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丙二醇联合肝细胞生长因子修饰牙髓干细胞外泌体保护人表皮细胞的放射损伤
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作者 刘云 靳嘉岩 +6 位作者 刘玉斌 李强 任博媛 刘赫 吴祖泽 周钢桥 靳继德 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第13期2002-2008,共7页
背景:肿瘤放疗以及核事故等原因引起的放射性皮肤损伤救治仍旧是一个严重的医学问题,单一的防治手段均难以达到有效的治疗结果,寻找新的综合治疗手段是重要的研究方向。目的:观察丙二醇联合肝细胞生长因子修饰牙髓干细胞来源外泌体对于... 背景:肿瘤放疗以及核事故等原因引起的放射性皮肤损伤救治仍旧是一个严重的医学问题,单一的防治手段均难以达到有效的治疗结果,寻找新的综合治疗手段是重要的研究方向。目的:观察丙二醇联合肝细胞生长因子修饰牙髓干细胞来源外泌体对于人表皮放射性损伤细胞模型的保护作用及相关作用机制。方法:①使用携带人肝细胞生长因子基因的重组腺病毒感染人牙髓干细胞,超速离心法分离制备外泌体,即Ad.HGF DPSC-Exo。②通过X射线照射诱导人表皮细胞HaCaT放射损伤,细胞分别于照射前用丙二醇预处理,照射后用Ad.HGF DPSC-Exo处理。通过CCK-8法测定细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,PCR检测P21和P53的表达水平。结果与结论:丙二醇、Ad.HGF.DPSC-Exo、Ad.HGF.DPSC-Exo+丙二醇均可显著改善HaCaT细胞的生长抑制、减少细胞凋亡、提高细胞增殖和迁移能力,显示出较好的辐射防护效果,且Ad.HGF.DPSC-Exo+丙二醇联合作用效果更好。此外,Ad.HGF.DPSC-Exo+丙二醇能够减轻细胞G2/M期阻滞,降低细胞周期调控基因P53和P21的表达。综上所述,丙二醇预处理联合Ad.HGF.DPSC-Exo能够有效保护放射诱导的HaCaT细胞损伤,为辐射性皮肤损伤的防治提供了新的思路和有效方法。 展开更多
关键词 放射性皮肤损伤 辐射保护 1 2-丙二醇 干细胞 外泌体
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丙氨酰谷氨酰胺对创伤大鼠静脉营养效用的研究 被引量:18
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作者 靳继德 郑子新 +3 位作者 韦京豫 杨继军 郭长江 徐琪寿 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期151-154,共4页
目的 比较丙氨酰谷氨酰胺二肽 (Ala- Gln)和谷氨酰胺 (Gln)对创伤大鼠静脉营养支持的效果。方法  36只 Wistar雄性大鼠 (2 0 0± 1 0 ) g,随机分为对照、Ala- Gln和 Gln组 ,行创伤和中心静脉插管手术后 ,分别输以不含 Gln、含 1 .... 目的 比较丙氨酰谷氨酰胺二肽 (Ala- Gln)和谷氨酰胺 (Gln)对创伤大鼠静脉营养支持的效果。方法  36只 Wistar雄性大鼠 (2 0 0± 1 0 ) g,随机分为对照、Ala- Gln和 Gln组 ,行创伤和中心静脉插管手术后 ,分别输以不含 Gln、含 1 .8% Ala- Gln或 1 .2 % Gln的等氮、等能量结晶氨基酸注射液 ,喂以无氮饲料 ,实验期为 1 4天。测定氮平衡、血浆氨基酸和蛋白质含量、尾血淋巴细胞转化反应和小肠粘膜核酸、蛋白质含量等指标。结果 Ala- Gln和 Gln组动物术后 8天氮平衡、血浆 Gln的浓度、外周血淋巴细胞转化率和小肠粘膜 DNA、RNA、蛋白质含量均显著高于对照组(P<0 .0 5)。结论  Ala- Gln和 Gln都有助于改善创伤后机体的代谢状况 ,增强免疫功能 ,促进小肠粘膜细胞增殖 ,以维持肠道的完整性 ,Ala- Gln与 Gln具有相同的营养支持效果。 展开更多
关键词 丙氨酰谷氨酰胺 谷氨酰胺 创伤 静脉营养
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Ala-Gln和BCAA对创伤大鼠营养支持作用的实验研究 被引量:9
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作者 靳继德 郑子新 +4 位作者 王钢乐 韦京豫 杨继军 郭长江 徐琪寿 《中国临床营养杂志》 2001年第1期18-19,共2页
