DCN通过VEGF因子抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的实验研究

目的探讨核心蛋白聚糖(decorin,DCN)通过下调血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达抑制乳腺癌MCF-7肿瘤细胞增殖的分子机制。方法体外培养MCF-7细胞,质粒转染诱导MCF-7细胞高表达核心蛋白聚糖为DCN组,不转染的MCF-7细胞为正常对照组。MTT法、流式细胞术细胞观察各自细胞增殖情况,RT-PCR、Western blot法检测各组细胞VEGF mRNA和蛋白表达变化。结果与对照组比较,流式细胞术检测DCN转染24、48、72 h后DCN组MCF-7细胞数目明显减少(P<0.05),MTT结果显示DCN组细胞增殖能力受到显著抑制(P<0.05),Western blot检测DCN组细胞VEGF蛋白表达水平有下降趋势。结论核心蛋白聚糖通过降低VEGF mRNA表达水平,使细胞内生成的VEGF蛋白减少,抑制MCF-7细胞增殖。

D-半乳糖致衰老小鼠模型的实验研究

目的探讨应用D-半乳糖制作小鼠衰老模型,并进行指标检测.方法 D-半乳糖连续皮下注射42 d制作小鼠衰老模型,同时进行体质量变化测量、行为学测试和形态学衰老指标的测定.结果与正常对照组相比,造模4周后,D-半乳糖致衰老小鼠体质量显著降低(P<0.01);D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆能力减弱,水迷宫探索路径长度、搜台潜伏期均显著延长(P<0.01);形态学观察显示各器官组织结构出现衰老改变.结论 D-半乳糖可以成功制作小鼠衰老模型.

β-巯基乙醇在大鼠骨髓基质细胞向神经干细胞诱导分化中的作用

目的:探讨骨髓基质细胞诱导分化为神经干细胞的更佳培养液组成。方法:实验于2005-10/2006-08在省级实验室北华大学医学院实验中心完成。①实验材料:体质量120～160g的Wistar大鼠,由北华大学动物中心提供。②实验方法:取120～160g大鼠3只,体外分离培养大鼠骨髓基质细胞。培养约14d,待原代细胞贴满培养瓶,呈成纤维细胞样生长,用0.25%胰蛋白酶消化原代细胞约3min,在倒置显微镜下见贴壁细胞基本收缩成类圆形后,加入含胎牛血清的DMEM培养液终止消化,并将细胞液吹打均匀,以1×107L-1接种于2个细胞培养瓶中进行1∶2传代扩增培养。在传代培养细胞培养液中加入神经细胞诱导剂,选取生长良好的2,3,4代细胞进行实验。取第5代培养细胞,以8×103/cm2接种于预铺有盖玻片3.5cm培养皿中制备细胞爬片,每孔加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM培养液2mL,达80%融合时更换新鲜培养液,并在培养液中加入1mmol/Lβ-巯基乙醇,诱导24h,磷酸盐缓冲液洗涤,换成含1mmol/Lβ-巯基乙醇的无血清培养液,5h后更换为改良神经细胞培养液,并设立未加入含β-巯基乙醇培养液的为对照。利用免疫组织化学方法检测神经元特有巢蛋白。结果:①培养的骨髓基质细胞形态学变化:接种初期,细胞贴壁生长是以分散的、克隆集落方式增殖,细胞呈圆形漂浮于培养液中,培养10d后,细胞形态基本为纺锤形的成纤维细胞样,偶有宽大扁平的多边形细胞,细胞逐渐长出小突起,出现出芽现象,14～20d后,突起细胞增多,突起延长并相互连接成网,具有神经细胞形态特征。②免疫组织化学染色检测神经元特有巢蛋白:1周左右,细胞可表达巢蛋白阳性,细胞大而圆,呈棕褐色,经培养诱导分化2周后的长突起细胞,表达神经元特异性抗原巢蛋白阳性细胞互相成网状连接。实验组第4代90%细胞巢蛋白阳性,在荧光显微镜下细胞发黄绿荧光,对照组第1代细胞约30%细胞呈巢蛋白阳性,荧光弱。结论:在诱导培养液中加入β-巯基乙醇,可明显促进骨髓基质细胞的分化,并可获得神经干细胞。

