102例罕见珠蛋白生成障碍性贫血基因突变测序分析

目的通过对α及β-珠蛋白基因测序分析发现罕见珠蛋白生成障碍性贫血(简称地贫)基因突变,了解罕见突变的出现频率,丰富中国人群地贫基因突变谱。方法采用一代测序对表型与基因型不符的患者进行α或β-珠蛋白基因编码区序列分析。结果通过测序发现102例罕见地贫基因突变,其中β-地贫79例,共35种突变类型;α-地贫23例,共11种突变类型。结论地贫基因测序可以发现罕见突变基因,明确患者的基因型,为罕见地贫家系产前诊断提供重要支持,降低漏检率,降低重型地贫患儿出生率。

69例αβ复合型地中海贫血的血液学和基因型研究

目的:分析69例αβ复合型地中海贫血患者基因型、血液学与临床表现的关系,探索和指导这类复杂基因型组合方式的临床诊断。方法:采用标准的血液学分析技术测量红细胞参数和血红蛋白组分。反向点杂交技术诊断β地中海贫血和α地中海贫血基因点突变,缺口聚合酶链反应技术检测α-地中海贫血缺失突变。结果:45例轻型β地中海贫血合并α地中海贫血(轻型复合型)患者的临床表现与β地中海贫血携带者无异;24例重型β地中海贫血合并α地中海贫血(重型复合型)则从重度贫血到轻度贫血均有,差异较大,但多数表型为中间型地中海贫血。69例患者中,β地中海贫血的突变基因类型共检出8种,α地中海贫血的突变基因类型共检出5种。结论:轻型复合型的临床表现以轻型β地中海贫血的表现为主,α地中海贫血被掩盖;重型复合型则多表现为中间型地中海贫血。这一结果提示我们进行地中海贫血的临床检测时,尤其对β地中海贫血携带者,建议常规同时进行α地中海贫血致病基因的筛查,防止误诊、漏诊发生,进而确保地中海贫血产前诊断的准确性。

MCV、MCH、HbA_2在妊娠期珠蛋白生成障碍性贫血筛查中的临床应用价值

目的探讨简单有效的珠蛋白生成障碍性贫血产前筛查策略,以提高妊娠期珠蛋白生成障碍性贫血筛查的检出率,减少漏诊和误诊。方法对照分析2010年1月至2014年12月本院妇产科诊治的1800例产检孕妇的平均红细胞体积(mean corpuscular volume,MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin,MCH)及血红蛋白(Hb)A2三个表型指标筛查结果与珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断结果,总结妊娠期珠蛋白生成障碍性贫血筛查策略。结果将MCV单独作为妊娠期珠蛋白生成障碍性贫血的筛查指标,其筛查的灵敏度为95.53%,特异性为60.21%,诊断符合率为86.11%;将MCV+MCH作为妊娠期珠蛋白生成障碍性贫血的筛查指标,其灵敏度为95.45%,特异性为59.58%,诊断符合率为85.89%;MCV+MCH+Hb A2用于筛查妊娠期β-珠蛋白生成障碍性贫血,灵敏度可达96.88%,对α-珠蛋白生成障碍性贫血的筛查灵敏度仅为77.24%,漏诊率较高。结论将MCV单纯作为妊娠期珠蛋白生成障碍性贫血的初级筛查指标,简单有效,易于在基层医院推广。MCV初筛阳性者可进一步行Hb A2检测,进行分类筛查,Hb A2升高者同时行β/α-珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断确诊,Hb A2降低则可仅行α-珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断。

Ⅰ型脊髓灰质炎病毒基因密码子使用偏好性分析

目的 分析Ⅰ型脊髓灰质炎病毒(简称脊灰病毒)基因密码子使用偏好性。方法 从NCBI基因数据库(GenBank)检索并筛选出40条Ⅰ型脊灰病毒株的基因信息,计算其相对同义密码子使用度(RSCU)值、有效密码子数(ENc)值。将Ⅰ型脊灰病毒基因中碱基C和G位于第三位的密码子占所有密码子的百分比[(C+G)3%]与ENc值进行关联性分析,绘制散点图,并与(C+G)3%标准曲线进行比较。采用主成分分析法对Ⅰ型脊灰病毒基因密码子的RSCU值进行分析,并利用分析获得的主因子绘制散点图,观察不同时间和地域的Ⅰ型脊灰病毒基因密码子使用偏好性。结果 Ⅰ型脊灰病毒基因密码子AGA、AGG、CCA、UCA和GUG的RSCU值均≥1.5,密码子GCG、CGA、CGG、CGC、UCG和ACG的RSCU值均≤0.5。Ⅰ型脊灰病毒的ENc平均值为53.633。40株Ⅰ型脊灰病毒毒株均位于(C+G)3%标准曲线以下。2009年之前分离出来的毒株均位于图的下方,2009年之后分离于不同国家或地区的毒株分别聚集于图的一处。结论 Ⅰ型脊灰病毒在AGA、AGG、CCA、UCA、GUG等密码子的使用上偏好性较强,在GCG、CGA、CGG、CGC、UCG、ACG等密码子的使用上偏好性较弱。Ⅰ型脊灰病毒在密码子使用偏好性上处于较弱水平。自然选择在Ⅰ型脊灰病毒基因密码子使用偏好性上起主要作用,不同时间和地域的Ⅰ型脊灰病毒基因密码子使用模式差异较大。