目的 观察富含丙氨酰谷氨酰胺 (Ala Gln)和支链氨基酸 (BCAA)的氨基酸注射液 ,对创伤大鼠的营养支持效果。 方法 Wistar大鼠 40只 ,行创伤和中心静脉插管后 ,随机分为无氮组、正常饲料组、对照组和实验组。测定饲料摄入量、体重、氮... 目的 观察富含丙氨酰谷氨酰胺 (Ala Gln)和支链氨基酸 (BCAA)的氨基酸注射液 ,对创伤大鼠的营养支持效果。 方法 Wistar大鼠 40只 ,行创伤和中心静脉插管后 ,随机分为无氮组、正常饲料组、对照组和实验组。测定饲料摄入量、体重、氮平衡、血浆蛋白和氨基酸含量、外周血淋巴细胞转化率、伤口埋植海绵中羟脯氨酸含量、皮肤抗张力强度和小肠粘膜蛋白质及核酸。 结果 无氮组动物营养状况欠佳 ,各项指标均较差。实验组动物的血浆谷氨酰胺 (Gln)、BCAA含量、外周血淋巴细胞转化率、伤口皮肤抗张力强度和羟脯氨酸含量均显著高于对照组和正常饲料组 (P <0 .0 5 )实验组和正常饲料组动物第 8天氮平衡 ,小肠粘膜核酸和蛋白质明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。 结论 Gln和BCAA有助于改善创伤后机体的营养及代谢状况 ,增强免疫功能 ,促进小肠粘膜细胞增殖。 展开更多
关键词 丙氨酰谷氨酰胺 支链氨基酸 创伤 营养支持
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谷氨酰胺二肽在肠外营养中的应用 被引量:6
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作者 靳继德 徐琪寿 《氨基酸和生物资源》 CAS 1997年第4期45-49,共5页
虽然谷氨酰胺(Gln)具有许多重要的生理功能,但是由于它不稳定性及低溶解度,使其应用受到限制。Gln二肽克服了它的缺点,并可被机体有效分解为氨基酸而被利用且没有任何毒副作用和不良反应。本文综述了Gln二肽的代射及其在... 虽然谷氨酰胺(Gln)具有许多重要的生理功能,但是由于它不稳定性及低溶解度,使其应用受到限制。Gln二肽克服了它的缺点,并可被机体有效分解为氨基酸而被利用且没有任何毒副作用和不良反应。本文综述了Gln二肽的代射及其在肠外营养中的应用,Gln的许多生理作用在Gln二肽也逐步得以证实。 展开更多
关键词 谷氨酰氨二肽 肠外营养 营养疗法
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比色法测定复合氨基酸注射液中的N-乙酰-L-半胱氨酸 被引量:1
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作者 靳继德 徐琪寿 童旭彬 《氨基酸和生物资源》 CAS 1999年第2期4-6,共3页
根据N-乙酰-L-半胱氨酸与氯化钯(PdCl2)反应,生成一种稳定的黄色化合物,我们建立了比色测定复合结晶氨基酸注射液中的NAC的方法。测定波长为375nm,检测结果重现性好,变异系数是3.9%,回收率范围在93.1... 根据N-乙酰-L-半胱氨酸与氯化钯(PdCl2)反应,生成一种稳定的黄色化合物,我们建立了比色测定复合结晶氨基酸注射液中的NAC的方法。测定波长为375nm,检测结果重现性好,变异系数是3.9%,回收率范围在93.1%~100.2%之间,检测下限为0.163μg/ml。该方法比经典的电量滴定法灵敏度高、精确性好,较高压液相色谱法操作简便、费用低。 展开更多
关键词 比色法 乙酰半胱氨酸 氨基酸注射液 NAC
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丙氨酰谷氨酰胺对实验创伤大鼠静脉营养效用的实验研究
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作者 靳继德 郑子新 +3 位作者 徐琪寿 韦京豫 杨继军 郭长江 《中国临床营养杂志》 1999年第4期177-177,共1页
目的创伤引起机体分解代谢增强,并对谷氨酰胺(Gln)的需求量增加,补充外源性Gln十分必要。但是由于Gln在溶液中不稳定,加热产生有毒的焦谷氨酸和氨,使其在肠外营养中的应用受到限制,丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)性质稳定,在肠外... 目的创伤引起机体分解代谢增强,并对谷氨酰胺(Gln)的需求量增加,补充外源性Gln十分必要。但是由于Gln在溶液中不稳定,加热产生有毒的焦谷氨酸和氨,使其在肠外营养中的应用受到限制,丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)性质稳定,在肠外营养中的应用日益受到重视。方法采用创伤大鼠中心静脉输注模型,对Ala-Gln和Gln的肠外营养效用进行了比较。36只Wistar雄性大鼠(200±10g),随机分为对照、Ala-Gln和Gln组,行创伤和中心静脉插管手术后,分别输以不含Cln、含1.8%Ala-Gln或1.2%Gln的复合结晶氨基酸注射液(1.0g·d-1·kg-1),喂以无氮饲料,实验期为14天。每日称取食料摄入量,隔日称体重,第4、8天,收集24h尿,进行氮平衡分析,实验结束时,测定动物的血浆总蛋白、白蛋白、前白蛋白、纤维结合蛋白和血浆Gln含量,外周血T淋巴细胞转化反应及小肠粘膜核酸、蛋白质含量。结果各组动物之间的摄食量、体重、血浆总蛋白、白蛋白和前白蛋均差异尤显著性。创伤和中心静脉插管的刺激引起动物血浆纤维结合蛋白较术前升高,但Ala-Gln和Gln组动物恢复状况好于对照组(P<0.05)。Ala-Gln和Gln组动物的氮平衡、血浆Gln浓度、外周血淋巴细胞转比率及小肠粘膜DNA、RNA和蛋白质含量均显著高于对照组(P<0? 展开更多
