鸡传染性贫血病毒湖北分离株XH16全基因组序列分析

为了解鸡传染性贫血病毒(CAV)的基因组特征及遗传变异情况,本试验对湖北某家禽养殖场中疑似CAV感染的肉鸡进行剖检,从其肝脏中分离得到1株病毒。通过聚合酶链式反应(PCR)试验验证为CAV,并将其命名为CAV-XH16。克隆该毒株全基因组,测序拼接得到全基因组序列,并将该毒株与国内外已发表的其他病毒序列进行遗传进化分析。结果显示,该分离株具有高毒力毒株的分子特征,属于亚洲CAV分离株所属的主要亚群A1亚群。与中国分离株JL14023(NCBI登记号KY486145)有99.65%的相似性。本试验为CAV分子流行病学研究和新型疫苗研发提供了参考依据。

应用基于重组慢病毒的CRISPR/Cas9技术构建基因突变的鸡DF1细胞

为证实基于慢病毒的CRISPR/Cas9基因编辑技术可用于鸡基因组编辑,以鸡的mavs基因为靶基因,通过设计sgRNA,构建表达靶向mavs基因sgRNA的重组慢病毒,并将其感染DF1-Cas9细胞,通过T7E1酶切试验以及mavs基因的靶向序列测定,分析该方法是否可以用于鸡细胞的基因编辑。扩增sgRNA靶向序列1 220 bp片段,经T7E1酶切琼脂糖凝胶分析可见约300 bp和900 bp大小的条带,表明感染sgRNA慢病毒的细胞mavs产生了突变。序列测定结果表明sgRNA靶向序列发生了多个碱基缺失的突变。以上结果表明基于慢病毒系统的CRISPR/Cas9技术可对鸡基因组进行编辑。

平板载荷试验在高速公路路基检测中的应用

路基检测是高速公路工程建设中的重要工作内容,基于平板载荷试验开展路基检测工作,能较为直接地展现出一定范围路基内压实填土的情况。基于此,在阐述平板载荷试验原理及应用特征的基础上,分析高速公路路基检测中平板载荷试验的操作要点,并提出平板载荷试验在具体检测项目中应用的注意事项,旨在提升平板载荷试验操作的规范性、精准性,保证路基检测效率。

鸡马立克氏病病毒和疫苗毒株PCR诊断方法的建立及其应用

研究旨在快速有效地诊断鸡马立克氏病(MD),区分MD血清Ⅰ型病毒(MDV-Ⅰ)与疫苗毒株。试验对Gen Bank发表的140余株MDV序列进行全基因组比对,选定MDV-Ⅰ型特有的meq基因设计1对引物,通过优化退火温度等条件建立了MDV-Ⅰ的PCR诊断方法,评估该方法的特异性、灵敏度及重复性。结果显示,设定退火温度64℃、35个循环时,以MDV-Ⅰ型毒株为模板可扩增得到286 bp的片段;以CVI988或814疫苗毒株为模板时,可扩增得到463 bp的片段;该方法特异性强、灵敏度高,扩增结果稳定,可区分MDV-Ⅰ型毒株和疫苗毒株。应用该方法诊断1例免疫后仍有MD症状的鸡,可同时扩增约286和463 bp的片段;2个片段的测序结果显示,扩增出的片段分别与MDV-Ⅰ型毒株和疫苗毒株相匹配。研究表明,试验建立的PCR方法可快速有效地诊断MDV-Ⅰ型毒株感染鸡并筛选免疫失败的鸡群。

鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白VP1在大肠杆菌中的可溶性表达

为了获得具有活性的鸡传染性贫血病毒(CIAV)的衣壳蛋白,给疫苗的研制和诊断试剂的开发提供新的思路。根据已发表的CIAV VP 1编码基因的序列并结合大肠杆菌偏爱密码子分析,合成了VP 1(去掉N′端80个氨基酸)的编码序列,并利用大肠杆菌进行表达,SDS-PAGE结果表明,表达产物主要为不可溶的包涵体蛋白。进一步利用伴侣蛋白使VP1蛋白的可溶性表达产量得到提高,并确定了诱导重组表达VP1蛋白的最佳条件:16℃、0.08 mmol/L IPTG诱导。利用Ni 2+树脂对重组VP1蛋白进行纯化,然后利用间接ELISA方法进行检测,发现该重组蛋白可与CIAV阳性血清发生反应。本研究成功利用伴侣蛋白促进VP1蛋白的可溶性表达,而且表达的VP1蛋白有良好的免疫反应,具有开发为新型亚单位疫苗和诊断抗原的潜力。