亲属肾移植的伦理学探讨

活体亲属肾移植是当前解决器官匮乏最重要的途径,近年来我国亲属肾移植例数也不断增多。但是亲属肾移植因其具有一定的特殊性,相比尸体供肾移植更为敏感,也更易于引发伦理问题。简要介绍国内外亲属肾移植的研究进展,重点对亲属肾移植的生命伦理学问题加以探讨。

胃粘膜癌变过程中细胞增殖活性的研究

目的 探讨胃粘膜癌变过程中细胞增殖活性的变化以及PCNA、P5 3基因在胃癌发病过程中的意义。方法 采用免疫组化 (Immunohistochemistry)方法对临床 95例胃手术切除标本PCNA、P5 3基因的表达情况进行检测分析。结果 胃癌变过程中均可见PCNA的阳性表达 ,随病变程度的加重 ,PCNA增殖指数亦逐渐上升 ,各组间差异显著 (P <0 .0 5 ) ,但重度异型增生与胃癌组织相比较 ,PCNA指数变化不大 (P >0 .0 5 )。仅在重度异型增生组织中发现P5 3蛋白表达 ,胃癌P5 3蛋白的表达阳性率明显增高 ,与重度异型增生组织相比较 ,具有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 在胃癌变过程中 ,细胞增殖活性逐渐增高。对临床标本进行PCNA检测 ,可较方便准确地判断组织的增殖状况。P5 3蛋白表达出现较晚 。

^(60)Co射线、5-Fu、顺铂对SGC-7901胃癌细胞增殖基因表达的影响

目的 探讨60 Co射线、5- Fu、顺铂对 SGC- 790 1胃癌细胞增殖基因表达的影响及其意义。方法 以 SGC-790 1胃癌细胞作为研究对象 ,采用免疫组化方法检测胃癌细胞中 P53、C- erb B- 2、Rb基因的表达情况。结果 60 Co、5- Fu、顺铂可使 SGC- 790 1胃癌细胞生长变慢 ,倍增时间延长 ,抑制胃癌细胞增殖 ,并使增殖相关基因表达水平明显降低。结论 本研究证实 ,60 Co、5- Fu、顺铂对胃癌细胞具有明显抑制、杀伤作用 ,P53、c- erb B- 2、Rb基因对胃癌细胞的增殖活性有重要作用 ,在 60 Co、5- Fu。

过表达Bcl-2雪旺细胞抗凋亡能力的实验研究

目的:探讨凋亡相关基因Bcl-2过表达对抗过氧化氢诱导的雪旺细胞凋亡的影响。方法:构建含有人Bcl-2cDNA的逆转录病毒真核表达载体PLXSN,脂质体法将重组质粒转染PA317细胞,G418筛选阳性克隆,鉴定后浓缩收集病毒液,感染人雪旺细胞株系Schwann'scells,采用Western法检测Bcl-2蛋白表达情况。5mMH2O2作用并诱导细胞凋亡后,流式细胞仪检测细胞凋亡发生变化。结果:成功构建出含目的基因Bcl-2的逆转录病毒表达载体pLBcl-2SN。5mMH2O2成功的诱导雪旺细胞凋亡。Bcl-2逆转录病毒感染雪旺细胞后,Bcl-2蛋白水平呈过高表达,并能显著对抗H2O2诱导的雪旺细胞凋亡。结论:Bcl-2蛋白过表达能够抑制氧化剂诱导的雪旺细胞凋亡。

雄激素受体反义RNA对前列腺癌细胞雄激素受体表达的抑制作用研究

目的 观测雄激素受体 (AR)反义RNA逆转录病毒表达载体在前列腺癌细胞中的表达及其对AR表达的影响。方法 将AR反义RNA逆转录病毒表达载体导入前列腺癌细胞株LNCaP ,PCR检测AR目的片段在重组LNCaP细胞基因组中的存在 ,RT PCR检测AR反义RNA表达和ARmRNA水平 ,Westernblot检测AR蛋白表达水平。结果 PCR在LNCaPas AR基因组DNA中扩增出了AR目的片段 ,表明AR目的片段整合到了细胞基因组。RT PCR证实LNCaPas AR有AR反义RNA表达 ,且其ARmRNA水平较LNCaP和空载体转染的LNCaPNeo显著下调 (P <0 .0 5 ) ,Westernblot证实LNCaPas AR细胞AR蛋白含量显著下降 (P <0 .0 5 )。