关键词 丙氨酰谷氨酰胺 创伤 大鼠 静脉营养 淋巴细胞 粘膜细胞
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Ala-Gln和BCAA对创伤大鼠静脉营养支持作用的实验研究
7
作者 靳继德 徐琪寿 +2 位作者 韦京豫 郭长江 郑子新 《中国临床营养杂志》 2000年第1期28-28,共1页
目的观察富含丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)和支链氨基酸(BCAA)的氨基酸注射液对创伤大鼠的静脉营养支持效果。方法Wistar大鼠40只,行创伤和中心静脉插管后,随机分为无氮组、正常饲料组、对照组和实验组。测定饲料摄入量、体重、氮平... 目的观察富含丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)和支链氨基酸(BCAA)的氨基酸注射液对创伤大鼠的静脉营养支持效果。方法Wistar大鼠40只,行创伤和中心静脉插管后,随机分为无氮组、正常饲料组、对照组和实验组。测定饲料摄入量、体重、氮平衡、血浆蛋白和氨基酸含量、外周血淋巴细胞转化率、伤口埋植海绵中羟脯氨酸含量、皮肤抗张力强度和小肠粘膜蛋白质及核酸。结果无氮组动物营养状况欠佳,各项指标均较差。实验组动物的血浆谷氨酰胺(Gln)、BCAA含量,外周血淋巴细胞转化率,伤口皮肤抗张力强度和羟氨酸含量都显著高于对照组和正常饲料组(P<0.05);实验组和正常饲料组动物第8天氮平衡,小肠粘膜核酸和蛋白质明显高于对照组(P<0.05)。结论Gln和BCAA有助于改善创伤后机体的营养及代谢状况,增强免疫功能,促进小肠粘膜细胞增殖。 展开更多
关键词 实验研究 支持作用 静脉营养 BCAA 大鼠 创伤 丙氨酰谷氨酰胺 营养支持效果 氨基酸注射液 支链氨基酸
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人脐带源间充质干细胞分离培养方法的改进 被引量:9
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作者 李艳琪 王洪一 +6 位作者 姚尧 刘晶晶 徐潇 张宇 刘洋 吴祖泽 靳继德 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第10期1609-1614,共6页
背景:脐带来源的间充质干细胞因其具有高度的自我更新和多向分化潜能,以及取材方便等优点而日益受到关注。目的:建立一种改进的人脐带间充质干细胞分离、培养方法,并对其生物学特性进行分析。方法:无菌条件下获取足月妊娠分娩胎儿脐带,... 背景:脐带来源的间充质干细胞因其具有高度的自我更新和多向分化潜能,以及取材方便等优点而日益受到关注。目的:建立一种改进的人脐带间充质干细胞分离、培养方法,并对其生物学特性进行分析。方法:无菌条件下获取足月妊娠分娩胎儿脐带,利用改良的组织块贴壁法分离培养脐带间充质干细胞,即将传统组织贴壁法中本应丢弃的组织转移到新的培养瓶中进行二次贴壁培养,取第3代脐带间充质干细胞进行生物学特性分析。结果与结论:组织贴壁后第5-7天可见有梭形细胞从组织块边缘爬出,第10天左右可形成明显的细胞克隆。将组织块转移到新培养瓶中继续培养,2 d后即可见有细胞爬出,细胞生长速度较快,5 d即可形成细胞克隆。传代后的细胞形态均一,呈成纤维细胞样的长梭形。流式细胞仪检测细胞高表达CD90、CD105,不表达CD34、CD45、HLA-DR。细胞增殖能力旺盛,平均倍增时间为50 h左右,41.24%的细胞处于G2/S期。体外可诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞。上述实验结果证明二次贴壁培养出的细胞也具有间充质干细胞的生物学特性,而且通过这种培养方法获得的原代间充质干细胞数是传统方式培养的2倍。 展开更多
关键词 干细胞 脐带脐血干细胞 脐带 间充质干细胞 分离培养 二次贴壁
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胎盘源间充质干细胞分离提取的新方法 被引量:5
9
