犬源伪狂犬病毒的分离与鉴定

2012与2013年冬季，本实验室从长春市某宠物诊所连续收到疑似伪狂犬病毒感染的2份犬脑组织病料，接种Vero细胞，分离到2株病毒，经电镜观察、动物回归试验及PCR扩增鉴定为伪狂犬病毒，命名为JLCC-2012和JLCC-2013株。PCR扩增病毒gC基因序列，经遗传进化分析显示，2株PRV gC基因同源性为100%，且与国内犬源分离株BJ/RD、BJ/YT同源性分别为99.93%、100%，与猪源病毒分离株同源性为94.33%~100%，与国外猪源病毒分离株同源性为93.58%~94.81%。结果表明本研究分离株为与最近报道的犬源毒株系相近的流行毒株。

犬副流感病毒CC-14株全基因组测序及分析

为研究犬副流感病毒（CPIV）CC-14株全基因组序列特征，本研究参照猴病毒5型全基因组序列设计了覆盖CPIVCC-14株基因组全长的14对引物，对CPIVCC-14株进行RT—PCR分段扩增，扩增产物分别克隆于pMD18-T载体中，以通用引物进行序列测定、拼接并分析。结果显示，CPIVCC-14株全基因组序列大小为15246nt（KP893891）。以高度保守的1530bpNP基因序列对现有的CPIV进行系统发生分析，同源比对结果显示，CPIV CC-14株与其他17株参考序列的核苷酸同源性为97．25％～99．80％，推导氨基酸同源性为98．62％～99．80％：系统发生分析显示，CC-14株与长春牛源PV5-BC14株同属一个分支。

副流感病毒5型的分子生物学研究进展

副流感病毒5型(Parainfl uenza virus 5,PIV5)为一类不分节段单股负链RNA病毒,可引起多种动物呼吸道感染,尤其可致犬病发"犬窝咳"。本文围绕PIV5病毒特征、基因组特征、编码蛋白、病毒的转录与复制以及PIV5相关疫苗的研究做一综述,旨在为PIV5疾病监测和PIV5相关疫苗研究提供科学依据。

素质教育背景下如何做好小学班主任管理工作研究

小学生处于生长发育年龄阶段的特殊时期,班主任在此时的管理教学当中起到关键性的引导作用,不仅需为小学生今后的学习 习惯养成起到必要的管理,还要为其价值观的形成进行相应的引导,使得学生自身的创造性和可塑性得以被激发,本文主要依照当下素质 教育的时代政策背景下,有效探究在当下如何做好小学班主任的管理工作,为今后班主任的管理工作提供必要的价值参考。

狂犬病病毒磷蛋白重组人5型腺病毒的构建及鉴定

目的构建表达狂犬病病毒(rabies virus,RABV)BD06株磷蛋白(phosphoprotein,P)的重组人5型腺病毒,并进行鉴定。方法质粒p MD18-T-BD06P经双酶切后,获得完整的P蛋白基因,将其克隆至腺病毒表达系统穿梭质粒pac Ad5CMVK-Np A,构建重组穿梭质粒pac Ad5CMV-BD06P,与骨架质粒pac Ad5 9.2-100经PacⅠ酶切线性化后,共转染HEK293AD细胞,经同源重组,获得表达RABV P蛋白的重组人5型腺病毒r Ad5-BP。采用K覿ber法计算r Ad5-BP滴度,RT-PCR、Western blot、直接免疫荧光方法(direct immunofluorescence assay,d FA)检测P蛋白基因在HEK-293AD细胞的转录及表达水平。以107 TCID50r Ad5-BP肌肉注射免疫昆明小鼠,14 d后,经尾静脉采血,分离血清,IFA法检测抗RABVP蛋白抗体及其反应活性。结果经酶切及测序鉴定证明重组穿梭质粒pac Ad5CMV-P构建正确;重组腺病毒r Ad5-BP滴度可达108 TCID50/ml,能够介导P蛋白在HEK293AD细胞中的转录及表达,接种小鼠后可刺激机体产生针对RABVP蛋白抗体,且与RABV具有良好的反应活性。结论成功构建了RABVBD06株P蛋白重组人5型腺病毒,该病毒能够介导P蛋白在小鼠体内有效表达,刺激机体产生针对RABVP蛋白抗体,且与RABV具有良好的反应活性,为进一步研究RABV P蛋白在病毒感染过程中的作用奠定了基础。

副流感病毒5型CC-14株辅助质粒的构建及鉴定

目的构建副流感病毒5型(parainfluenza virus 5,PIV5)CC-14株核衣壳蛋白(nucleoprotein,NP)、磷蛋白(phosphoprotein,P)和聚合酶蛋白(large protein,L)基因真核表达质粒,并在MDCK细胞中表达,为该病毒反向遗传系统的建立奠定基础。方法根据PIV5 CC-14株全基因组中的NP、P和L基因分别设计特异性引物,经RT-PCR扩增得到NP、P和L基因,酶切后分别连接至pc DNA3.1+真核表达载体(或p MD18-T)上,构建辅助质粒pc DNA3.1-NP、pc DNA3.1-P和pc DNA3.1-L,转染MDCK细胞,RT-PCR检测NP、P和DL基因的转录情况。结果经双酶切及测序鉴定证明辅助质粒pc DNA3.1-NP、pc DNA3.1-P和pc DNA3.1-L构建正确,3个质粒转染MDCK细胞后,经RT-PCR分别可扩增得到NP、P和DL基因片段。结论成功构建了PIV5 CC-14株pc DNA3.1-NP、pc DNA3.1-P和pc DNA3.1-L辅助质粒,且均可在MDCK细胞中有效转录,为该病毒反向遗传系统的建立奠定了基础。

副流感病毒5型载体研究进展

负链RNA病毒的反向遗传学技术是一种新兴的分子生物学技术,作为负链RNA病毒的副流感病毒5型(parainfluenza virus 5,PIV5),是一种极具应用潜力的重组病毒活载体。现结合PIV5病毒载体特征,对其重组病毒的反向遗传学及其应用等做简要综述。

探寻新型HCV同源病毒的自然宿主

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染是一个世界性的公共卫生问题,该病毒感染后可引起急、慢性肝炎。由于HCV的宿主范围较窄,一直未找到合适的动物模型来研究该病毒的致病机制、免疫预防等,至今也无证据表明动物源的HCV同源病毒可能跨种传播给人类。最近,研究者在小型野生动物(如啮齿类动物、蝙蝠)和家养动物(如犬、马、牛)中相继发现了新型HCV同源病毒(HCV样病毒和GBV样病毒),这些病毒分别属于丙型肝炎病毒属(hepacivirus)或持续性G病毒属(pegivirus),研究这些病毒的基因组结构和生物学特征有助于HCV的起源及其致病机制和免疫等研究。本综述从HCV基本特征、相关病毒谈起,着重介绍新型HCV同源病毒,并探寻其自然宿主,进而讨论了人类重要病原之一HCV的起源问题。