基于倾向性评分匹配法评估不孕女性人乳头瘤病毒感染对宫腔内人工授精临床结局的影响

目的:评估不孕女性人乳头瘤病毒(HPV)感染对宫腔内人工授精(IUI)术后临床结局的影响。方法:采用回顾性队列研究分析空军军医大学唐都医院于2019年1月1日至2021年7月31日行IUI治疗的685例(1046个周期)患者的临床资料,其中丈夫精液人工授精(AIH)554例。根据HPV感染分为HPV阳性组和HPV阴性组,对IUI治疗及其中的AIH治疗患者按照采用倾向性评分匹配(1∶2),分别比较匹配后IUI治疗(HPV阳性组80例,HPV阴性组158例)及AIH治疗(HPV阳性组65例,HPV阴性组129例)患者中两组的助孕及妊娠结局。结果:IUI治疗患者匹配后HPV阳性组与HPV阴性组的临床妊娠率、活产率、异位妊娠率、流产率、巨大儿出生率及低体质量儿出生率差异均无统计学意义(P>0.05)。AIH治疗患者匹配后HPV阳性组与HPV阴性组的临床妊娠率、活产率、异位妊娠率、流产率、巨大儿出生率及低体质量儿出生率的差异仍无统计学意义(P>0.05)。结论:不孕女性HPV感染可能并不影响IUI患者的助孕及妊娠结局。

123例干燥综合征患者自身抗体及免疫球蛋白和补体检测分析

目的探讨干燥综合征患者血清自身抗体、免疫球蛋白和补体检测的临床意义。方法用免疫荧光法和免疫印迹法测定123例干燥综合征患者血清自身抗体,同时检测血清免疫球蛋白和补体,对检测结果进行统计分析。结果 123例干燥综合征患者血清抗核抗体(ANA)谱测定发现,原发性和继发性干燥综合征患者血清ANA阳性率分别为90.79%、93.62%,SS-A阳性率分别为69.74%、76.60%,SS-B阳性率分别为53.95%、68.09%,Ro-52阳性率分别为27.63%、38.30%。继发性干燥综合征患者血清ANA阳性率高于原发性干燥综合征患者。免疫球蛋白和补体测定显示,干燥综合征患者血清免疫球蛋白明显升高,以IgG升高为主。补体无明显升高。结论自身抗体ANA谱测定对于干燥综合征的诊断有极重要的参考价值,是病情判断和预后评价的重要手段。患者体内可出现明显的高球蛋白血症,有体液免疫功能的紊乱。

丙型肝炎病毒多表位基因核酸疫苗的构建及其免疫原性

目的 构建丙型肝炎病毒（HCV）多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1（-）-CtEm,用该重组质粒免疫BALB/c小鼠,并检测其免疫原性.方法 用BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切含有HCV C区、E2区模拟表位和NS3～NS5区细胞表位串联基因的原核表达载体pQE30-CtEm,克隆入真核表达载体pcDNA3.1（-）,脂质体瞬时转染CHO细胞,并检测其表达.以100 μg重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测其体液免疫和细胞免疫效果.结果 所构建的真核表达载体pcDNA3.1（-）-CtEm在CHO细胞中能获得有效表达.该质粒免疫小鼠后可诱导高水平的抗体,特异性淋巴细胞增殖反应、IFN-γ水平及CTL活性均明显高于空载体和生理盐水对照组.结论 已成功构建HCV多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1（-）-CtEm,免疫小鼠后可诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答.