作者 刘洋 李艳琪 +7 位作者 王洪一 吴晓冰 荆永光 徐潇 姚尧 张宇 吴祖泽 靳继德 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2015年第10期1608-1612,共5页
背景:胎盘是获取间充质干细胞的理想来源,在干细胞治疗和再生医学中具有潜在广泛的用途,建立高效分离提取方法有助于其存储和临床应用。目的:分析组织绞碎加酶液消化法培养人胎盘间充质干细胞的生物学特性。方法:采用组织绞碎加酶液消... 背景:胎盘是获取间充质干细胞的理想来源,在干细胞治疗和再生医学中具有潜在广泛的用途,建立高效分离提取方法有助于其存储和临床应用。目的:分析组织绞碎加酶液消化法培养人胎盘间充质干细胞的生物学特性。方法:采用组织绞碎加酶液消化法分离、富集胎盘组织中间充质干细胞,应用流式细胞术检测细胞表面标记,MTT法分析增殖能力,并采用诱导剂定向诱导胎盘间充质干细胞成脂、成骨和成软骨分化。结果与结论:胎盘组织来源间充质干细胞在体外可稳定长期传代培养,应用流式细胞仪检测结果显示CD73、CD90、CD105表达阳性,CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DR表达阴性。胎盘间充质干细胞增殖活跃,第3-5天进入对数生长期,第6天进入平台期。经诱导后,胎盘间充质干细胞具有向脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞分化的潜能。结果表明联合利用组织绞碎和酶液消化法可高效获取胎盘间充质干细胞,在体外培养过程中生长稳定,增殖能力强,可长期传代。 展开更多
关键词 胎盘 间质干细胞 细胞培养技术 干细胞 培养 胎盘间充质干细胞 组织绞碎 酶消化 细胞培养
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人骨髓间充质干细胞经肝细胞生长因子基因修饰后的促进鸡胚血管新生 被引量:5
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作者 刘滋康 靳继德 +2 位作者 何梓铭 秦宜德 郭子宽 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期986-989,共4页
本研究目的是评价人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMMSC)经肝细胞生长因子基因(hepatocyte growth factor,HGF)修饰后的促血管新生效应,并初步分析其机理。利用重组腺病毒HGF转染hBMMSC,将细胞接种于鸡... 本研究目的是评价人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMMSC)经肝细胞生长因子基因(hepatocyte growth factor,HGF)修饰后的促血管新生效应,并初步分析其机理。利用重组腺病毒HGF转染hBMMSC,将细胞接种于鸡胚绒毛膜尿囊膜,与α-MEM、同代hBMMSC及bFGF比较,3天后计算其血管数量。用RT-PCR检测hBMMSC表达bFGF、VEGF、血管生成素-1和血管生成素-2的水平。结果表明:4个组中hBMMSC/HGF促血管生成能力最强,hBMMSC和bFGF组相近,α-MEM组最低。RT-PCR检测显示,hBMMSC和hBMMSC/HGF均表达多种促血管生成相关细胞因子,而HGF转染后表达水平升高。结论:经HGF基因修饰的hBMMSC具有较强的促血管新生的功能,本研究为缺血性疾病的治疗提供了有益的信息。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 间充质干细胞 血管新生 基因转移
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水蛭素融合蛋白研究进展 被引量:5
11
作者 张传领 于爱平 +1 位作者 靳继德 吴祖泽 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第1期215-218,共4页
水蛭素是一种高效特异的凝血酶抑制剂,临床上用于血栓病的预防和治疗,但它半衰期短、出血副作用强和功能单一。近年来,通过把水蛭素与某些功能蛋白融合表达来解决这些问题,得到的融合蛋白或在体内延长水蛭素的半衰期,或降低其出血副作用... 水蛭素是一种高效特异的凝血酶抑制剂,临床上用于血栓病的预防和治疗,但它半衰期短、出血副作用强和功能单一。近年来,通过把水蛭素与某些功能蛋白融合表达来解决这些问题,得到的融合蛋白或在体内延长水蛭素的半衰期,或降低其出血副作用,或带来新的功能,如:溶栓、抑制血小板凝集、特异寻靶等。本文对近年来国内外水蛭素融合蛋白研究状况进行综述。 展开更多
关键词 水蛭素 融合蛋白 抗凝 血栓形成
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脐带来源间充质干细胞的制备及其质量检定 被引量:7
