癫痫持续状态死亡法医学鉴定1例

1案例1.1简要案情赵某,女,33岁,某日晚与宋某入住宾馆。期间二人发生性关系。00:00,赵某反复出现四肢抽搐、口吐白沫及气喘症状,宋某认为其可自行恢复,故在其发作期间未采取任何救助措施。赵某在症状发作间歇期持续昏迷,于当日17:00死亡。经查赵某生前无颅脑外伤史,有癫痫病史5年余,规律服用抗癫痫药物(奥拉西坦片、左乙拉西坦片、奥卡西平片),死亡前2 d自行停用抗癫痫药物。

蛋白质芯片检测技术结合多维统计方法推断死亡时间

目的利用蛋白质芯片检测技术结合多维统计方法分析骨骼肌组织的蛋白质变化,进行死亡时间推断。方法大鼠颈椎脱臼处死后置于16℃环境中,提取死后不同时间点(0 d、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、8 d和9 d)骨骼肌的水溶性蛋白质,获取相对分子质量为14000~230000的蛋白质表达谱数据,采用主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘(orthogonal partial least squares,OPLS)进行数据分析,构建Fisher判别模型及反向传播(back propagation,BP)神经网络模型对大鼠死亡时间进行分类预测。另外收集不同死亡时间的人体骨骼肌蛋白质表达谱数据,通过热图和聚类分析观测其与死亡时间之间的关系。结果大鼠骨骼肌蛋白质谱峰随死亡时间呈一定的时序性变化。PCA结合OPLS判别分析结果显示,除死后6 d、7 d和8 d外,各死亡时间组间差异有统计学意义(P<0.05);经Fisher判别分析,模型内部交叉验证准确率为71.4%,外部验证准确率为66.7%;BP神经网络模型分类预测结果显示,模型内部交叉验证准确率为98.2%,外部验证准确率为95.8%。经聚类分析,人体骨骼肌蛋白质表达在死后4 d与死后25 h内差异有统计学意义。结论蛋白质芯片检测技术可快速、准确、高重复性地获取死后不同时间点大鼠和人体骨骼肌相对分子质量为14000~230000的水溶性蛋白质表达谱,建立基于多维统计方法的多种死亡时间推断模型,有望为死亡时间推断提供新的思路和方法。

多阶段、混合式教学在法医病理学金课中的探索

在精准教学的时代背景下,文章分析医学院校法医病理学的课程性质,以超星学习通网络教学平台作为依托,构建案例分析驱动的四通道和多阶段线上-线下混合式金课模式,将课前、课中和课后三个学习环节融为一体,引导学生全程自主、探究、合作式学习;引入情境式教学,开展小组案例式、探究式合作项目,加强学生创新思维和临案思维的综合能力;结合专业课教学进行思政教育,加强新医德教育和法医职业教育,培养学生德能双修;注重多元化评价指标和及时性反馈。通过随机走访座谈和问卷调查,教师对教学模式进行评价,使教学质量得以持续改进。

前列腺素D_2和白三烯E_4测定在过敏性猝死诊断中的应用研究

目的测定过敏性猝死者尿液中前列腺素D2(prostaglandin D2,PGD2)、白三烯E4(leukotriene E4,LTE4)体内含量的变化,探讨其在过敏性猝死诊断中的意义。方法搜集108例免疫正常人、6例过敏性猝死死者和23例非过敏性死者的尿液,采用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验法(ELISA)分别检测尸体尿液中PGD2和LTE4的含量。结果过敏性猝死死者尿液中的PGD2和LTE4含量显著升高,与正常组及其他死因组比较P<0.01,差异具有统计学意义;其他死因组和正常人组相比较,P<0.01,差异具有统计学意义。过敏猝死者尿液中的PGD2和LTE4呈显著正相关(r=0.798,P=0.057)。结论过敏性猝死死者尿液中PGD2及LTE4的水平增高,对过敏性猝死的诊断有一定的参考价值。