HCV复合多表位抗原基因的克隆表达及其免疫学特性分析

目的构建丙型肝病炎病毒（HCV）截短C基因和多表位基因重组原核表达质粒，表达纯化融合蛋白，分析其免疫原性和抗原性。方法PCR方法扩增核心区羧基端部分缺失的基因片段Ct；合成HCVE2区模拟表位与NS3～NS57个表位基因Em；分别将Ct、Em克隆人原核表达质粒pQE30，筛选阳性重组质粒pQE30-CtEm，转化E．coli M15，IPTG诱导融合蛋白表达，薄层扫描分析表达蛋白；可溶性分析后用Ni^2＋-NTA凝胶亲和层析柱纯化、透析并浓缩融合蛋白；Westernblot分析纯化蛋白的特异性和抗原性；纯蛋白免疫小鼠后分析其免疫原性。结果成功构建了HCV复合多表位抗原基因的原核表达质粒pQE30-CtEm，目的基因可高效表达，表达产物主要以包涵体形式存在，Ni^2＋-NTA纯化可获得目的蛋白，纯化蛋白具有良好的抗原性和免疫原性。结论HCV复合多表位抗原基因融合蛋白可高效表达并得到纯化，该融合蛋白可作为HCV诊断抗原，也为丙型肝炎新型疫苗的研究提供了靶抗原。

HCV感染与自身免疫关系的研究

近年来HCV感染的发病机理已成为HCV研究的热点之一.自1989年Esterban首次在自身免疫性肝炎患者血清中检出抗HCV以来,HCV感染与自身免疫的关系受到众多学者的关注[1].

PCR-ELISA用于HFRS病人早期诊断的研究

目的 建立检测HFRS患者血清标本中HV基因的PCR -ELISA方法。方法 设计并合成互补于HVS基因片段的标记引物 ,对 98例HFRS患者血清进行RT -nestedPCR扩增 ,并用酶免方法分析扩增产物。结果 98例患者不同病日采集的血清标本的RT -nestedPCR平均检出率仅为 6 0 .2 % ,而PCR -ELISA平均检出率为 80 .6 %。结论 PCR

稳定表达丙型肝炎病毒复合多表位基因P815细胞克隆的建立

目的：构建丙型肝炎病毒（HCV）多表位基因的真核表达载体，获得重组质粒稳定转染的P815细胞克隆．方法：PCR方法扩增核心区羧基端部分缺失的基因片段Ct；合成HCVE2区模拟表位和NS3～NS5七个T细胞表位基因Em；分别克隆入穿梭质粒载体pDE22中．用BamHⅠ／HindⅢ双酶切pDE22得到复合多表位基因CtEm，再将CtEm亚克隆入真核表达载体pCDNA3，1（-），构建重组质粒pCDNA3．1（-）-CtEm，经酶切鉴定及测序正确后，通过脂质体转染至P815细胞，持续G418压力选择和有限稀释法克隆化获得稳定转染的细胞系，用RT—PCR，IFA，Western—blot证实该稳定转染细胞系可以表达多表位基因．结果：构建了真核表达载体pcDNA3．1（-）-CtEm，建立了稳定转染的P815细胞系．结论：构建HCV多表位基因的真核表达载体，稳定转染P815细胞，为进一步在疫苗研究中分析CTL功能建立了靶细胞．

八年制医学生实验诊断学教学改革与实践

八年制医学生基础扎实、思维活跃,实验诊断学教学应与五年制有所区别,需进行一系列教学改革。采用以器官系统为主线、临床授课以病例为中心、PBL和双语教学为主导的教学模式,辅助临床参观、网络课程、学科专业网站和专题讲座。通过教学改革和实践,增强学生的专业学习兴趣,成绩明显提高,同时也提高了学生的临床思维能力和对疾病诊断的综合分析判断能力。八年制实验诊断学改革取得明显成效,为进一步的实验诊断学教学改革提供了实践经验。