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作者 孙瑞婷 陈瑶瑶 +5 位作者 王华 靳继德 汪劲松 刘冬梅 王立生 吴祖泽 《中国医药生物技术》 2013年第6期401-407,共7页
目的研究脐带来源间充质干细胞(UC-MSCs)的扩增工艺及质量检验方法,提出质量控制标准,为临床研究提供合格的干细胞产品。方法新鲜脐带去羊膜及血管,剪碎,组织块放入无菌培养皿,在培养箱进行脐带间充质干细胞培养、扩增。细胞培养至P3代... 目的研究脐带来源间充质干细胞(UC-MSCs)的扩增工艺及质量检验方法,提出质量控制标准,为临床研究提供合格的干细胞产品。方法新鲜脐带去羊膜及血管,剪碎,组织块放入无菌培养皿,在培养箱进行脐带间充质干细胞培养、扩增。细胞培养至P3代,按照《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则》(征求意见稿)进行干细胞质量的全面检定。检定内容包括无菌检测,支原体检测,人源特定病毒及猪源病毒检测,内毒素检测,细胞形态、细胞数及细胞活率检测,染色体核型分析,干细胞免疫表型检测,STR图谱分析,免疫抑制活性检测及分化能力检测。结果按照标准化流程对18根脐带进行了UC-MSCs的分离、纯化及培养,获得一致性较好的干细胞。通过对干细胞进行质量检定,很好地控制了干细胞的质量。干细胞活性在冻存前≥90%,冻存复苏后≥80%;该工艺生产的脐带MSC产品无细菌、人源特定病毒及猪细小病毒、支原体等微生物污染,内毒素检测阴性;干细胞免疫表型检测CD90、CD105呈阳性,阳性率不低于95%;CD31、CD34、HLA-DR呈阴性,阳性率不高于2%;染色体核型分析为46XX或46XY,无缺失及插入突变;STR图谱分析证实干细胞为单一人来源;UC-MSCs具有成脂及成骨分化潜能;UC-MSCs能抑制异源淋巴细胞增殖。结论按本工艺及标准制备的UC-MSCs符合《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则》的质量控制标准,为同类干细胞制备及检定过程标准化提供了实验依据。 展开更多
关键词 间质干细胞 质量控制 细胞表型 分化能力 染色体核型分析 STR 图谱分析
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肝细胞生长因子基因修饰的人骨髓间充质干细胞促进大鼠肢体血管新生 被引量:9
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作者 刘滋康 具星爱 +2 位作者 靳继德 秦宜德 郭子宽 《组织工程与重建外科杂志》 2010年第2期61-65,共5页
目的评价肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)修饰的人骨髓间充质干细胞(Human bone marrow mesenchymal stem cells,hMSC)体内促血管新生效应,探讨其作用机制。方法结扎Wistar大鼠右侧股动脉,建立局部肢体缺血模型。将hMSC、... 目的评价肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)修饰的人骨髓间充质干细胞(Human bone marrow mesenchymal stem cells,hMSC)体内促血管新生效应,探讨其作用机制。方法结扎Wistar大鼠右侧股动脉,建立局部肢体缺血模型。将hMSC、hMSC/Ad-HGF或PBS,通过肌肉注射接种于缺血区,21d后以对侧肢体为正常对照,进行激光多普勒灌注成像测定、HE染色和免疫组化检查,评价骨骼肌微血管密度。以MTT、Transwell及内皮细胞体外管状结构形成实验,评价hMSC/Ad-HGF对血管内皮细胞的体外增殖、迁移及成管状能力的影响。结果 21d后,hMSC/Ad-HGF和hMSC组血流灌注水平明显高于对照组(P<0.01),前者接近PBS组,显著高于hMSC组(P<0.05)。组织学分析表明,每高倍视野肌肉组织中,hMSC/Ad-HGF组微血管数量最高,PBS组和hMSC组次之,对照组最低(P<0.01)。hMSC/Ad-HGF培养上清可明显促进ECV304细胞的增殖,刺激作用高于表皮生长因子(20ng/mL,P<0.001);促进细胞跨膜迁移和管状样结构形成,强于表皮生长因子。结论 hMSC/Ad-HGF可促进血管内皮细胞的增殖、迁移及血管结构重建,从而引发血管新生效应。 展开更多
关键词 间充质干细胞 肝细胞生长因子 血管新生 基因转移
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hHGF基因修饰的hUC-MSCs移植在急性心肌梗死模型心肌损伤修复中的作用 被引量:2
