SIRT5缺失对小鼠造血干细胞损伤恢复的影响

目的:探讨在5-FU诱导下脱酰基酶Sirtuin 5对小鼠造血干细胞损伤恢复的影响。方法:采用流式细胞术分析SIRT5缺失对小鼠造血干/祖细胞比例,胸腺T细胞的发育情况,外周血和脾脏中T细胞、B细胞和髓系细胞比例的影响。使用5-FU进行化疗损伤诱导,采用流式细胞术分析SIRT5缺失对骨髓造血干/祖细胞比例的影响,同时检测SIRT5缺失小鼠造血干/祖细胞的细胞周期和凋亡。通过流式分选进行造血干细胞体外培养,分析SIRT5缺失对造血干细胞增殖能力的影响。结果:与野生型相比,SIRT5的缺失不影响小鼠胸腺中T细胞的发育以及外周血和脾脏中T细胞、B细胞和髓系细胞比例。在骨髓中,SIRT5缺失小鼠的造血干/祖细胞比例升高。在5-FU处理的造血损伤情况下,SIRT5缺失会导致小鼠造血干细胞比例下降(P<0.05),并且SIRT5缺失小鼠的造血干/祖细胞由G_(0)期向G_(1)期激活(P<0.05),同时伴随早期凋亡率显著升高(P<0.05)。通过体外单克隆培养,与野生型相比,SIRT5缺失小鼠的造血干细胞克隆形成能力显著下降(P<0.05)。结论:SIRT5缺失导致造血干细胞体外克隆能力下降。在造血应激情况下,SIRT5缺失不利于小鼠造血干/祖细胞损伤后的恢复。

敲减SMARCA4通过抑制胆固醇合成导致HT1080细胞铁死亡

目的:探讨SMARCA4(SWI/SNF-related,matrix-associated,actin-dependent regulator of chromatin,subfamily A,member 4)在铁死亡中的作用和分子机制。方法:(1)培养人纤维肉瘤细胞系HT1080,设置对照[二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)]组和不同浓度(31.25、62.5和125 nmol/L)Ras选择性致死小分子3(Ras-selec‐tive lethal small molecule 3,RSL3;铁死亡诱导剂)处理组,每组3个复孔;利用Western blot检测细胞中SMARCA4蛋白水平。(2)利用2条小干扰RNA敲减HT1080细胞的SMARCA4基因,并将细胞分为阴性对照组和SMARCA4基因敲减(siSMARCA4-1和siSMARCA4-2)组,每组3个复孔;利用Western blot检测3组细胞中SMARCA4蛋白水平;利用高内涵细胞成像分析系统检测DMSO、坏死抑素2外消旋体(necrostatin 2 racemate,Nec-1s;坏死性凋亡抑制剂)、N-苯甲基氧化碳酰-缬氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-氯化丙酮[Z-VAD(OMe)-FMK,Z-VAD;广谱caspase抑制剂/凋亡阻断剂]和铁抑素1(ferrostatin-1,Fer-1;铁死亡抑制剂)处理后3组细胞的存活率;利用RT-qPCR和流式细胞术检测3组细胞的铁死亡指标:前列腺素内过氧化物合成酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)基因转录、脂质过氧化、总活性氧(reactive oxygen species,ROS)、不稳定铁池(labile iron pool,LIP)和谷胱甘肽;利用RT-qPCR检测3组细胞中铁代谢基因、调控铁死亡的ROS调节基因和胆固醇合成关键基因的转录水平;利用高内涵细胞成像分析系统检测胆固醇处理后3组细胞的存活率。(3)对已发表的在线数据进行共同差异基因分析和基因本体论(gene on‐tology,GO)富集分析。结果:(1)RSL3处理降低SMARCA4蛋白水平(P<0.05)。(2)敲减SMARCA4导致细胞铁死亡。(3)敲减SMARCA4不通过影响LIP或调控铁死亡的ROS调节基因的转录水平而导致铁死亡。(4)敲减SMARCA4影响细胞膜、脂筏相关通路和胆固醇合成;(5)补充胆固醇可以挽救敲减SMARCA4导致的铁死亡(P<0.01)。结论:铁死亡诱导剂RSL3处理降低人纤维肉瘤HT1080细胞中的SMARCA4蛋白水平,且敲减SMARCA4通过抑制胆固醇合成导致HT1080细胞铁死亡。