系统性硬化症165例自身抗体及免疫球蛋白 补体检测分析

目的探讨系统性硬化症患者血清自身抗体及免疫球蛋白、补体检测的临床意义。方法用免疫荧光法和免疫印迹法测定165例系统性硬化症患者血清自身抗体,散射免疫比浊法测定免疫球蛋白及补体,并对相关检查结果进行分析。结果165例系统性硬化症患者血清自身抗体测定中抗核抗体(ANA)阳性率为93.33%;ANA谱测定、抗硬皮病抗体70(抗-SCL-70)和抗着丝点抗体(抗-CENP-B)在弥散型和局限型硬化症患者中阳性率分别为65.17%和75.00%;血清免疫球蛋白测定以IgG升高为主,占69.70%,同时IgA和IgM也有不同程度升高,轻链λ和κ显著升高,分别占67.88%和64.24%;补体测定C3、C4有不同程度降低;其他检查可见单核细胞和球蛋白升高明显。结论系统性硬化症患者体内存在多种自身抗体,抗-SCL-70和抗-CENP-B是诊断系统性硬化症的标志抗体,患者体内出现明显体液免疫功能的紊乱,对诊断具有参考意义。

HCV复合多表位基因真核表达载体的构建及在真核细胞中的表达

目的建立丙型肝炎病毒（HCV）复合多表位基因的真核表达载体，并在COS7细胞中瞬时表达。方法用PCR方法扩增核心区羧基端部分缺失的基因片段；分别合成HCV E2区模拟表位和NS3-NS57个T或Th细胞表位基因；PCR方法将羧基端部分缺失的HCV核心区基因与合成的表位基因串联，克隆入真核表达载体pcDNA3．1（-），并通过脂质体瞬时转染COS7细胞。结果所构建的真核表达载体pcDNA．3．1（-）-CtEm已成功转染COS7，间接免疫荧光和RT-PCR证实，pcDNA3．1（-）-CtEm可在COS7中表达复合多表位基因。结论已成功构建HCV复合多表位基因的真核表达载体，并在COS7细胞中瞬时表达，为进一步复合多表位的基因免疫奠定基础。

HCV HLA-A2限制性复合多表位基因的构建、克隆表达及其免疫特性分析

目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)HLA-A2限制性复合多表位基因的原核表达载体,表达纯化,并观察其免疫原性。方法:分别合成HCV HLA-A2限制性多表位基因、人泛素基因,串联后得到融合基因Ub-Mep,克隆入原核表达质粒pRSET-A,转化E.coliBL21,IPTG诱导融合蛋白表达,薄层扫描分析表达蛋白组成;可溶性分析后用Ni2+-NTA凝胶亲和层析柱纯化、透析并浓缩融合蛋白;Western blot分析纯化蛋白的特异性和抗原性;免疫小鼠分析其免疫原性。结果:成功构建复合多表位抗原基因的原核表达质粒pRSET-Ub-Mep,目的基因可高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在,Ni2+-NTA纯化可获得目的蛋白,纯化蛋白具有良好的抗原性和免疫原性。结论:成功构建HCV HLA-A2限制性复合多表位基因并进行原核表达,表达的多表位基因抗原具良好的免疫原性,为进一步的HCV A2限制性复合多表位诱导的细胞免疫应答研究奠定基础。

RT-nestedPCR和限制性酶切分析用于HV的检测和基因分型

为建立检测肾综合征出血热 (HFRS)患者血清中汉坦病毒 (HV)基因的RT nestedPCR方法 ,并进一步进行限制性酶切分型 ,设计并合成互补于HVS基因片段的引物 ,对 78例HFRS患者血清进行RT nestedPCR检测 ,并对PCR产物进行酶切分析。结果显示 ,阳性率分别为 76 % (≤ 7天 )、6 7% (8～ 14天 )、43% (15～2 1天 )和 2 9% (>2 1天 )。 48例检测阳性患者PCR产物酶切分型 ,47例为Ⅰ型 ,1例为Ⅱ型。提示RT nestedPCR用于早期HFRS患者的HV基因检测 ,具有直接、敏感、特异等优点 。