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作者 靖文斌 张嵬 +6 位作者 杨力 朱德琳 靳继德 张亚东 陈越 刘晓程 孙忠 《山东医药》 CAS 2014年第3期23-26,共4页
目的观察人肝细胞生长因子(hHGF)基因修饰的人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)移植在急性心肌梗死模型心肌损伤修复中的作用。方法用携带hHGF基因的腺病毒基因表达载体以150感染强度(MOI)转染hUCMSCs,获得hHGF基因修饰的hUC-MSCs。30只广西... 目的观察人肝细胞生长因子(hHGF)基因修饰的人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)移植在急性心肌梗死模型心肌损伤修复中的作用。方法用携带hHGF基因的腺病毒基因表达载体以150感染强度(MOI)转染hUCMSCs,获得hHGF基因修饰的hUC-MSCs。30只广西巴马小型猪制作急性心肌梗死模型。造模成功后的24只猪随机分为A、B、C、D组各6只。C组釆用微量注射器将hUC-MSCs悬液经心外膜呈矩阵分布多点注入梗死组织,D组以同样方法注入hHGF基因修饰的hUC-MSCs悬液,B组注入等量PBS,A组只造模。术后6周,经核素心肌灌注显像法检测心肌灌注与心脏功能变化;Masson三色法检测存活心肌,免疫组化法检测新生血管光密度。结果 A、B、C、D组灌注质量缺损百分率差值(ΔMDP)分别为4.33%±1.86%、3.67%±1.21%、-0.83%±1.17%、-0.17%±1.33%,左室射血分数差值(ΔLVEF)分别为-9.17%±2.48%、-9.33%±2.73%、1.00%±3.22%、0.50%±2.26%,C、D组与A、B组的ΔMDP、ΔLVEF比较,P均<0.001。A、B、C、D组在梗死交界区域存活的心肌累计光密度(IOD)值分别为31 391±4 794、31 520±4 164、72 271±4 844、79 862±3 603,新生血管IOD值分别为1 363±157、1 380±95、4 271±398、4 782±225,C、D组与A、B组比较,P均<0.001;D组与C组比较,P<0.05。结论 hHGF基因修饰的hUCMSCs可在急性心肌梗死模型的梗死区域内部分存活,在促进血管新生的同时减轻心肌纤维化,改善梗死区域的心肌存活和收缩功能,抑制心室重塑的发生。 展开更多
关键词 心肌梗死 肝细胞生长因子 脐带 间充质干细胞
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荧光定量PCR检测重组新蛭素中毕赤酵母基因组DNA的残留量 被引量:5
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作者 刘晶晶 郭莹莹 +3 位作者 李艳琪 王文文 吴祖泽 靳继德 《生物技术通讯》 CAS 2014年第3期401-405,共5页
目的:建立real—timePCR定量检测毕赤酵母基因组DNA残留量的方法,提高重组新蛭素的产品安全性。方法:选择拷贝数高且分布广泛的毕赤酵母5SrRNA基因为靶标基因设计扩增引物,提取酵母基因组DNA,稀释后作为扩增模板。以罗氏荧光定量PC... 目的:建立real—timePCR定量检测毕赤酵母基因组DNA残留量的方法,提高重组新蛭素的产品安全性。方法:选择拷贝数高且分布广泛的毕赤酵母5SrRNA基因为靶标基因设计扩增引物,提取酵母基因组DNA,稀释后作为扩增模板。以罗氏荧光定量PCR_Light Cycler 480平台为基础,建立基于SYBR Green Ⅰ荧光染料的real—timePCR的检测方法,并考察用该方法检测重组新蛭素中毕赤酵母基因组残留量的灵敏度、精密度和回收率。结果:该法检测宿主DNA残留量灵敏度高,DNA浓度为0.1~1000pg/μL范围内呈现良好的线性关系,其标准曲线的误差值小于0.2;用该法对5批注射用重组新蛭素(酵母)产品中宿主基因组DNA残留量进行了测定,结果分别为0.03、2.3、0.2、0.6、0.2μg/mg。结论:该方法具有操作简便、灵敏度高等优点,可用于重组产品中酵母基因组残留DNA的定量测定。 展开更多
关键词 荧光定量PCR 毕赤酵母 DNA残留 重组新蛭素
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富含谷氨酰胺二肽的20种结晶氨基酸对短肠综合征大鼠免疫功能的影响 被引量:2
16
作者 王钢乐 宋廷惠 +3 位作者 靳继德 尉承泽 张松 徐琪寿 《中国临床营养杂志》 2000年第4期235-238,共4页