人睾丸精原细胞的分离和纯化

目的 探讨人睾丸精原细胞的分离纯化。方法 用联合二步酶消化法获得人生殖细胞悬液,经Percoll不连续密度梯度离心,再用差异粘附法纯化得到成活率较好、含量较高的人精原细胞。结果 所获得睾丸组织细胞悬液内活细胞、死细胞平均所占百分比分别为89 71%、10 2 9%。Percoll不连续密度梯度中,细胞主要在相邻梯度的界面处形成细胞带,其中精原细胞主要分布于2 7%～3 5 %Percoll梯度间,根据细胞体外培养时的形态学特征等进行判断和分析,经纯化后精原细胞的纯度达到60 42 %。结论 应用联合酶消化法、Percoll不连续密度梯度离心和差异粘附等方法可以有效地对人精原细胞进行分离和纯化。

表达鼠精子Cyritestin蛋白的减毒沙门氏菌疫苗株的构建及其鉴定

目的 构建表达鼠精子cyritestin蛋白的可口服减毒沙门氏菌活疫苗株。方法 应用质粒TAZ83/ 13,将之进行双酶切获得含有成熟cyritestin蛋白cDNA序列的酶切片段。将其插入表达载体 pYA314 9中 ,构建重组质粒pCFL。将该重组质粒转入鼠沙门氏伤寒杆菌疫苗株X4 6 32和X4 5 5 0中 ,以获得重组菌株X4 6 32 (pCFL)和X4 5 5 0 (pCFL)。结果 该两种无抗药性的重组菌株在体外营养选择压力下 ,可较稳定地携带重组质粒传代繁殖。X4 5 5 0 (pCFL)在体内可较稳定地定居于Peyer’s结、肠系膜淋巴结和脾脏 ;X4 6 32(pCFL)可较稳定地定居于Peyer’s结。二者均可表达被抗cyritestin单抗 (mAb)识别的重组cyritestin蛋白。口服该疫苗菌株无明显的毒性作用。结论 X4 6 32 (pCFL)、X4 5 5 0(pCFL)疫苗株的构建 。

雄激素受体反义RNA逆转录病毒载体的构建及其鉴定

目的 构建雄激素受体 (AR)反义RNA逆转录病毒载体pL AR SN并进行包装和鉴定。方法 PCR扩增ARcDNA片段并将之反向插入到逆转录病毒载体pLXSN ,用脂质体法转染PA31 7细胞 ,提取转染细胞基因组DNA和培养上清中重组逆转录病毒RNA ,用PCR和RT PCR法进行鉴定 ,NIH 3T3细胞测定病毒滴度。结果 限制性内切酶分析证明pL AR SN含有反向插入的ARcDNA目的片段 ;培养上清中病毒滴度为 2 .34× 1 0 5 CFU/ml,PCR和RT PCR分别从转染细胞基因组DNA和培养上清中的重组逆转录病毒RNA中扩增出了插入的目的片段。结论 成功构建了AR反义RNA逆转录病毒载体并包装出了高滴度的重组逆转录病毒。

鼠精子表面蛋白cyritestin在沙门氏菌平衡致死系统中的高效表达

目的构建表达鼠精子 cyritestin蛋白的可口服减毒沙门氏菌活疫苗株。方法将编码成熟 cyritestin蛋白c DNA序列的酶切片段插入含 p UC复制子的表达载体 p YA3 3 3 9中 ,构建重组质粒 p MCY,将该重组质粒转入鼠沙门氏伤寒杆菌疫苗株 X4 5 5 0 ,获得杂合菌株 X4 5 5 0 ( p MCY)。应用 western blot对重组菌所表达的重组 cyritestin蛋白进行免疫分析。结果该无抗药性的杂合菌株在体外营养选择压力下可较稳定携带重组质粒传代繁殖 ,在体内可较稳定地定居于 Peyer’s结、肠系膜淋巴结和脾脏。该重组菌可高水平表达重组 cyritestin蛋白。结论高效表达 cyritestin蛋白的 X4 5 5 0 ( p MCY)

雄激素受体反义RNA抑制前列腺癌细胞LNCaP致瘤性的研究

目的 观察雄激素受体 (Androgenreceptor ,AR)反义RNA对前列腺癌细胞LNCaP致瘤性的影响。方法 分别用细胞平板克隆形成试验及裸鼠接种实验观察前列腺癌细胞LNCaP、LNCaPNeo和LNCaPas AR 细胞致瘤性的变化。结果 LNCaPas AR细胞的克隆形成效率显著低于LNCaPNeo细胞 (P <0 .0 1)。LNCaPas AR细胞在雄性裸鼠体内形成的瘤体体积明显小于LNCaPNeo细胞并且形成瘤体的时间延长。结论 雄激素受体反义RNA可抑制前列腺癌细胞LNCaP成瘤能力。