MCV、MCH和血红蛋白A2检测在地中海贫血筛查中的价值

目的 探讨平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白（Hb）含量（MCH）及HbA2等3项指标在地中海贫血（地贫）筛查中的价值,以及临床不同情况下地贫筛查的最佳策略.方法 选择2008年9月-2011年5月南方医科大学南方医院妇产科及内科门诊进行地贫筛查和地贫基因诊断的受检者1384例,其中1036例确诊地贫基因携带者为地贫组（包括α地贫408例、β地贫608例、αβ复合型地贫20例）；348例确诊非地贫基因携带者为非地贫组.所有受检者均进行了血液学表型指标筛查,并分别对单独应用MCV、MCH和HbA2作为地贫筛查指标、MCV＋ MCH联合应用作为地贫筛查指标以及MCV＋ MCH＋ HbA2联合筛查在两组受检者中诊断地贫的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断准确率进行对比分析.结果 （1）地贫组MCV筛查的灵敏度分别为：α地贫92.9％ （379/408）；β地贫99.3％（ 604/608）；αβ复合型地贫100.0％（ 20/20）.非地贫组MCV的特异度为75.0％ （261/348）.（2）地贫组MCH筛查灵敏度分别为：α地贫92.9％（ 379/408）；β地贫99.0％ （602/608）；αβ复合型地贫100.0％ （20/20）.非地贫组MCH特异度为72.7％ （253/348）.（3）地贫组HbA2筛查的灵敏度分别为：α地贫67.4％（ 275/408）,β地贫97.5％ （593/608）,αβ复合型地贫100.0％ （20/20）；非地贫组HbA2的特异度为72.4％（ 252/348）.（4）单独以MCV、MCH或MCV＋MCH为表型筛查指标,而以HbA2作为地贫分型结果显示,HbA2＞ 3.5％作为β地贫的分型标准对临床有重要指导意义,而以HbA2＜2.5％作为α地贫的分型标准则有较高的假阴性率.（5）MCV、MCH和HbA2单独作为地贫筛查指标时,MCV和MCH的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断符合率均高于HbA2.结论 MCV、MCV＋MCH及MCV＋MCH＋HbA23种不同的地贫筛查策略中,MCV＋MCH的初筛效果最优；而MCV＋ MCH＋ HbA2在β地贫筛查中效果最优.但针对MCV和MCH筛查阳性的孕妇,可直接行α及β地贫基因诊断.

206例地中海贫血家系产前基因诊断结果分析

目的 总结206例地中海贫血（简称地贫）产前诊断家系资料，分析其地域分布、基因型分布以及胎儿产前基因诊断结果，用于指导临床遗传咨询，避免高风险地区严重类型地贫患儿的出生。方法206例地贫产前诊断家系来自2008年1月至2009年12月期间于广州南方医科大学南方医院产前检查的地贫携带者孕妇及其配偶，抽取夫妇双方外周血和胎儿绒毛、羊水或脐血样本并提取DNA，以跨越断裂位点的聚合酶链反应（gappolymerasechainreaction，gap—PCR）技术和反向点杂交技术（reversedotblot，RDB）对a和β一地贫常见突变位点进行检测，同时对临床表型阳性而常见突变位点检测结果阴性的样本进行DNA测序。婴儿出生后半年电话随访婴儿表型。结果206例产前诊断家系来自包括黑龙江在内的12个不同省份和地区。a-地贫的基因突变类型有SEA、-a307／a402／、acsa／和aQsa／，全部为试剂盒中可检测的突变类型；而β-地贫的基因突变除常见的试剂盒中可检测到的类型外，还有中国型GY＋（AyQβ）0、-28（A—C）、CD5458（-TATGGGCAACCCT）和CD37（G—A）等4种突变类型无法用常规试剂盒做出诊断。57例a地贫家系中，产前诊断严重类型地贫11例（19．3％），包括巴氏水肿胎8例和HbH病3例，杂合子26例（45．6％），正常胎儿20例（35．1％）；149例β-地贫产前诊断家系中，严重类型地贫28例（18．8％），杂合子82例（55．0％），正常胎儿39例（26．2％），其中1例B地贫杂合子合并13三体。11例严重类型“地贫胎儿、28例严重类型β-地贫胎儿和1例β-地贫杂合子伴β-三体胎儿均在围产期前后接受了终止妊娠的处理。结论地贫的发病地域从长江以南各省逐渐扩散至一些北方地区。运用gap—PCR和PCR—RDB技术对地贫家系进行产前基因诊断，检出严重类型地贫胎儿，是降低高危地域严重类型地贫患儿出生的有效手段。但目前的试剂盒覆盖的检测位点在β-地贫筛查中存在漏诊现象，因此对临床表型阳性而常见突变位点检测结果阴性的样本进行DNA测序是十分必要的。此外，在进行地贫产前诊断的同时，也要注意染色体病产前诊断指征的确定。

十个缺失型β-地中海贫血家系的产前诊断

β-地中海贫血（简称β-地贫）是我国南方最常见的单基因遗传病之一，主要是因点突变（或少数几个核苷酸的插入或缺失）使β-珠蛋白肽链合成障碍（减少或缺如）所致。