基于模式识别方法研究深静脉血栓形成大鼠尿液代谢物谱

目的采用代谢组学技术研究深静脉血栓形成(deep venous thrombosis,DVT)大鼠尿液中代谢物谱,筛选出可用于DVT诊断和法医学鉴定的小分子生物标志物。方法建立下腔静脉完全结扎DVT大鼠模型,分为模型组、假手术组和对照组,每组各10只。模型组和假手术组大鼠在建模后48 h于代谢笼中收集24 h尿液,同时对照组收集24 h尿液。核磁共振检测其代谢物谱,SIMCA-P 14.1软件进行模式识别,通过正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal PLS-DA,OPLS-DA)模型中的变量权重重要性排序(variable importance in projection,VIP)值结合Mann-Whitney U检验,寻找尿液中差异代谢物。结果模型组、假手术组和对照组大鼠尿液的代谢轮廓呈现显著性差异。通过偏最小二乘法-判别分析(partial least squares method-discriminant analysis,PLS-DA)模型可以有效判别模型组、假手术组与对照组。与对照组大鼠相比,DVT大鼠尿液中亮氨酸、谷氨酰胺、肌酸、肌酐和蔗糖水平上调,3-羟基丁酸、乳酸、丙酮、α-酮戊二酸、柠檬酸和马尿酸水平下调。结论 DVT大鼠尿液中的差异代谢物有望成为该疾病的候选生物标志物,该结果可为DVT的诊断、治疗和法医学鉴定提供研究基础。

过敏性休克大鼠血嗜碱性粒细胞CD63的表达

目的通过流式细胞仪分析CD63的表达来确定嗜碱性粒细胞活化情况,探讨其在过敏性休克诊断中的应用价值。方法16只大鼠随机分为对照组和实验组,采用卵蛋白注射建立过敏性休克大鼠动物模型,以CD63、CD45、CD203c抗体组合,应用流式细胞仪检测大鼠血嗜碱性粒细胞CD63的活化情况,并采用免疫荧光法对大鼠肺组织CD63进行免疫荧光染色。结果 (1)以CD45和CD203c联合设门,可以得到纯的嗜碱性粒细胞。(2)实验组CD63的表达率为(17.34±2.04)%,对照组CD63的表达率为(1.52±0.35)%,差异具有统计学意义(P<0.01)。(3)与对照组相比,实验组大鼠肺组织中嗜碱性粒细胞CD63的表达增多。结论流式细胞仪检测CD63的表达有望作为过敏反应体内试验的补充,具有较好的临床应用价值。

影响恶性肿瘤手术患者围术期免疫功能的因素

恶性肿瘤严重威胁人类的健康,随着老龄化进程的加快、生活方式的改变以及环境的恶化,恶性肿瘤的发病率和病死率也逐年增高。手术切除是许多恶性肿瘤的首选治疗方法,但即使将恶性肿瘤完全切除,许多患者仍死于术后癌症的复发或转移。免疫系统与恶性肿瘤的发生、发展、复发以及转移密切相关,围术期许多因素可能会抑制机体免疫功能,增加恶性肿瘤复发及转移的风险,因此研究影响恶性肿瘤手术患者围术期免疫功能的因素,对于延长患者生存时间、改善生存质量具有重要的意义。