目的 观察富含谷氨酰胺二肽和支链氨基酸的新型 2 0种结晶氨基酸配制的全肠外营养液对短肠综合征大鼠免疫功能的影响。 方法  40只Wistar雄性大鼠随机分为谷氨酰胺二肽组、标准组、无氮组及虚拟对照组 ,观察各组动物之间外周血T淋巴... 目的 观察富含谷氨酰胺二肽和支链氨基酸的新型 2 0种结晶氨基酸配制的全肠外营养液对短肠综合征大鼠免疫功能的影响。 方法  40只Wistar雄性大鼠随机分为谷氨酰胺二肽组、标准组、无氮组及虚拟对照组 ,观察各组动物之间外周血T淋巴细胞转化率、T淋巴细胞亚群 (CD4+ /CD8+ )以及血清肿瘤坏死因子 (TNF)等免疫指标的变化。 结果 谷氨酰胺二肽组与标准组及无氮组相比 ,T淋巴细胞转化率、CD4+ /CD8+及TNF均有不同程度的增高。 结论 富含谷氨酰胺二肽和支链氨基酸的 2 0种结晶氨基酸更有利于手术后创伤应激期免疫功能的恢复 ,增强其生存能力。 展开更多
关键词 谷氨酰胺二肽 结晶氨基酸 短肠综合征 免疫功能 肿瘤坏死因子(TNF) T淋巴细胞转化率 T淋巴细胞亚群 支链氨基酸 全肠外营养液 WISTAR 雄性大鼠 免疫指标 不同程度 CD8+ CD4+ 生存能力 对照组 外周血 应激期 手术后 标准
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肝细胞生长因子基因修饰的人脐带间充质干细胞对大鼠慢性肝损伤的治疗研究 被引量:3
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作者 陈瑶瑶 李艳琪 +4 位作者 刘杨 汪劲松 刘冬梅 吴祖泽 靳继德 《生物技术通讯》 CAS 2013年第6期767-772,共6页
目的:研究肝细胞生长因子(HGF)基因修饰的人脐带间充质干细胞(MSC)对Wistar大鼠慢性肝损伤的治疗作用。方法:利用携带人HGF基因的重组腺病毒(Ad-HGF)对MSC进行基因修饰;通过皮下注射CCl4-橄榄油溶液建立大鼠肝损伤模型;56只Wistar雄性... 目的:研究肝细胞生长因子(HGF)基因修饰的人脐带间充质干细胞(MSC)对Wistar大鼠慢性肝损伤的治疗作用。方法:利用携带人HGF基因的重组腺病毒(Ad-HGF)对MSC进行基因修饰;通过皮下注射CCl4-橄榄油溶液建立大鼠肝损伤模型;56只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、MSC组、HGF组和HGF/MSC组,分别尾静脉注射生理盐水、MSC、Ad-HGF或HGF/MSC,通过血清肝功能检测及肝组织的生化指标、病理切片等评价治疗效果。结果:利用腺病毒将HGF基因转入MSC并确定了最佳感染条件。CCl4-橄榄油诱导4周后,动物肝脏外观出现明显的脂肪变性和血清转氨酶明显升高,表明成功诱导了大鼠慢性肝损伤模型。经过4周治疗,治疗组动物的体重明显升高、肝指数明显降低,动物存活率高于模型组(模型组:50%;MSC组:70%;Ad-HGF组:70%;HGF/MSC组:90%)。肝功能指标测定结果显示,与模型组比较,HGF/MSC组动物的天门冬氨酸氨基转移酶(406.75±35.98 vs.513.75±12.71U/L,P<0.01)、丙氨酸氨基转移酶(124.6±10.6 vs.169.67±15.38 U/L,P<0.05)和总胆红素(14.6±2.08 vs.19.25±1.38g/dL,P<0.01)均明显降低,白蛋白含量(29.1±1.3 vs.22.05±2.61 g/L,P<0.05)明显升高;Ad-HGF组只有天门冬氨酸氨基转移酶(436.0±18.40 vs.513.75±12.71 U/L,P<0.05)明显降低;而单纯MSC治疗对肝功能改善不明显。丙二醛测定结果显示,治疗后动物肝组织中的过氧化反应均较模型组显著减弱。HGF/MSC组和MSC组动物肝组织中的羟脯氨酸含量与模型组比较明显降低(69.27±14.58,63.23±13.23 vs.96.59±15.05 mg/mL,P<0.01)。上述实验结果提示3种治疗方式对CCl4-橄榄油引起的大鼠肝损伤均有一定的治疗效果,可减轻CCl4导致的肝损伤程度,增加动物体重,降低肝脏指数,减轻肝组织的过氧化反应,提高动物的存活率,其中HGF/MSC治疗效果最为明显,而且细胞注射没有引起动物的不良反应。结论:3种治疗方式均可改善CCl4导致的肝损伤,其中以HGF/MSC对肝损伤的治疗效果最好。本实验为HGF/MSC的临床研究提供了新的实验数据,为治疗肝损伤提供了新的治疗措施。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 间充质干细胞 CCL4 慢性肝损伤
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大鼠短肠综合征全肠外营养模型的建立 被引量:2
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作者 王钢乐 靳继德 +2 位作者 宋廷惠 尉承泽 徐琪寿 《中国临床营养杂志》 2004年第1期35-38,共4页
