岩黄连水提物对肝癌HepG2细胞增殖和迁移能力的影响及其可能机制

目的观察岩黄连水提物对原发性肝癌HepG2细胞增殖和迁移能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将含不同浓度(0.4 mg/mL、0.8 mg/mL、1.6 mg/mL)的岩黄连水提物100 m L作用于肝癌HepG2细胞,以等量未处理培养基培养的肝癌HepG2细胞为对照组。采用CCK-8法检测肝癌HepG2细胞的增殖能力,Transwell法检测细胞迁移能力,Western blot和荧光定量PCR分别检测NF-κBp65蛋白和m RNA的表达水平。结果 CCK-8实验结果显示,24 h、48 h和72 h不同浓度岩黄连水提物作用肝癌HepG2细胞的增殖抑制率组内差异均有统计学意义(P<0.01),且0.8 mg/mL、1.6 mg/mL干预的细胞增殖抑制率均高于0.4 mg/mL(P<0.01)。Transwell实验结果显示,不同浓度岩黄连水提物作用肝癌HepG2细胞48 h后的细胞迁移数均低于对照组(P<0.001),且可上调NF-κBp65蛋白和mRNA的表达(P<0.001)。结论岩黄连水提物能抑制肝癌HepG2细胞增殖、迁移能力,其作用机制可能与上调NF-κBp65表达有关。

健脾消积方水提物对人肝癌SMMC7721细胞自噬的调控机制

目的探讨健脾消积方水提物抗肝癌机制以及对细胞自噬流和自噬相关蛋白的影响。方法提取健脾消积方水提物,作用于SMMC7721细胞,使用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞学检测细胞的凋亡率,使用Western Blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62的表达,并监测自噬体的形成及自噬体与溶酶体的融合过程。计量资料两组比较采用独立样本t检验,多组比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果CCK8检测显示,细胞加药后24 h、48 h、72 h、96 h,增殖均受到了明显抑制,与对照组相比差异均有统计学意义(t值分别为28.458、81.093、85.328、100.158,P值均<0.001)。流式细胞学凋亡检测结果显示,加药组肝癌SMMC7721细胞凋亡较对照组显著增加(t=-42.629,P<0.001)。Western Blot结果显示,与对照组相比,加药组Beclin1蛋白表达下调,自噬标志蛋白LC3Ⅱ表达上调,P62表达上调。加药组细胞的自噬体向自噬溶酶体的流动受到了阻滞,与对照组相比,差异有统计学意义(F=31.155,P<0.001)。结论健脾消积方水提物能够抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,促进细胞凋亡;同时能上调Beclin1的表达,下调LC3和P62的表达并阻滞自噬流的形成。

4种不同浓度的水凝胶在小鼠脑、肝、肾组织透明化中的应用效果比较

目的比较4种不同浓度水凝胶在小鼠脑、肝、肾组织透明化中的应用效果。方法根据丙烯酰胺(A)、甲叉双丙烯酰胺(B)、多聚甲醛(P)的终浓度比,制备A4B4P4(A∶B∶P=4%∶0. 05%∶4%)、A2B2P4(A∶B∶P=2%∶0. 025%∶4%)、A1B1P4(A∶B∶P=1%∶0. 0125%∶4%)、A4B4P0(A∶B∶P=4%∶0. 05%∶0)水凝胶。选取8只昆明小鼠随机分为4组,每组2只,分别采用A4B4P4、A4B4P0、A2B2P4、A1B1P4水凝胶进行灌注,然后行组织固定及透明化处理。计算经4种水凝胶处理后小鼠脑、肝、肾组织的相对透明度及蛋白损失量。结果 A2B2P4组、A1B1P4组小鼠脑组织相对透明度均高于A4B4P4、A4B4P0组(均P <0. 05); A1B1P4组小鼠肝组织的相对透明度高于其他3组(均P <0. 05); A2B2P4、A1B1P4组小鼠肾组织的相对透明度均高于A4B4P4、A4B4P0组(均P <0. 05)。A4B4P0组小鼠脑、肝、肾组织蛋白损失量均大于其他3组(均P <0. 05),A2B2P4组小鼠肝、肾组织蛋白损失量均低于A1B1P4组(均P <0. 05)。结论 A2B2P4、A1B1P4水凝胶在小鼠脑组织透明化中的应用效果最佳,A1B1P4、A2B2P4水凝胶分别在小鼠肝组织、肾组织透明化中的应用效果最佳。

干扰PRMT2基因对肝癌细胞系生物学行为的影响

目的:研究抑制蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)基因的表达对肝癌细胞系生物学行为的影响。方法:qRT-PCR检测人肝癌细胞系(HepG2和SMMC-7721)和人正常肝细胞(LO2)中PRMT2的表达情况;设计并合成针对PRMT2基因的3对小干扰RNA,体外通过脂质体Lipofectamine 3000转染到相对高表达PRMT2的人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中抑制PRMT2基因的表达,并设置阴性对照组(NC组)和空白对照组。qRT-PCR、Western blot检测转染后细胞PRMT2 mRNA水平和蛋白水平的变化。CCK-8法检测转染后细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞体外迁移及侵袭能力。结果:与人正常肝细胞LO2相比,PRMT2基因在人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中相对高表达。将siPRMT2转染HepG2和SMMC-7721细胞后,与NC组相比,siPRMT2-1和siPRMT2-2组的PRMT2 mRNA和蛋白表达均明显降低(P均<0.05),NC组与空白对照组无明显差异。与NC组相比,将siPRMT2-1和siPRMT2-2转染进HepG2和SMMC-7721细胞后,细胞增殖速度减慢、迁移和侵袭能力显著减弱(P均<0.05),NC组与空白对照组无明显差异。结论:RNA干扰抑制PRMT2表达后,抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,PRMT2可能影响肝癌的预后。

基于网络药理学的含水蛭经方抗肿瘤机制研究

目的利用网络药理学方法分析含水蛭抗肿瘤经方的组方规律、核心配伍中草药以及药物的起效单体、作用靶点、信号通路。方法利用TCMID数据库获取含水蛭抗肿瘤经方,采用Cytoscape软件构建中草药配伍网络图,利用Degree算法获取使用频率最高的前10味核心中草药。通过TCMSP数据库收集水蛭抗肿瘤经方的核心中草药,进行靶蛋白预测,获取交集。利用STRING数据库构建靶蛋白的蛋白-蛋白互作(PPI)网络图,利用KOBAS 3. 0数据库进行通路富集分析。利用CTD数据库预测水蛭素的靶蛋白,构建靶蛋白的PPI网络图并进行通路富集分析。结果获含水蛭抗肿瘤经方共10个,常与虻虫、大黄、桃仁、干漆、琥珀、三棱、莪术等活血化瘀药配伍。TCMSP数据库获得水蛭抗肿瘤经方中的核心中草药包括大黄、桃仁、三棱、莪术,起效单体分别有16个、23个、4个、3个。4味核心中草药协同作用的靶蛋白共16个,主要参与神经活性配体-受体相互作用。配伍中草药靶蛋白的核心子集主要参与乙型肝炎病毒、癌症通路等。水蛭素的靶蛋白主要参与补体和凝血级联、血小板活化等通路。结论水蛭或通过抗血栓形成以改善肿瘤微环境,而配伍药具有抗炎、抗肿瘤的效果。