利多卡因对宫颈癌根治术患者应激激素及NK细胞杀伤力的影响

目的观察围术期静脉输注利多卡因对宫颈癌根治术患者应激激素和自然杀伤(NK)细胞杀伤力的影响,探讨利多卡因围术期免疫保护作用。方法择期拟行宫颈癌根治术患者35例,年龄35~65岁,ASAⅠ或Ⅱ级,采用随机数字表法分为利多卡因组(L组)和对照组(C组)。麻醉诱导前15min,L组患者静注利多卡因1.5mg/kg,随后利多卡因1.5mg·kg^(-1)·h^(-1)持续泵注至患者出室;C组患者给予等量生理盐水。分别于术前24h、术毕即刻、术后48h采集患者外周静脉血,ELISA法测定血浆PGE2、EPI、NE浓度。免疫磁珠法分离NK细胞,乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞杀伤力,Western blot法检测NK细胞磷酸化蛋白激酶A(p-PKA)和蛋白激酶A(PKA)表达。结果术前24h两组患者血浆PGE2、EP1和NE浓度差异无统计学意义。术后48h,L组血浆PGE2浓度[(562.5±98.2)pg/ml vs(663.2±119.0)pg/ml]、EPI浓度[(24.9±4.8)pg/ml vs(29.7±3.5)pg/ml]、NE浓度[(408.3±47.2)pg/ml vs(499.6±45.6)pg/ml]明显低于C组(P<0.05)。术后48h,L组NK细胞杀伤力明显高于C组[(44.1±5.0)%vs(37.1±5.5)%,P<0.05]。术毕即刻,L组p-PKA/PKA明显低于C组(0.060±0.008vs 0.099±0.011)(P<0.05)。结论围术期静脉输注利多卡因能降低宫颈癌根治术患者血浆PGE2及儿茶酚胺水平;保护NK细胞对肿瘤细胞的杀伤能力,其机制可能是通过抑制cAMP-PKA信号通路。

内源性凝血在脓毒症凝血紊乱中的作用及研究进展

凝血功能紊乱是导致脓毒症器官功能衰竭的重要因素,目前临床上主要治疗措施是抗凝治疗。以凝血级联反应关键蛋白酶为靶点的抗凝治疗有导致重要器官出血的风险;而内源性凝血接触系统抑制剂在发挥抗凝作用的同时不增加出血量,这提示调节接触系统活性有望为脓毒症治疗提供新思路。本文就内源性凝血接触系统激活物磷酸盐聚合物、中性粒细胞胞外诱捕网、微粒、链霉素等在脓毒症凝血障碍中的作用及研究进展进行综述,为临床治疗脓毒症提供新思路。

药物过敏性休克死亡者体内类糜蛋白酶的表达研究

目的探讨类糜蛋白酶在药物过敏性休克死亡法医学诊断中的作用和意义。方法 10例死因确诊为药物过敏性休克的患者为研究组,排除过敏性休克、冠心病、海洛因中毒及颅脑损伤这4类疾病死亡者10例为对照组;应用免疫荧光染色法对上述两组肺组织进行类糜蛋白酶染色。Olympus BX61荧光显微镜观察并进行图像采集,Image pro图像分析系统对所采集图像进行分析。结果肺组织肥大细胞类糜蛋白酶阳性颗粒计数,研究组8.50±1.74,对照组0.95±0.42,研究组的表达较对照组明显升高(P<0.05);其表达量在死后48 h内无明显变化。结论肺组织中类糜蛋白酶的表达有望作为过敏性休克死亡法医学诊断的一种辅助指标。

凝血相关基因多态性与下肢深静脉血栓形成的相关性

目的探讨rs1799963(凝血因子V基因Leiden)、rs6025(凝血酶原基因G20210A)、rs1042579(血栓调节蛋白基因c.1418C>T)及rs1801131(亚甲基四氢叶酸还原酶基因)4个凝血相关基因的多态性与下肢深静脉血栓形成的相关性。方法采用竞争性等位基因特异性聚合酶链反应(kompetitive allele specific polymerase chain reaction,KASP)技术检测150例下肢深静脉血栓患者及153例健康对照者上述4个基因分型,采集相关血液生物化学指标,建立二元Logistic回归筛选下肢深静脉血栓形成的独立危险因素,校正混杂因素后在不同遗传模式下分析下肢深静脉血栓与各指标及4种凝血相关基因多态性的相关性。结果D-二聚体、纤维蛋白原降解产物、同型半胱氨酸、性别、年龄这5个变量可能是下肢深静脉血栓形成的危险因素。将这些变量引入4种基因遗传模式,在二元Logistic回归环境下进行校正,结果显示,rs1042579突变在显性遗传模式下与下肢深静脉血栓形成具有相关性。结论rs1799963、rs6025、rs1801131的基因多态性与下肢深静脉血栓形成无明显相关性,rs1042579的基因多态性在显性遗传模式下发挥作用,可能是下肢深静脉血栓形成的独立危险因素。