移植肾慢性排斥反应与血小板衍化生长因子及胰岛素样生长因子表达的关系

目的 :探讨慢性排斥反应移植体动脉硬化与血小板衍化生长因子 A(PDGF A)链、胰岛素样生长因子 1(IGF 1)表达的关系。 方法 :采用免疫组化S P法研究 2 2 2只大鼠的移植动脉 ,用RIA法及S P法研究 2 0例慢性排斥反应移植肾组织及动脉中PDGF A、IGF 1的表达。 结果 :实验组 :术后 3天 ,PDGF A、IGF 1在大鼠移植动脉壁各层出现阳性表达 ;术后 7天 ,PDGF A在动脉壁各层表达为最高峰 ,IGF 1术后 2 1天达最高峰 ;术后 2 1天 ,内膜明显增生 ,面积比为 (2 6 4± 3 12 ) %。临床组 :移植肾动脉PDGF A表达主要集中在内膜 ,其次为外膜 ,中层较少 ,IGF 1在肾动脉血管壁全层中均呈阳性表达 ;而在肾组织中PDGF A与IGF 1的表达均主要集中在远曲小管、远直小管上皮细胞及肾小球毛细血管上皮细胞。 结论 :移植体动脉硬化过程中 ,细胞增生、内膜增厚、血管及肾组织纤维化与PDGF A、IGF 1表达关系密切。慢性排斥反应的移植肾动脉及肾组织中PDGF A、IGF 1呈高表达 ,且与术后早期排斥反应的发生频率及程度等因素密切相关。

肾移植术后巨细胞病毒性肺炎的临床分析

目的:探讨CMV肺炎的发病特点及临床救治措施。方法:对24例肾移植术后并发CMV肺炎者的临床资料进行回顾性分析。结果:24例患者中19例(79.2%)CMV肺炎患者救治获得成功,5例死亡。结论:对于肾移植术后的CMV肺炎患者应高度重视和积极救治,及时给予足量的抗病毒药物,坚持足够疗程,调整免疫抑制剂方案,纠正低蛋白血症,适时应用呼吸机是救治成功的关键。

表达精子抗原受精素β的重组沙门氏菌疫苗株的免疫性避孕效应研究

目的 :探讨表达精子抗原受精素β胞外区的重组沙门氏菌疫苗株用作避孕疫苗的可行性。方法 :应用表达精子抗原受精素β胞外区的两种重组沙门氏菌疫苗株 X46 3 2 (p FEC)和 X45 5 0(p FEC)口服接种雌鼠 ,通过 ELISA方法检测其激发雌鼠产生抗重组受精素 β蛋白的血清 Ig G抗体和阴道分泌物 Ig A抗体滴度变化 ,并观察其诱导的雌鼠免疫性避孕效应情况。结果 :重组 X46 3 2(p FEC)和 X45 5 0 (p FEC)疫苗株不但可激发雌鼠产生高水平血清抗重组受精素 β蛋白和抗菌体LPS Ig G抗体 ,而且在阴道分泌物中可出现一定程度抗重组受精素 β蛋白和抗菌体 LPS Ig A抗体。同时 ,口服免疫后的雌鼠生育能力明显降低 ,两实验组雌鼠妊娠率降低 3 0～ 3 5 %,一胎产仔数量平均降低 6 4 .76～ 6 5 .6 4 %。结论 :表达精子抗原受精素β的重组沙门氏菌疫苗株可在小鼠中诱导免疫避孕效应。

胃黏膜癌变过程中细胞周期调控基因Rb、Cyclin D1及CDK4的表达及其意义

目的 研究胃黏膜癌变过程中细胞周期调控基因Rb、CyclinD1及CDK4的表达及其意义。方法 采用免疫组化方法对 5 0例胃癌 ,1 8例癌旁肠化生 ,7例癌旁轻中度不典型增生及 9例重度不典型增生组织中细胞周期调控基因Rb、CyclinD1及CDK4的表达情况进行检测和比较。结果 Rb基因的过度表达在不典型增生及胃癌中检测到 ,在胃癌组织中的表达强度明显大于重度不典型增生病变 (P <0 .0 5 ) ,CyclinD1及CDK4的表达仅发现在胃癌组织中 ,胃癌组织中CyclinD1表达阳性的 1 3例病例中有 5例同时表达Rb ,2例同时表达CDK4 ;Rb阳性的 1 7例胃癌组织中有 3例同时表达CDK4。结论 Rb ,cyclinD1和CDK4的过度表达可能参与胃癌的发生 ,Rb的过度表达出现在胃黏膜癌变过程的较早期阶段 。

