-cIFN-γ。利用特异的酶切位点,通过直接连接法将cIFN-γ表达盒插入到腺病毒基因组质粒pAdeno-X中,构建成含cIFN-γ基因的腺病毒基因组质粒pAd-cIFN-γ。pAd-cIFN-γ质粒经酶切线性化后转染人胚胎肾细胞HEK293T,在细胞中拯救出含有cIFN-γ基因的复制缺陷型重组腺病毒。然后用该重组腺病毒处理(感染)培养的犬肾细胞MDCK,再用犬细小病毒感染重组腺病毒处理的细胞,分析重组腺病毒在体外抗犬细小病毒的活性。【结果】通过连接法构建了含cIFN-γ基因的重组腺病毒,构建的重组腺病毒能够介导cIFN-γ在MDCK细胞中进行分泌表达。用含cIFN-γ基因的重组腺病毒处理MDCK细胞,可明显地抑制犬细小病毒在细胞中的增殖,表明构建的重组腺病毒具有明显的抗犬细小病毒的活性。【结论】构建了含cIFN-γ基因的重组腺病毒,并证明该重组病毒在体外具有明显的抗犬细小病毒的活性。

狐狸生长激素基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

为制备重组狐狸生长激素(fGH),采用RT-PCR方法,从银狐垂体中扩增fGHcDNA基因,利用SnaBI和NotI位点将fGH基因插入到酵母分泌型表达载体pPIC9K中α-因子信号肽的下游,构建成fGH基因的酵母分泌型表达载体pPIC9K/fGH,载体经SalI酶切线性化后,通过电转移将线性化的pPIC9K/fGH转化到组氨酸缺陷型酵母宿主菌GS115中。然后利用不含氨基酸的以葡萄糖为碳源的培养基(MD)和以甲醇为碳源的培养基(MM)筛选出组氨酸His+型和甲醇利用正型(Mut+)酵母重组体,再经G418加压筛选出高拷贝fGH基因的重组酵母,经摇瓶发酵培养和甲醇诱导使fGH进行分泌表达。结果表明本实验扩增的fGH基因序列与GenBank发表的序列基本一致,发酵液经SDS-PAGE和Western blotting检测证明构建的重组酵母能够分泌表达fGH,表达的fGH占发酵液总蛋白的34%,表达量达119mg/L发酵液。

无公害蔬菜病虫害的有效防治

随着人们生活水平的提高，对蔬菜的质量要求越来越严格，尤其是蔬菜的农药残留量问题，更是人们关注的重点。无公害蔬菜，因其在生长过程中，不用农药或少用农药，使蔬菜中农药残留量几乎为零，具有新鲜、天然等特点，深受广大消费者的青睐。但生产无公害蔬菜，也会受到害虫、病菌的侵染，如何在不用农药的情况下，将病虫危害减至最低限度?现介绍几种有效的防治方法：

心电图与主动脉瓣反流瓣膜置换术后预后的相关性

目的评价主动脉瓣置换术(AVR)术前心电图指标对于预测主动脉瓣反流(AR)患者术后左心室结构、功能恢复及临床预后的价值。方法回顾性分析2005年1月至2015年1月在大连医科大学附属第一医院首次接受AVR患者50例临床资料,根据术前及术后早期左心室舒张末期内径(LVEDD)的变化将其分为两组:左心室重构组(术后早期LVEDD较术前减少≥10%);左心室非重构组(术后早期LVEDD较术前减少<10%)。比较两组患者AVR术前心电图等指标,并使用log-rank检验影响术后早期左心室重构的因素,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。结果40例(82%)AR患者AVR术后早期较术前LVEDD降低≥10%。左心室重构组较非重构组心电图各参数比较,右胸前导联S波振幅变化最为显著(P<0.001)。AVR术前S2≤2.9 mV对于预测术后晚期左心室射血分数(LVEF)>45%的敏感度90.0%,特异性90.0%,因心力衰竭(心衰)再住院及全因死亡率均较S2>2.9 mV组高(P<0.001)。结论单纯慢性AR患者AVR术前V2导联S波振幅与术后早期左心室重构及晚期预后有一定关联。