左金丸对IEC6、HCT116细胞共培养模型肠上皮屏障功能的保护及机制研究

目的 研究左金丸对IEC6、HCT116细胞共培养模型肠上皮屏障功能的影响,并初步探讨其作用机制。方法 采用左金丸醇提物低、中、高剂量(5、10、20μg·mL^(-1))处理HCT116、IEC6细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况。通过体外构建IEC6、HCT116细胞共培养体系模拟结肠癌微环境,以左金丸(5、10、20μg·mL^(-1))进行干预;检测IEC6细胞跨膜电阻(TEER)值及细胞通透性;采用高效液相色谱(HPLC)法检测HCT116、IEC6细胞多胺含量;微量法检测HCT116细胞的葡萄糖消耗量、乳酸及ATP含量;Western Blot法检测IEC6细胞Zonula occluden 1(ZO-1)、Occludin蛋白和HCT116细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC)、精眯/精胺N1-乙酰基转移酶(SSAT)、鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)、SLC22A1、缺氧诱导因子1(HIF1α)、C-Myc、己糖激酶2(HK2)、丙酮酸激酶M2亚型(PKM2)、丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)、葡萄糖转运体1(GLUT1)、乳酸脱氢酶(LDHA)蛋白表达情况。结果 (1)与对照组比较,左金丸低、中、高剂量(5、10、20μg·mL^(-1))处理HCT116细胞24、48、72 h后,细胞增殖抑制率显著升高(P<0.01);左金丸低、中、高剂量(5、10、20μg·mL^(-1))处理IEC6细胞24 h后,细胞增殖抑制率无明显变化(P>0.05)。(2)与IEC6细胞单培养组比较,共培养模型组细胞的TEER及FD4荧光强度显著降低(P<0.01);紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达量显著降低(P<0.01);IEC6细胞的多胺含量显著降低(P<0.01)。与HCT116细胞单培养组比较,共培养模型组HCT116细胞的多胺含量显著增加(P<0.01)。与共培养模型组比较,左金丸中、高剂量组细胞的TEER及FD4荧光强度显著升高(P<0.01);左金丸高剂量组IEC6细胞ZO-1、Occludin蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01);左金丸低、中、高剂量组的IEC6细胞多胺含量显著增加(P<0.01),而左金丸中、高剂量组HCT116细胞的多胺含量显著降低(P<0.01)。(3)与对照组比较,左金丸能明显下调HCT116细胞多胺合成酶ODC、多胺转运体SLC22A1蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),明显上调SSAT、OAZ1蛋白表达(P<0.05,P<0.01);能够明显抑制HCT116细胞的葡萄糖消耗量、乳酸生产量及ATP含量(P<0.05,P<0.01);明显下调糖酵解通路HIF1α、C-Myc、HK2、PKM2、PDK1、GLUT1、LDHA蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论 左金丸对IEC6、HCT116细胞共培养模型肠上皮屏障功能具有保护作用,对结肠癌HCT116细胞具有增殖抑制作用,可能与其调节HCT116细胞多胺代谢、转运以及抑制肿瘤糖酵解水平有关。

基于P53和多胺代谢探讨黄芪注射液对HCT116细胞能量代谢的影响

目的研究黄芪注射液(AI)对人结直肠腺癌细胞(HCT116)的多胺合成表达的影响以及多胺与糖酵解的关系,在此基础上探讨P53是否可通过调节肿瘤多胺代谢途径抑制肿瘤糖酵解,从而抑制HCT116细胞株增殖。方法实验分为对照组(基础培养基处理)和低、中、高浓度实验组(100,200和400 g·L^(-1)AI)。干预48 h后,用流式细胞术检测细胞的凋亡情况,用蛋白质印迹法检测P53、鸟氨酸脱羧酶(ODC)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)及乳酸脱氢酶A(LDHA)的表达水平,用HPLC法测定细胞多胺含量。结果中、高浓度实验组和对照组的凋亡率分别为(9.45±0.29)%,(13.38±2.81)%和(4.79±0.14)%,P53蛋白相对表达水平分别为1.41±0.06,1.43±0.13和1.00,ODC蛋白相对表达水平分别为0.69±0.18,0.57±0.27和1.00,GLUT1蛋白相对表达水平分别为0.62±0.27,0.41±0.15和1.00,LDHA蛋白相对表达水平分别为0.68±0.22,0.47±0.21和1.00,多胺含量分别为(8.04±0.88)×10^(-3),(5.68±0.99)×10^(-3),(10.53±0.39)×10^(-3)μmol/10^(6)cells,中、高浓度实验组的上述指标与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.05)。结论黄芪注射液可抑制人结直肠腺癌细胞(HCT116)增殖,并通过上调P53的表达促进多胺代谢,从而抑制HCT116细胞糖酵解。