表达小鼠精子受精素β胞外区减毒沙门菌疫苗株的构建

目的 :构建表达鼠精子抗原受精素 β亚单位 (Fβ)胞外区的可口服减毒沙门菌活疫苗株。 方法 :设计一对引物 ,应用PCR方法获得Fβ 胞外区cDNA片断 ,将其插入表达载体pYA3 14 9中 ,构建重组质粒pFEC ,将该重组质粒转入鼠沙门菌疫苗株X4 63 2 ,获得杂合菌株X4 63 2 (pFEC)。该重组菌口服免疫雌鼠 ,通过ELISA方法检测其诱导雌鼠血清IgG抗体和阴道分泌物IgA抗体滴度变化。 结果 :此疫苗株X4 63 2 (pFEC)可稳定表达被Fβ 抗体识别的重组Fβ 胞外区蛋白 ,口服该菌株不但可激发雌鼠产生高水平血清抗重组Fβ 蛋白IgG抗体 ,而且在阴道分泌物中可出现一定程度抗重组Fβ 蛋白IgA抗体 ,无明显毒性作用。 结论 :X4 63 2 (pFEC)疫苗株的构建为研究以Fβ 为靶抗原的精子抗原避孕疫苗打下了基础。

两种表达鼠精子受精素β蛋白的减毒沙门氏菌疫苗株的稳定性分析

目的 了解表达鼠精子抗原受精素 β亚单位 (Fertilinβsubunit,Fβ)的两种重组减毒沙门氏菌疫苗株X463 2(pFEC)和X45 5 0 (pFEC)的生长特性和体内外携带重组质粒的稳定性。方法 将两种重组沙门氏菌疫苗株X463 2 (pFEC)和X45 5 0 (pFEC)体外传代培养 ,观察比较其生长特性和所含重组质粒的稳定性 ;将该两种重组菌口服免疫BALB c雄性小鼠 ,观察重组菌侵入小鼠Peyer结、肠系膜淋巴结和脾脏等组织内繁殖生长情况和所回收重组菌携带质粒的阳性率。结果 该两种无抗药性的重组菌株在体内、外营养选择压力下均可较稳定携带重组质粒传代繁殖 ,X45 5 0 (pCFL)在体内可较稳定地定植于Peyer结、肠系膜淋巴结和脾脏 ;X463 2 (pCFL)可较稳定地定植于Peyer结 ,均可稳定表达被Fβ单抗识别的重组Fβ蛋白。结论 X463 2 (pFEC)、X45 5 0 (pFEC)疫苗株可作为递呈精子抗原的活菌载体。

精子膜蛋白Cyritestin单抗对鼠精卵结合和融合的抑制作用及其意义

目的 通过观察精子膜蛋白Cyritestin单抗对体外鼠精 卵结合和融合作用的影响 ,探讨该蛋白在受精过程中的作用。方法 应用鼠Cyritestin单抗 ,通过体外受精试验观察该单抗预孵育不同浓度精子后 ,对精 卵结合和融合功能的影响 ;应用免疫细胞化学方法确定Cyritestin在精子表面的特异性定位。结果 不同精子浓度下 ,Cyritestin单抗均可显著降低体外精 卵的结合和融合能力 ;可使精 卵结合指数降低 3 7.18%～ 79.0 0 % ,平均 60 .3 3 % ;使精 卵融合的受精指数降低 5 1.66%～ 77.0 1% ,平均 66.90 % ;受精率下降3 2 .2 8%～ 76.15 % ,平均 5 7.41%。在精子顶体反应前后 ,Cyritestin在精子表面均特异性定位于精子头部赤道区域和顶体内膜区域。结论 Cyritestin在精 卵的结合和融合中均发挥重要生理作用。该蛋白作为精子靶抗原开发避孕疫苗的可能性值得深入研究。

胃粘膜癌变过程中bc1-2、p^(53)和Rb基因的表达

目的 研究胃粘膜癌变过程中bc1- 2、p53 和Rb的基因的表达及意义。方法 采用免疫组化方法对 5 0例胃癌 ,18例癌旁肠化生 ,7例癌旁轻中度异型增生及 9例重度异型增生组织中bc1- 2、p53 和Rb基因表达情况进行检测和比较。结果 正常胃粘膜上皮增殖带干细胞区bc1- 2蛋白呈弱阳性表达 ,异性增生病变中 ,bcl- 2蛋白表达率和表达强度明显大于肠化生病变和正常胃粘膜上皮 (P <0 .0 5 ) ,胃癌组织中表达减少 ,p53 蛋白和Rb蛋白仅在重度异型增生病变和胃癌组织中表达。结论 bcl-2蛋白的表达主要是在胃癌的启动和促进阶段起作用 ,而在已具有恶性表型的细胞中不起关键作用。p53 和Rb基因的改变可能发生在胃粘膜癌变的较后期阶段 ,使胃癌的细胞凋亡受抑。