丙型肝炎病毒HLA-A2限制性复合多表位基因重组腺病毒的包装、筛选及鉴定

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)HLA-A2限制性复合多表位基因的重组转移质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep,转染HEK293细胞,包装重组腺病毒rAd-Ub-Mep。方法复合表位Ub-Mep基因克隆到pAdTrack-CMV穿梭质粒,得到重组的穿梭质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep,将穿梭质粒pAdtrack-CMV-Ub-Mep和腺病毒骨架质粒pAdEasy1共转染HEK293细胞,产生重组腺病毒rAd-Ub-Mep,通过检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达和PCR扩增目的基因的方法鉴定重组腺病毒,并测定重组腺病毒滴度。结果经酶切鉴定、PCR鉴定和荧光分析,均证实得到重组的腺病毒。测定病毒滴度为1.2×1011cfu/L。结论成功包装出重组腺病毒rAd-Ub-Mep,构建了HCV HLA-A2限制性多表位基因的重组腺病毒疫苗,为进一步研究HLA-A2限制性复合多表位基因诱导的细胞免疫应答奠定了基础。

丙型肝炎病毒核心区截短型基因真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

目的:建立截短的丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中瞬时表达。方法:应用多聚酶链反应(PCR),以HCV-H株全长cDNA序列为模板,扩增获得C区羧基端部分缺失的基因片段,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),并通过脂质体转染至CHO细胞。结果:构建了真核表达载体pcDNA3.1-C t,成功转染CHO细胞,间接免疫荧光和RT-PCR证实pcDNA3.1-C t在CHO细胞中表达截短型的C蛋白。结论:成功构建羧基端部分缺失的HCV C区基因的真核表达载体,瞬时转染CHO细胞,为进一步基因免疫和构建多表位卡介苗(BCG)活载体疫苗奠定基础。

IL-2/Fc融合基因真核表达载体的构建和表达

目的 :构建含人IL 2cDNA基因和免疫球蛋白Fc片段融合基因的真核表达载体pcDNA 3.1IL 2 /Fc ,并在真核细胞中表达 ,以期用于乙型肝炎病毒 (HBV)DNA疫苗的研究。 方法 :应用重叠延伸剪切技术 (SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段IL 2 /Fc,回收后克隆到中间 pGEM TEasyTA克隆载体 ,得到合适的酶切位点后 ,用双粘端连接法转克隆入真核表达载体pcDNA 3.1中 ,得到真核重组载体 pcDNA 3.1IL 2 /Fc。然后用脂质体法转染SP2 / 0细胞。 结果 :对重组载体进行限制性酶切鉴定及测序分析 ,证明连接正确 ;经ELISA检测证实 ,该重组载体能够在真核细胞中外分泌表达插入的外源性基因编码的融合蛋白。 结论 :成功构建了真核表达载体 pcDNA 3.1IL 2 /Fc ,并在SP2 / 0细胞中有效表达。

三种梅毒血清学检测方法的实验室评价

目的比较RPR,ELISA,TPHA三种血清学实验诊断方法在临床诊断梅毒中的应用。方法将42例一期梅毒、61例二期梅毒、24例潜伏期梅毒患者及健康人的血清分别用RPR,ELISA,TPHA三种方法进行检测,结果进行统计学处理。结果RPR,ELISA,TPHA三种方法针对梅毒患者血清的敏感度分别为85.8%,94.5%,96.9%;特异性分别为87.3%,98.0%,100.0%。其中一期梅毒RPR,ELISA,TPHA三种检测方法的检出率分别为73.8%,92.9%,95.2%;二期梅毒的检出率分别为96.7%,100.0%,100.0%;潜伏期梅毒的检出率分别为79.1%,83.3%,91.7%。应用统计学处理后发现,RPR与TPHA,ELISA的检出率比较均有显著差异,而ELISA,TPHA两种方法之间的检出率无显著差异。结论ELISA,TPHA 2种检测方法与RPR比较,具有较高的灵敏度和特异性,考虑到ELISA较TPHA方法的试剂成本便宜,且操作简便,为目前梅毒血清学检测的首选方法。