核心蛋白聚糖对HepG2细胞表皮生长因子受体转导蛋白及Ras/Raf信号通路的影响

目的将核心蛋白聚糖(DCN)真核表达载体转染到HepG2中并检测其表皮生长因子受体(EGFR)表达。方法经大肠杆菌JM109介导DCN真核表达载体转染HepG2细胞,建立稳定转染的细胞株,采用Western印迹法和免疫组化检测其EGFR表达。结果 pFRT/laczeo-DCNHepG2细胞中EGFR较pFRT/laczeo HepG2明显高表达;pFRT/laczeo-DCN HepG2细胞中EGFR颗粒明显减少、变小。结论 DCN转染的HepG2细胞TGFR减少,能够抑制MAPK/Ras/Raf信号通路,从而阻止、抑制HepG2的生长。

碘对大鼠脾淋巴细胞体外培养的影响

目的研究不同剂量碘酸钾对大鼠脾淋巴细胞生长的影响。方法以体外培养大鼠脾淋巴细胞为研究对象,给予碘酸钾正常量的10、100、500倍培养后,观察淋巴细胞生长、集落形成及细胞学变化。同时运用流式细胞术检测淋巴细胞周期变化。结果含碘500倍(高碘)组的CD4+/CD8+与正常对照组相比降低,淋巴细胞增殖反应能力增强,对淋巴细胞生长具有明显的促进作用(P<0.01),有统计学意义。结论细胞培养液中含碘量高时(高碘组)可造成淋巴细胞免疫功能紊乱,机体存在自体免疫性疾病和肿瘤发生的危险。

显示肥大细胞颗粒的新方法

肥大细胞（mastcell，MC）是多数脊椎动物疏松结缔组织中常见的细胞，广泛地分布于机体各个器官，尤其是存皮肤、消化道、呼吸道、肠系膜和神经末梢的周同结缔组织内密度很大。在变态反应、炎症、寄生虫感染和肿瘤等疾病时，

葛根素水溶液对酒精性脑病的药理作用

目的探讨葛根素对抗酒精性脑病的作用机制。方法 30只Wistar大鼠,随机分为3组,对照组(n=10)用50%葡萄糖20 ml·kg-1·d-1灌胃;模型组(n=10)用40%酒精按8 g·kg-1·d-1灌胃;葛根素组(n=10):葛根素+酒精,按葛根素水溶液10 mg·kg-1·d-1灌胃给药,给药30 d,处死大鼠,取血清及额叶大脑皮质,采用偶氮显色法定量检测各组大鼠血浆中内皮素(ET)的水平;用ELISA法检测各组大鼠大脑皮质中肿瘤坏死因子(TNF-α)的水平;Western印迹方法检测大脑皮质组织环氧化酶-2(COX-2)表达。结果模型组血浆中的ET以及大脑组织匀浆中的TNF-α水平明显高于对照组(P<0.05);葛根素组血浆中的ET以及大脑组织匀浆中的TNF-α水平略高于对照组,而明显低于模型组(P<0.05);大脑皮质中COX-2对照组呈弱表达,模型组显著高表达,葛根素组介于二者之间。结论葛根素为具有较强的抗酒精性脑损伤作用,其机制可能为抑制血浆中内毒素(ET)和大脑皮质COX-2的产生水平,导致大脑皮质中的TNF-α含量减少,最终减轻酒精所致的脑组织损伤。

北五味子总木脂素对D-半乳糖诱导的小鼠脑衰老自噬和凋亡的影响

目的:利用D-半乳糖复制小鼠衰老模型,探讨北五味子总木脂素(SCL)延缓小鼠脑组织衰老的作用及其机制。方法:以50只小鼠为实验对象,实验分为空白对照组(n=10),模型(100 mg·kg-1·d-1)组(n=10),低(35mg·kg-1·d-1)、中(70mg·kg-1·d-1)和高(140mg·kg-1·d-1)剂量SCL组(n=10)。小鼠连续皮下注射D-半乳糖10周制备D-半乳糖小鼠衰老模型,给予SCL(35、70和140mg·kg-1·d-1)处理10周。水迷宫试验检测小鼠学习记忆能力,Western blotting法检测各组小鼠脑组织中线粒体Bax和Bcl-2蛋白表达、泛素化蛋白(Ub)及微管相关蛋白轻链3(LC3)表达水平的变化;免疫组织化学法观察小鼠大脑皮质和海马组织中LC3蛋白表达。结果:学习记忆能力测试中,与空白对照组比较,模型组小鼠游泳时间延长(P<0.05),错误次数增多(P<0.05);与模型组比较,SCL低、中和高剂量组小鼠游泳时间缩短(P<0.05),错误次数减少(P<0.05);Western blotting法检测,与空白对照组比较,模型组小鼠脑组织中Bax蛋白表达水平增加、Bcl-2蛋白表达水平降低,泛素化蛋白Ub、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达水平均增加(P<0.05);与模型组比较,SCL低、中和高剂量组小鼠脑组织中Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平增加,Ub、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达水平均降低(P<0.05)。免疫组织化学法检测,空白对照组小鼠大脑皮质和海马组织中神经形态正常,神经元细胞浆内无棕黄色颗粒染色,LC3蛋白表达为阴性;模型组小鼠有神经细胞变性,大脑皮质和海马神经元中LC3蛋白阳性细胞数增加(P<0.05);与模型组比较,SCL低、中和高剂量组小鼠神经细胞变性数量明显减少,大脑皮质和海马神经元中LC3蛋白阳性细胞数减少(P<0.05)。结论:SCL具有缓解D-半乳糖诱导的小鼠脑组织衰老作用,其作用机制与SCL调节自噬作用和抑制细胞凋亡有关联。