脂多糖诱导年轻小鼠骨髓及脾脏造血干细胞衰老表型的作用研究

目的:探究脂多糖诱导的炎症反应对年轻小鼠骨髓及脾脏中造血干/祖细胞衰老表型的影响。方法:(1)构建细菌脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的急性炎症小鼠模型,流式细胞术检测LPS刺激后年轻小鼠骨髓和脾脏中造血干/祖细胞的百分率,以及外周血和脾脏中各类成熟细胞百分率;通过增殖标记物Ki67检测小鼠骨髓和脾脏中造血干/祖细胞增殖的变化;检测炎症刺激后脾脏中造血干/祖细胞CD45蛋白的表达变化;(2)分析野生型年轻小鼠(2月龄)和年老小鼠(24月龄)骨髓和脾脏中造血干/祖细胞,外周血和脾脏中各类成熟细胞的百分率;(3)生物信息分析LPS刺激诱导造血干细胞转录组的变化。结果:(1)与对照组小鼠相比,体内LPS刺激导致小鼠骨髓中造血干/祖细胞百分率显著升高(P<0.05),外周血和脾脏中髓系细胞百分率显著升高(P<0.05);(2)与对照组小鼠相比,体内LPS刺激导致小鼠脾脏重量和细胞数目增多(P<0.05),脾脏中造血干/祖细胞百分率增多(P<0.05);(3)LPS刺激促进小鼠骨髓和脾脏中的造血干/祖细胞增殖(P<0.05);(4)LPS刺激导致小鼠脾脏中造血干/祖细胞CD45蛋白的表达降低(P<0.01);(5)与年轻小鼠相比,年老小鼠脾脏重量增加(P<0.05),脾脏中的造血干/祖细胞百分率增多(P<0.01);(6)与年轻小鼠相比,年老小鼠骨髓中的造血干细胞百分率显著升高(P<0.01),外周血和脾脏出现髓系分化偏向(P<0.01);(7)LPS刺激促进造血干细胞氧化应激和凋亡信号通路激活。结论:LPS刺激诱导造血干/祖细胞出现增殖,偏向髓系分化,髓外造血以及氧化应激、凋亡信号通路激活等造血干/祖细胞衰老表型。

胃癌危险因素研究中多因子共线性的logistic回归分析

目的 探索胃癌的危险因素 ,并探讨研究中存在的多因子共线性的处理方法。方法 采用病例对照方法 ,获得 5 0名胃癌患者和 5 0名对照的流行病学资料 ;PCR方法检测个体基因型 ;应用线性回归中的三个工具 ,对各研究因素进行共线性诊断 :用主成分分析改进的方法 ,得出并解释最终的回归模型。结果 多因素logistic回归结果与单因素分析结果不一致 ,共线性诊断显示方差膨胀因子普遍较大 ,GSTM 1基因型、肿瘤家族史等因素之间存在多因子共线性。应用主成分分析改进后的logistic回归模型拟合数据 ,不仅各回归系数的标准误均有减小 ,而且有更多的因素被选入模型。结论 遗传易感性和环境因素在胃癌的发生中共同起作用。对疾病危险因素进行logistic回归分析时 ,应首先进行原始变量的多重共线性诊断 。

