基于生物信息学分析核仁纺锤体相关蛋白1在肝细胞癌中的表达及对临床预后的影响

目的探讨在肝癌中核仁纺锤体相关蛋白1(NUSAP1)的表达及其对临床预后的影响。方法从基因表达数据库(GEO)下载HCC芯片数据集GSE57957、GSE14520、GSE22058、GSE46444、GSE54236、GSE36376、GSE64041、GSE76297、GSE76427、GSE102079和癌症基因组图谱(TCGA)中的HCC RNA-seq数据,利用R 4.0软件分析NUSAP1在肝癌及癌旁组织的表达差异。应用t-分布邻域嵌入算法(tSNE)对单细胞测序数据的降维,分析NUSAP1在肝癌和癌旁组织中的差异表达。收集2018年1月—2019年11月在青岛大学附属医院进行同种异体肝移植术的42例乙型肝炎相关肝癌患者的癌组织及癌旁组织,收集其临床病理资料并分析与NUSAP1基因表达的相关性。计数资料2组间比较采用χ^(2)检验。以Kaplan-Meier方法生存分析NUSAP1表达水平与总体生存率及无病间隔生存率之间的关系,运用log-rank进行检验,通过Graphpad prim 7使其结果可视化。结果NUSAP1在GEO数据库与TCGA数据库数据集中的肝癌组织中均高表达(P值均<0.001)。来源于肿瘤组织的细胞其NUSAP1高表达细胞明显高于癌旁组织细胞。NUSAP1在29例患者的肝癌组织中高表达,在13例患者的肝癌组织中低表达,NUSAP1在肝癌组织中高表达组及低表达组间,Child-Pugh分级、TNM分期、Okuda分期比较差异均有统计学意义(χ^(2)值分别为5.469、6.836、4.617,P值均<0.05)。NUSAP1高表达的肝癌患者总体生存率与无病间隔生存率显著低于低表达的肝癌患者,NUSAP1低表达患者1、3、5生存率分别为92.96%、83.80%、76.76%,明显高于高表达的患者(76.76%、67.60%、64.78%),NUSAP1高表达的患者中位生存时间明显低于低表达的患者(61.7个月vs 108.6个月)(P值均<0.05)。结论NUSAP1在肝癌细胞中高表达,可作为乙型肝炎肝癌患者不良预后的潜在标志物。

DNAJB6基因在肝组织再生中的作用探索

目的探索研究DNAJB6在部分肝移植肝再生的作用及分子机制。方法采用DA大鼠作为供体,Lewis大鼠作为受体,构建部分肝移植肝再生模型。按照部分肝移植不同时间点分为6组(每组6对),分别为灌注前、劈裂肝完成灌注后、门静脉开放后、关腹前、术后第3、7天组。采用C57小鼠构建部分肝切除残余肝再生模型,根据肝切除不同时间点分为6组(每组6只),分别为对照组、1 d、2 d、3 d、4 d和5 d组。利用基因表达数据库的肝再生数据分析和肝再生动物标本找到肝再生的关键基因。通过转染干扰RNA构建DNAJB6低表达的人源肝细胞。通过蛋白印迹检测细胞增殖核抗原(PCNA)和细胞增殖实验研究DNAJB6与肝再生的关系。通过蛋白印迹检测核蛋白和经典细胞增殖信号通路节点蛋白研究DNAJB6调节部分肝移植肝再生的可能分子机制。结果部分肝切除残余肝再生结果显示,DNAJ家族基因在再生肝基因芯片中差异表达,其中DNAJB6在再生肝基因芯片中低表达。与此同时,DNAJB6在部分肝移植和部分肝切的再生肝组织中低表达。DNAJB6沉默后,细胞PCNA表达水平升高且增殖速率加快。然而,细胞核提取没有检测到β-catenin胞核/质间改变,且Wnt4蛋白水平也未发生变化。虽然,Ras/MAPK下游的p38和JNK2活化水平没有发生变化,但ERK活化水平升高。结论在再生肝组织中,肝细胞可能通过降低DNAJB6的表达水平抑制Ras/MEK/ERK信号通路以促进肝再生。