北五味子总木脂素减轻内质网途径凋亡延缓小鼠脑衰老

目的:利用D-半乳糖复制小鼠衰老模型,探讨北五味子总木脂素(SCL)抗小鼠脑衰老的作用及其作用机制。方法:实验分为空白对照组、模型组以及SCL低、中、高剂量组。小鼠跳台实验检测学习记忆能力,Western blotting方法检测泛素化蛋白(Ub)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白质二硫键异构酶(PDI)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达水平以及线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平。免疫组化法观察大脑皮质Bcl-2和Bax蛋白表达情况。结果:在学习测试中,模型组小鼠5 min内错误次数较空白对照组增多(P<0.05),SCL低、中、高剂量组小鼠5 min内错误次数均较模型组减少(P<0.05)。在记忆测试中,模型组小鼠首次跳下平台的潜伏期较空白对照组缩短(P<0.05),5 min内错误次数增多(P<0.05);与模型组比较,SCL低、中、高剂量组小鼠首次跳下平台的潜伏期延长(P<0.05),5 min内错误次数减少(P<0.05)。与空白对照组比较,模型组的Ub、GRP78、PDI、CHOP和Bax蛋白表达水平均增加(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达水平降低(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低(P<0.05)。与模型组比较,北五味子总木脂素低、中、高剂量组脑组织的Ub、GRP78、PDI、CHOP和Bax蛋白表达水平均降低(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05)。空白对照组神经细胞形态正常,细胞浆的Bcl-2蛋白呈阳性表达,Bax蛋白呈阴性表达;模型组神经细胞变性,细胞浆的Bcl-2蛋白呈阴性表达,Bax呈阳性表达;SCL低、中、高剂量组变性细胞数量均明显减少,细胞浆内的Bcl-2蛋白呈阳性表达,Bax蛋白呈阴性表达。结论:北五味子总木脂素具有抑制D-半乳糖诱导的小鼠脑组织衰老作用,其作用机制与减轻内质网应激途径凋亡有关。

葛根素对大鼠酒精性肝炎的影响及其机制

目的:探讨葛根素对酒精性肝炎的作用机制.方法:21只Wistar大鼠,随机分为3组,正常对照组(n=7)用玉米油+500g/L葡萄糖20mL/(kg?d)灌胃,模型组(n=7)用400mL/L乙醇按8g/(kg?d)+玉米油灌胃,葛根素组(n=6):葛根素+酒精,按葛根素5mg/(kg?d)腹腔注射给药.采用比色法测定血清AST,ALT及GST,放免法测定血浆PGE2,TNF及IL-6,Western blot方法检测肝组织COX-2表达,并通过光镜观察肝组织病理变化.结果:血浆ALT,AST及GST模型组与正常对照组比较有明显升高(107.5±6.81vs33.20±10.55,138.29±9.72vs47.86±14.3,3.57±0.53vs1.43±0.43,均P<0.01);与模型组比较,葛根素组血浆ALT及AST水平(52.33±13.19,63.33±7.03)有明显下降(P<0.01).GST有下降趋势,但无明显著意义;模型组与正常对照组比较血浆PGE2,TNF及IL-6明显上升(274.13±26.15vs193.84±23.97,1.85±0.11vs0.90±0.18,68.07±12.64vs40.50±5.09,均P<0.01);与模型组比较,葛根素组血浆PGE2,TNF及IL-6明显下降(227.05±21.55,1.35±0.19,53.16±5.62,均P<0.01),COX-2正常对照组呈弱表达,模型组显著高表达,与正常对照组比较差别显著(P<0.01),葛根素组COX-2表达下调,与模型组相比有明显下调(F=27.94,P<0.01).结论:葛根素通过抑制肝脏COX-2的表达,从而减少炎症介质PGE2、TNF及IL-6的生成,最终减轻酒精对肝脏的损伤作用.