骨髓干细胞移植促进ctnt^(R141W)转基因小鼠心肌组织再生

目的观察骨髓干细胞移植对ctnt^(R141W)转基因小鼠心脏组织结构的重建和病变心脏的泵血功能的影响。方法放射线9Gy照射ctnt^(R141W)转基因小鼠,将绿色荧光蛋白转基因小鼠的骨髓细胞尾静脉注射入ctnt^(R141W)转基因小鼠体内,替换ctnt^(R141W)转基因小鼠自身的骨髓细胞。流式细胞仪分析移植后的ctnt^(R141W)转基因小鼠绿色荧光骨髓干细胞所占的百分比。用免疫荧光双染方法探测移植后的ctnt^(R141W)转基因小鼠心肌组织中绿色荧光心肌细胞所占的比例,M型超声检测ctnt^(R141W)转基因小鼠心脏功能变化。结果相对于野生型对照小鼠ctnt^(R141W)转基因小鼠心肌组织中绿色荧光心肌细胞显著增加,左心室内径缩小,室壁变厚,收缩期末期和舒张末期左室容积缩小,心脏泵血功能增强。结论移植后的骨髓干细胞参与ctnt^(R141W)转基因小鼠心肌组织的损伤后重建,有助于改善病变心脏的泵血功能。研究提示扩张型心肌病心肌组织损伤重建增加,移植后的骨髓干细胞在受损心肌组织再生过程中起重要作用。

血管紧张素转换酶基因多态性与脑出血的关系

目的 高血压是脑出血最主要的危险因素 ,与血压水平或高血压相关的基因可能通过血压和其它途径在脑出血的发生、发展中起重要作用。本文通过大样本病例 -对照研究 ,拟探讨血管紧张素转换酶 (ACE)基因I/ D多态性与脑出血的相关性。方法 多中心病例对照研究 ,从 7个研究中心收集 4 75例脑出血病例 ,匹配 4 75例对照 ,病例和对照均接受心脑血管病标准问卷调查、血生化检查。PCR检测 ACE基因 I/ D多态性。结果 脑出血组和对照组 ACE基因 I/ D多态性基因型频数分布符合 Hardy- Weinberg平衡。两组 ACE基因 I/ D多态性基因型和等位基因频率分布差异无明显统计学意义 (基因型 :χ2 =0 .172 ,P=0 .918;等位基因 :χ2 =0 .0 8,P=0 .773)。多因素分析调整传统危险因素后 ,ACE基因 ORDI/ II=1.0 9(95 % CI 0 .6 8～ 1.78) ,ORDD/ II=1.10 (95 % CI 0 .6 9～ 1.77) ,表明 ACE基因 I/ D多态性和脑出血无关。结论 ACE基因 I/ D多态性和脑出血不存在关联关系 ,ACE基因I/ D多态性可能不是中国人脑出血的遗传影响因素。

α-Adducin基因和血管紧张素转换酶基因多态性与原发性高血压的关系

目的 :旨在探讨α adducin基因G460W和血管紧张素转换酶 (ACE)基因I/D多态性在国人中与原发性高血压的关系。方法 :2 3 4例原发性高血压患者 (高血压组 ) ,对每一高血压患者按性别、年龄 (± 3岁 )相同 1∶1匹配对照 (对照组 )。高血压组与对照组均进行基因分型 ,并通过心脑血管病标准问卷调查、血生化指标测定收集脑出血传统危险因素的信息。结果 :α adducin基因 460W等位基因频率在高血压组显著高于对照组 (基因型McNemar’s检验P =0 0 0 6)。多因素Logistic回归调整高血压传统危险因素后 ,α adducin基因 460W等位基因携带者与非 460W等位基因携带者相比 ,比值比(OR)为 1 5 5 ( 95 %CI,1 18～ 2 0 5 )。而高血压组和对照组ACE基因I/D多态性频率分布无差异 (基因型McNemar’s检验P =0 685 )。结论 :α adducin基因G460W多态性与原发性高血压显著相关 ,这种相关关系在调整了高血压其他危险因素后依然存在。关联关系的发现提示有必要对其与高血压的关系进行更为深入的探索 ,以期在高血压的治疗和预防中发挥作用。