丙型肝炎疫苗研究的新理念、挑战与策略

丙型肝炎病毒（HCV）感染是引起慢性肝病的主要原因之一,严重危害人类健康,目前抗病毒治疗的标准方案为聚乙二醇干扰素α（PEG-IFN-α）联合利巴韦林,其有效率仅为50%70%,且疫苗研究进展缓慢,已成为严峻的公共卫生问题。近10多年来,对HCV感染发病机制、保护性免疫应答和病毒持续感染机制的认识取得了很大进展,中和抗体以及CD4＋和CD8＋T细胞在内的强烈的T细胞免疫应答已被证明与HCV的清除相关,这将是研制丙型肝炎疫苗的希望所在。当前HCV疫苗的研究主要集中在多肽疫苗、核酸疫苗、病毒载体疫苗、重组多表位疫苗、以抗原递呈细胞为载体的树突状细胞（DC）疫苗等,已有多种疫苗正在研制并进行进入临床试验前的测试。我们结合多年来对HCV的研究基础,通过与国内外同行交流,提出变＂单纯预防＂为＂防治结合,以诱导持续免疫应答和维持病毒抑制状态为基本目标＂的HCV疫苗研究新理念,发展以诱导细胞免疫为主的预防和治疗性疫苗,尤其是既能在体内有效激发HCV特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应,又能维持CD4＋记忆T细胞功能的治疗性细胞疫苗。本文综述关于HCV保护性免疫应答及持续感染的机制,HCV疫苗研究新理念,目前面临的挑战以及研究策略。

HCV NS3蛋白单克隆抗体的制备及其识别区域的分析

目的制备针对丙型肝炎病毒(HCV)非结构区NS3全长蛋白的单克隆抗体(MAb),并分析获得的单抗识别表位所在区域,为建立以NS3蛋白为靶位的抗HCV研究提供抗体工具。方法用原核表达的HCV非结构区NS3全长蛋白作为免疫原,采用小鼠腹股沟皮下NC膜包埋法免疫小鼠,按常规杂交瘤细胞的制备方法,经细胞融合、克隆化制备抗NS3蛋白的MAb。用间接免疫荧光法和Westernblot鉴定其特异性。分别构建NS3丝氨酸蛋白酶(NS3蛋白的N末端13)编码基因的真核表达质粒pcDNA3.1()ns3p、NS3解旋酶(NS3蛋白的C末端23)编码基因的真核表达质粒pcDNA3.1()ns3h,将其瞬时转染COS7细胞后,以获得的单克隆抗体作为一抗,通过免疫荧光分析获得单抗识别表位所在的区域。结果获得了2株抗NS3蛋白的单克隆抗体,这2株MAbs均特异识别NS3蛋白,并确定了它们的结合区域。结论获得了针对NS3蛋白的单克隆抗体,并对其单抗识别表位所在的区域进行了分析,为下一步进行以NS3蛋白为靶位的抗HCV研究奠定了良好的基础。

乙肝病毒前S1基因与截短C基因穿梭表达载体构建

目的构建HBV前S1基因和截短C基因分泌型大肠杆菌和分枝杆菌穿梭质粒。方法以含HBV基因组质粒pCP10序列为模板,PCR扩增前S1基因和C基因截短片段,依次克隆至分泌型穿梭表达载体pDE22,电穿孔转化法将重组质粒导入耻垢分枝杆菌,经潮霉素抗性筛选及PCR鉴定,阳性克隆热休克诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析。结果扩增到了预期长度的2个目的基因,构建了分泌型穿梭载体,SDS-PAGE分析可见相对分子质量约23000蛋白表达条带。结论已成功构建耻垢分枝杆菌分泌表达前S1基因和截短C基因的穿梭载体,为研究含前S基因和截短C基因的重组BCG疫苗奠定了基础。