蛋白芯片检测技术结合多维统计推断死亡时间

目的利用2100生物分析仪结合蛋白芯片获取死后大鼠肝组织蛋白质表达谱,推测其与死亡时间的关系。方法大鼠腹腔麻醉致死后置于16℃环境中,提取死后14个时间点肝组织中的水溶性蛋白质,使用蛋白芯片获取相对分子质量在14000~230000的蛋白质表达谱数据,并利用主成分分析(principal component analysis,PCA)、偏最小二乘-判别分析(partial least squares-discriminant analysis,PLS-DA)、Fisher判别对数据进行分析。结果根据蛋白质表达谱的变化和PLS-DA结果将死亡时间分为A组(0d)、B组(1~9d)、C组(12~30d)。经Fisher判别,模型的训练集及测试集的预测准确率均为100.0%,训练集的内部交叉验证准确率为100.0%。通过建立B、C组各时间点的Fisher判别模型缩小推断死亡时间窗口,B组中训练集及测试集的预测准确率均为100.0%,训练集的内部交叉验证准确率为100.0%;C组中训练集及测试集的预测准确率分别为95.2%、78.6%,训练集的内部交叉验证准确率为88.1%。结论蛋白芯片检测技术可以快捷简便地获取大鼠死后不同时间点肝组织相对分子质量在14000~230000的水溶性蛋白质表达谱,建立PLS-DA及Fisher判别模型对死亡时间进行分类预测判断,有望为死亡时间推断提供新的思路和方法。

代谢组学在心脏性猝死鉴定中的应用前景及展望

在猝死案例中,心脏性猝死的预防及猝死发生后死因鉴定一直是难点问题。因此,心脏性猝死的临床研究和法医病理学鉴定具有重要意义。近年来,代谢组学逐渐发展成为生命科学研究的热门领域,检测生物体液的“代谢指纹”可以为疾病早期诊断、潜在生物标志物的发掘等提供重要依据。本文就心脏性猝死的研究现状以及与心脏性猝死密切相关的心血管疾病代谢组学方面的研究做一综述,分析代谢组学在心脏性猝死鉴定中的应用前景。

早期心肌缺血大鼠心肌中BNP的时序性表达

目的观察大鼠缺血心肌组织中BNP mRNA及蛋白时序性表达。方法在GEO数据库中检索到大鼠急性心肌缺血基因表达谱数据GSE4648,分析并设计实验验证。66只10-12周龄雄性SD大鼠分为对照组(n=6)、过敏性猝死组(n=6)、假手术组(n=6)及早期心肌缺血组(n=48)。早期心肌缺血组结扎左冠状动脉前降支造成急性心肌缺血模型,分别于造模成功后0.5,1,2,4,8,12,24,48 h脱臼处死大鼠,取左心室前壁缺血区心肌。假手术组缝合线穿过左心室前壁心肌组织,而不结扎冠状动脉,脱臼处死大鼠,取左心室前壁心肌组织。过敏性猝死组大鼠尾静脉注射鸡卵清蛋白诱导过敏性猝死模型,猝死后取左心室前壁心肌组织。对照组常规饲养1周后脱臼处死,取左心室前壁心肌。应用qRT-PCR、Western blot及免疫组化法检测所取心肌BNP mRNA及蛋白表达情况。结果GSE4648基因表达谱数据显示大鼠心肌缺血4 h时荧光信号强度开始升高,缺血24 h荧光信号达到最强,缺血48 h荧光信号开始减弱。验证实验显示,与对照组相比,大鼠心肌缺血2 h时,缺血区心肌BNP mRNA开始升高(P<0.05),并于缺血24 h时达到峰值(P<0.01),缺血48 h时下降,但仍高于对照组(P<0.01)。与对照组相比,大鼠心肌缺血4 h时,BNP蛋白表达开始上升(P<0.05),在缺血12 h和24 h时达到最高峰(P<0.01),缺血48 h时下降,但仍高于对照组(P<0.05)。大鼠心肌缺血4 h时,缺血区心肌免疫组化出现弱阳性(P<0.05),之后逐渐增强,缺血24 h时达到强阳性(P<0.01),缺血48 h阳性减弱,但仍高于对照组(P<0.05)。对照组、假手术组及过敏性猝死组三组间心肌BNP mRNA及蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论早期心肌缺血时存在BNP mRNA升高;检测BNP mRNA可能对鉴别冠状动脉性猝死和过敏性休克死亡有帮助。