国人血浆总同型半胱氨酸水平与冠心病关联

目的 探讨血浆总同型半胱氨酸水平升高是否增加国人冠心病(CHD)的危险。方法 分析1698例经冠状动脉造影确诊的CHD患者、302例冠状动脉造影阴性者及500名健康人的血浆总同型半胱氨酸、血脂及血糖水平与CHD及其它危险因素的关系。结果:(1)CHD组男女患者的血浆总同型半胱氨酸水平及异常检出率(％)[男:16.43±1.60μmol/L,(51.3％);女:14.38±11.51μmol/L,(39.3％]均明显高于冠造阴性组(男:13.70±1.49μmol/L,(34.1％);女:12.27±1.39μL,(22.0％)及健康对照组(男:12.37±1.32μmol/L,(24.7％);女:10.65±1.31μmol/L,(10.0％),且急性心肌梗死组>陈旧性心肌梗死组>心绞痛组(P<0.001)同时,CHD组患者的吸烟、冠心病家族史、高血压及糖尿病的百分率和总胆固醇、LDL-C水平等亦明显高于,而HDL-C水平却明显低于健康对照组及冠造阴性组(P<0.01)。(2)各组男性总同型半胱氨酸水平及异常检出率(％)均高于女性;男性CHD患者的高同型半胱氨酸血症患病率和同型半胱氨酸中、重度增高率分别是女性的1.31和1.56倍(P<0.001);且男性健康者及女性CHD患者的总同型半胱氨酸水平与年龄之间有明显正相关性(r=0.258,P<0.001 andr=0.129,P<0.05)。(3)CHD组高同型半胱氨酸血症患者血浆总同型半胱氨酸水平(22.68±1.50μmol/L,)亦明显?

高血压大家系中胰岛素抵抗与高血压关系的研究

目的 探讨胰岛素抵抗是否为所研究高血压大家系的遗传中间表型 ,研究胰岛素抵抗与高血压关系。方法 我们在北京石景山区收集到一个高血压大家系 ,共 4代约 2 2 0人 ,以该高血压大家系成员为观察对象 ,检测其空腹血糖 (FPG) ,血脂 ,血浆胰岛素 (FINS) ,计算胰岛素抵抗指数 (IR)反映胰岛素抵抗的情况。结果 该家系直系成员高血压组和血压正常组IR值都显著高于家族旁系血压正常 (亦无高血压家族史 )组。Logistic回归分析显示在家族直系成员中 ,年龄为影响血压的主要因素 ,旁系中年龄 ,IR为影响血压的主要因素 ,而以IR对血压的影响最大。结论 胰岛素抵抗对该高血压大家系血压水平有一定影响 ,能否作为其遗传中间表型尚需进一步研究 ,但在该家系居住的同一地区人群中 ,胰岛素抵抗是影响血压的重要危险因素 。

利用流式荧光原位杂交法测定细胞端粒长度

目的建立利用流式荧光原位杂交法检测细胞端粒长度的技术方法。方法以端粒酶敲除的G3小鼠和同龄野生型小鼠为检测对象,分离其外周血中的单个核细胞后与肽核酸荧光探针杂交,用流式细胞仪采集和分析其端粒长度,分别用荧光原位杂交方法和SYBR Green荧光定量PCR方法验证其准确性。结果流式荧光原位杂交法测定G3小鼠细胞端粒相对长度与C57BJ/6野生型小鼠相比为0.5345,荧光定量PCR测定端粒相对长度为0.5717,结果基本一致。结论流式细胞术与原位杂交方法结合起来检测细胞端粒的平均长度可靠易行,对单个核细胞端粒平均长度的检测有较高的实用性。

艾灸对膝骨性关节炎不同分期临床疗效比较

目的:比较艾灸对膝骨性关节炎不同分期临床疗效。方法:选入早、中、晚期膝关节骨性关节炎患者各30例,进行规范化艾灸治疗,然后对3组病人治疗前后WOMAC问卷评分变化及临床改善情况进行比较。结果:三组患者治疗后疼痛程度WOMAC评分均显著改善,早期组和晚期组改善幅度无显著差异、且显著优于中期组。三组患者治疗后僵硬程度均显著改善,三组改善幅度无显著差异。三组患者治疗后日常生活能力均显著改善,晚期组其改善幅度显著优于早期组和中期组、早期中期两组改善幅度无显著差异。早期组治疗后改善率显著高于中期组及晚期组,中、晚期组间比较无显著差异。结论:艾灸对不同分期膝骨性关节炎均有显著的疗效。