脑血栓患者治疗前后血小板膜糖蛋白CD62p水平的比较

血小板的主要功能就是参与血栓形成，该功能的实现是通过其表面的糖蛋白来完成的，血小板膜表面糖蛋白包括血小板质膜糖蛋白和颗粒膜糖蛋白。较重要的血小板质膜糖蛋白有CD41（GPIIb，CD61（GPma），CD42a（GPIX），CD42b（GPIb），CD36（GPIV）。在正常情况下，血小板内α-颗粒膜糖蛋白和溶酶体膜糖蛋白（cD63）处于静息状态，在血小板活化因子等因素刺激下，Q-颗粒膜和溶酶体膜与血小板胞浆膜融合，

以病历及问题为先导式教学法在妇产科教学中的应用

目的:改进本科生妇产科学的教学方法,提高教学效果。方法:通过预习章节内容,导入典型临床病历,提出问题,解答问题,总结并加入该病的最新研究动态及最新治疗方法的方式进行本科生妇产科学的教学。结果:课堂气氛活跃,学生的学习兴致高,教学与临床更贴近,教学效果好。结论:采用计算机多媒体教学的同时,导入以病历及问题为先导式教学法,可以提高教学效果。

题好一半文——例谈调查报告标题的拟制

调查报告是事务性文书,其标题一般有公文式和文章式两种。公文式标题一般由＂事由（调查对象＋调查内容）＋文种＂组成,这是最常见的调查报告标题,例如《关于城市基层党建工作的调查报告》、《关于老城区改造的调查报告》等等,这种标题拟法合乎规范,庄重朴实,

卡托普利预处理对急性心肌损伤大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的探讨卡托普利预处理对急性心肌损伤大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法将Wistar雄性大白鼠随机分为3组:对照组、异丙基肾上腺素损伤组(Iso损伤组)、卡托普利预处理组(Cap预处理组)。用TUNEL方法检测心肌细胞凋亡,用免疫组化方法检测Fas、FasL、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 Cap预处理组与Iso损伤组比较,心肌细胞凋亡指数减少,Fas、FasL和Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达增高(P<0.01或P<0.05)。结论卡托普利可通过减少心肌细胞凋亡及降低凋亡相关基因的表达发挥心肌保护作用。

责任助产士全程陪伴分娩800例分析

目的：探讨责任助产士全程陪伴分娩的临床效果。方法；收集2003年7月-2004年8月在责任助产士全程陪伴分娩的产妇800例为A组，2002年2月-2003年6月传统方式分娩的产妇800例为B组，将两组产妇手术产率、产程、产后出血、胎儿窘迫、新生儿窒息率及产妇满意度做比较分析。结果：A组手术产率、产后出血、胎儿窘迫、新生儿窒息率显著降低（P〈0．01），经阴道分娩的产妇活跃期及第二产程显著缩短（P〈0．05），产妇满意度明显提高。结论：责任助产士全程陪伴分娩能提高产科服务质量，值得临床推广。

肾上腺髓质素在妊娠高血压疾病中的表达及意义

目的:通过对妊娠高血压疾病患者血浆及胎盘组织中肾上腺髓质素含量的测定,探讨肾上腺髓质素在妊娠高血压疾病中的变化及可能机制。方法:放射免疫分析法测定非孕妇女(30例)、妊娠高血压疾病妇女(50例)、正常晚孕妇女(30例)血浆中肾上腺髓质素的含量;放射免疫分析法测定后两组胎盘组织提取液中肾上腺髓质素含量。结果:(1)妊娠高血压疾病组血浆肾上腺髓质素含量明显高于正常晚孕组及非孕组,与正常晚孕组的差异有统计学意义(P<0.05),与非孕组的差异具有极显著的统计学意义(P<0.01),并且,随病情加重而增加,病情越重,升高越明显;(2)妊娠高血压疾病组胎盘组织中肾上腺髓质素含量明显高于正常晚孕组,差异有统计学意义(P<0.05);(3)血浆肾上腺髓质素含量、胎盘肾上腺髓质素含量与平均动脉压呈正相关(r=0.75,P<0.01;r= 0.73,P<0.01)。结论:肾上腺髓质素在妊娠高血压疾病患者中升高,它可能作为一种代偿机制参与了妊娠高血压疾病的发生。