非离子型造影剂过敏反应者血清类糜蛋白酶前列腺素D_2及血小板活化因子的变化观察

目的观察肥大细胞类糜蛋白酶、血小板活化因子(PAF)、前列腺素(PG)D2在非离子型造影剂过敏者体内含量的变化,探讨其在非离子型造影剂过敏反应的发生机制。方法采用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测健康对照组、非离子型造影剂过敏组和β-内酰胺类抗生素过敏组血清中类糜蛋白酶、PAF、PGD2的含量及尿液中PGD2含量,利用全自动生化分析仪检测尿肌酐水平。结果非离子型造影剂过敏组、β-内酰胺类抗生素过敏组肥大细胞类糜蛋白酶、PAF、PGD2的含量升高,与健康对照组相比其差异具有统计学意义。结论非离子型造影剂过敏反应者血清中类糜蛋白酶、PAF、PGD2以及尿液中PGD2含量升高,符合过敏反应的病理生理变化,肥大细胞类糜蛋白酶和尿PGD2可作为非离子型造影剂过敏反应诊断的参考指标。

62例心源性猝死的法医学鉴定分析

猝死（sudden unexpected natural death）是由于机体潜在的疾病或重要器官急性功能障碍导致的意外的突然死亡。猝死者身体往往貌似＂健康＂,预先没有任何征兆或仅有极轻微的几乎不会被想到可能致死的症状或体征,猝死常发生在日常生活、工作或睡眠中,出乎人们意料。由于意外和突然,一方面易引起对死因的质疑、误解,另一方面亦可能借其掩盖其犯罪行为,

大鼠Gpnmb基因表达线性回归模型在损伤时间推断中的应用

目的探讨非转移性黑色素瘤糖蛋白B(glycoprotein non-metastatic melanoma protein B,Gpnmb)mRNA表达受损伤时间、死亡时间及死后保存温度的影响,建立Gpnmb mRNA表达与损伤时间的线性回归模型,为损伤时间推断提供潜在指标。方法将SD大鼠麻醉后钝性挫伤,随机分为损伤后0h、4h、8h、12h、16 h、20 h和24 h组,每组18只,大鼠颈椎脱臼处死后各取6只分别保存在0℃、16℃、26℃中,在同一温度下于死后0 h、12 h、24 h重复收集大鼠后肢股四头肌损伤处肌肉组织样本,验证组大鼠分组与处理方式同上。使用RT-qPCR技术检测大鼠骨骼肌Gpnmb mRNA的表达。使用Pearson相关系数评价Gpnmb mRNA表达与损伤时间、死亡时间、死后保存温度的相关性,SPSS 25.0软件构建线性回归模型,验证组数据用于回代检验。结果Gpnmb mRNA的表达随损伤时间延长而持续增加,表达量与损伤时间高度相关(P<0.05),与死亡时间和死后保存温度基本不相关(P>0.05)。损伤时间(y)与Gpnmb mRNA相对表达量(x)的线性回归方程为y=0.611 x+4.489。回代检验结果证明该模型预测结果准确。结论Gpnmb mRNA的表达基本不受死亡时间及死后保存温度的干扰,而与损伤时间相关,因此可建立线性回归模型用于损伤时间推断。