目的通过切除大鼠中段小肠,建立大鼠短肠综合征(SBS)全肠外营养模型(PN)。方法选择清洁级Wistar雄性大鼠30只,随机分为20种氨基酸组(Gln-PN组)、17种氨基酸组(Std-PN组)、无氮组。三组动物均切除75%的小肠,空肠近端及回肠末端各保留10cm... 目的通过切除大鼠中段小肠,建立大鼠短肠综合征(SBS)全肠外营养模型(PN)。方法选择清洁级Wistar雄性大鼠30只,随机分为20种氨基酸组(Gln-PN组)、17种氨基酸组(Std-PN组)、无氮组。三组动物均切除75%的小肠,空肠近端及回肠末端各保留10cm,空回肠以5-0丝线对端吻合。从其右侧颈外静脉插管并持续输注含有不同结晶氨基酸的肠外营养液,同时观察术后动物表现及各组动物间体重、氮平衡、肠粘膜的形态结构和免疫学指标的变化。结果该动物模型基本符合短肠综合征的临床表现,不同组动物间体重、氮平衡、肠粘膜的形态结构及外周血CD4+/CD8+差别显著(P<0.05)。结论本模型在研究不同营养成分对SBS大鼠营养支持效果、SBS大鼠肠粘膜病理形态改变及临床愈后等方面可供临床选用,且其重复性好、稳定、动物活动不受限、存活率高,具有一定的应用价值。 展开更多
关键词 大鼠 短肠综合征 全肠外营养 动物模型 免疫学指标
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血小板裂解物支持人骨髓基质细胞的扩增 被引量:2
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作者 楼晓 汪劲松 +3 位作者 靳继德 何梓铭 吴祖泽 郭子宽 《组织工程与重建外科杂志》 2009年第2期61-64,共4页
目的探讨血小板裂解物体外培养、扩增人骨髓基质干细胞的可行性。方法将富含血小板血浆以冻融裂解法处理,培养人骨髓基质干细胞;体系中加入不同浓度的裂解物,MTT法检测细胞体外增殖情况;流式细胞仪分析细胞表型特征,并应用细胞化学染色... 目的探讨血小板裂解物体外培养、扩增人骨髓基质干细胞的可行性。方法将富含血小板血浆以冻融裂解法处理,培养人骨髓基质干细胞;体系中加入不同浓度的裂解物,MTT法检测细胞体外增殖情况;流式细胞仪分析细胞表型特征,并应用细胞化学染色法观察细胞体外成骨和成脂肪能力。结果血小板裂解物培养的骨髓基质干细胞呈典型的成纤维细胞形态,均一呈现CD14、CD31、CD34、CD45及HLA-DR阴性和CD73、CD90、CD105、CD166阳性,具备体外成骨、成脂分化能力。此外,与经筛选的胎牛血清比较,低浓度血小板裂解物即具有支持骨髓基质干细胞扩增的能力。结论血小板裂解物可替代胎牛血清,用于骨髓基质干细胞的体外扩增。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 血小板 细胞培养 扩增
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肝细胞生长因子延长原代培养大鼠脊髓神经元的生存时间 被引量:1
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作者 刘铖 阙海萍 +2 位作者 靳继德 刘少君 吴祖泽 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2006年第9期957-961,共5页
目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对原代培养脊髓神经元的保护作用。方法原代培养脊髓神经元转染不同滴度的绿色荧光蛋白或肝细胞生长因子重组腺病毒(Ad-GFP or Ad-HGF),用流式细胞仪检测转染率,PI-Hoechst双染色观察神经元生长状况。用ELIS... 目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对原代培养脊髓神经元的保护作用。方法原代培养脊髓神经元转染不同滴度的绿色荧光蛋白或肝细胞生长因子重组腺病毒(Ad-GFP or Ad-HGF),用流式细胞仪检测转染率,PI-Hoechst双染色观察神经元生长状况。用ELISA、中性红、MTT和NSE-ELISA等方法分别检测Ad-HGF转染脊髓神经元后HGF的表达,以及HGF对神经元的保护和迁移作用。结果在转染复数(MO I)为50时,Ad-GFP可高效转染脊髓神经细胞,且细胞生长状态好。转染Ad-HGF后,HGF能有效表达,同时HGF作用后的神经元活性明显高于对照组(P<0.05)。并观察到HGF对脊髓神经元有明显促迁移作用。结论HGF对体外培养的脊髓神经元有保护和迁移作用。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 脊髓神经元 基因治疗 腺病毒载体 迁移
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