头颈部鳞状细胞癌肿瘤干细胞研究进展

肿瘤干细胞是肿瘤组织中具有自我更新及多向分化潜能的干细胞样细胞,目前认为,它是肿瘤细胞的起源,与肿瘤复发转移密切相关,有望成为新的治疗靶点。头颈部鳞状细胞癌中同样存在肿瘤干细胞,本文就这方面研究现状及进展进行综述。

3300例骨性关节炎患者中医体质研究

据统计，65岁以上人群中骨性关节炎的发病率男性为60％，女性为70％。中医体质学在慢性病的调治体质上有其独特的优势，发挥中医体质学调治体质的优势，有利于提高骨性关节炎的中医药预防和诊治水平，

Cramp转基因小鼠的构建及鉴定

目的建立系统性表达Cramp转基因模型小鼠,为研究Cramp在衰老中的作用提供模型动物。方法把Cramp cDNA插入系统性表达CMV启动子下游,构建转基因表达载体,显微注射法建立Cramp转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因型,用RT-PCR和Western blotting方法筛选高表达品系。结果成功构建Cramp cDNA转基因载体,建立了Cramp转基因小鼠,通过RT-PCR和Western blotting方法筛选出3个高表达品系。结论建立了系统表达Cramp转基因小鼠,转入的Cramp基因在骨髓、脾脏、肝脏等组织高表达,为研究Cramp基因在衰老中的作用及机制提供了动物模型。

骨关节炎相关危险因素研究进展

目前,我国骨关节炎的发病率迅速增加,其相关危险因素可分为系统性危险因素和局部性危险因素。本文将近10年国内骨关节炎的相关危险因素文献作一综述。

热敏灸治疗膝骨性关节炎65例

热敏灸全称为“腧穴热敏化悬灸疗法”，是采用点燃的艾材悬灸热敏穴位，激发透热、扩热、传热、局部不（微）热远部热、表面不（微）热深部热、非热觉等热敏灸感和经气传导，并施以个体化的饱和消敏灸量，从而提高艾灸疗效的一种新疗法。笔者科室引进热敏灸方法，于2010年～2012年间，对65例膝骨性关节炎患者给予连续治疗，反复验证并体验到了本疗法的显著疗效，现报道如下。

Cramp基因敲除对小鼠骨髓造血干细胞的影响

目的研究Cramp基因敲除在衰老过程中对小鼠造血干细胞的作用。方法应用流式细胞仪分析3月龄及12月龄Cramp基因敲除小鼠及同窝野生型小鼠的骨髓造血干细胞的比例及不同发育阶段B淋巴细胞的比例。结果与野生型小鼠相比,12月龄Cramp基因敲除小鼠的骨髓长期造血干细胞增多,多潜能造血祖细胞减少;前体B淋巴细胞和未成熟B淋巴细胞减少,成熟B淋巴细胞增多。结论在衰老过程中,Cramp基因敲除对骨髓造血干细胞及B淋巴细胞发育有重要影响。

白藜芦醇对造血系统辐射损伤的防护作用

背景：骨髓抑制是辐射损伤的主要表现，也是临床进行肿瘤放疗时最常见的副作用。骨髓幼稚型造血细胞（hematopoietic progenitor cells, HPCs）（对缺血应激产生快速增殖反应，受到辐射损伤后引起急性骨髓抑制；

天灸治疗膝骨性关节炎40例

天灸疗法源于＂天人合一＂＂春夏养阳、秋冬养阴＂的中医理论,在临床中是针对好发于冬季,或在冬季加重的病变,利用三伏天特殊的节气,使用温阳药物借助自然界阳气,振奋体内阳气的一种治疗方法,