首发急性缺血性脑卒中患者认知功能障碍与抑郁状态的相关因素

目的探讨首发急性缺血性脑卒中患者认知功能障碍和抑郁状态的相关影响因素.方法选取急性缺血性脑卒中患者206例,采用蒙特利尔认知评估量表将其分为卒中后认知功能障碍组146例、非卒中后认知功能障碍组60例,采用汉密尔顿抑郁量表将其分为卒中后抑郁组52例、非卒中后抑郁组154例.收集患者的人口学特征及临床指标进行统计学分析.结果卒中后认知功能障碍组年龄、合并高血压比例、同型半胱氨酸(Hcy)、C反应蛋白(CRP)水平显著高于非卒中后认知功能障碍组,男性比例、文化程度、Barthel指数以及血红蛋白(Hb)、空腹血糖(GLU)、肌酐(Cre)水平显著低于非卒中后认知功能障碍组(P<0.05或P<0.01).卒中后抑郁组男性比例、CRP水平显著低于非卒中后抑郁组(P<0.05);卒中后抑郁组合并高血压、合并冠心病、前部病灶比例以及GLU、丙氨酸转氨酶(ALT)、Cre、Hcy水平均显著高于非卒中后抑郁组(P<0.05或P<0.01).多因素Logistic逐步回归分析显示,年龄、文化程度、Hb、Hcy是首发急性缺血性脑卒中患者认知功能障碍的独立影响因素;性别、Hcy是首发急性缺血性脑卒中患者抑郁的独立影响因素.结论Hcy水平是首发急性缺血性脑卒中患者认知功能障碍和抑郁的共同影响因素,年龄、文化程度、Hb是认知功能障碍的独立影响因素,性别是抑郁的独立影响因素,应在患者发病早期进行筛查和干预.

缺血性脑卒中病人服用抗血小板药物依从性现状及影响因素分析

[目的]探讨缺血性脑卒中病人服用抗血小板药物依从性现状及影响因素。[方法]收集新乡市第一人民医院收治的缺血性脑卒中病人320例,出院后给予6个月随访,最终302例完成随访研究,使用Morisky服药依从性量表分为服药依从性良好组、依从性差组,比较两组病人的人口学资料、合并症、费用支付方式、复诊情况。[结果]302例病人中氯吡格雷服药依从性良好者206例,依从性差者96例。服药依从性良好的病人受教育程度为高中及以上、缺血性脑卒中亚型为急性脑梗死、合并心脏疾病、合并高血压、合并糖尿病、医疗保险付费、定期复诊的比例明显高于服药依从性差的病人,差异有统计学意义(P<0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,受教育程度、患心脏疾病、患糖尿病、患高血压、费用支付方式、复诊是氯吡格雷服药依从性的独立影响因素。[结论]本院缺血性脑卒中病人抗血小板治疗氯吡格雷服药依从性偏低,应针对病人受教育程度、合并症、费用支付方式和复诊情况进行干预,提升服药依从性。

3种甲苯胺蓝异染肥大细胞方法的比较

目的比较3种甲苯胺蓝异染肥大细胞方法的应用性。方法采用甲苯胺蓝水溶液与高锰酸钾配比染色(方法一)、甲苯胺蓝酒精溶液和氯化钠溶液配比(方法二)、甲苯胺蓝水溶液染色、冰醋酸分色(方法三)3种方法对人和小鼠肺组织冰冻切片进行染色,比较染色结果、并评价方法稳定性及实用性。结果方法一染色肺组织切片,结果切片蓝色背景清晰,肥大细胞胞质内紫红色颗粒鲜明,与背景蓝色对比度高,易辨识,且多次重复染色效果稳定;方法二及方法三肺组织的蓝染背景、和肥大细胞胞浆颗粒的紫红色染之间的对比度均不及方法一清晰,稳定性亦次之。结论甲苯胺蓝水溶液与高锰酸钾配比染色法异染肺组织冰冻切片,结果清晰、操作简便且稳定性好,适合在相关检验中选用。