比较人不同细胞来源诱导多能干细胞与胚胎干细胞拟胚体的分化培养过程

背景:通过小分子化合物、质粒转染等方法可成功诱导出无病毒载体整合的诱导多能干细胞。与胚胎干细胞相似,诱导多能干细胞可向造血祖细胞进行自由分化,但外源性因子的转入及不同来源人体细胞是否对诱导多能干细胞的分化及诱导造血祖细胞产生影响,目前尚未清楚。目的:比较人不同细胞来源诱导多能干细胞和胚胎干细胞拟胚体的基因表达差异,为诱导多能干细胞的临床转化进行探索。方法:分别选用羊水细胞及尿细胞来源诱导多能干细胞和人胚胎干细胞进行诱导分化。收集分化不同时间点的拟胚体,检测多能性基因Oct4、Sox2、Nanog以及内胚层标记基因GATA4、中胚层标记基因MSX1、外胚层标记基因PAX6、造血干细胞标记基因CD34和CD43的表达。结果与结论:①羊水细胞来源诱导多能干细胞拟胚体在培养第8天检测不到Oct4、Sox2、Nanog表达,尿细胞来源诱导多能干细胞和胚胎干细胞拟胚体可维持表达至第16天;②羊水细胞来源诱导多能干细胞拟胚体中GATA4、MSX1、PAX6表达量峰值出现在第4天,持续表达到第8-12天,而其他2种细胞拟胚体中GATA4、MSX1、PAX6表达量峰值出现在第4-8天,并且可持续表达至第12-16天;三胚层标记基因在尿细胞来源诱导多能干细胞拟胚体中的表达量明显高于其他2种细胞拟胚体;③在羊水细胞、尿细胞来源诱导多能干细胞拟胚体中造血干细胞比率在第12天达峰值,而胚胎干细胞拟胚体中造血干细胞比率在第4天达峰值,尿细胞来源诱导多能干细胞拟胚体中造血干细胞比率高于其他2种细胞拟胚体;④人不同细胞来源诱导多能干细胞及胚胎干细胞拟胚体分化培养过程中均具有全能性及三胚层分化能力但各具特点。尿细胞来源诱导多能干细胞或许更适合替代胚胎干细胞成为体外研究造血细胞分化的模型。

MiR-155对小儿急性淋巴细胞白血病的耐药机制研究

目的:探讨miR-155通过调节Wnt/β-Catenin信号通路促进小儿急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)对阿糖胞苷(Ara-C)化疗耐药的机制。方法:采用PCR检测B-ALL患儿骨髓组织与细胞系中miR-155表达情况;用REH细胞系构建化疗抵抗株REH/Ara-C,使用miR-155抑制剂转染REH/Ara-C细胞,EdU检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率,CCK-8法与克隆形成实验分析细胞耐药性,Western blot测定Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白的表达;用miR-155抑制剂与Wnt激活剂agonist转染REH/Ara-C细胞,测定其对细胞增殖、凋亡与耐药性的影响。结果:与正常组织及细胞相比,B-ALL骨髓组织/细胞系中miR-155表达水平升高(P<0.05);与药物敏感B-ALL组织/细胞系相比,耐药B-ALL组织与细胞系中miR-155表达水平升高(P<0.05);抑制miR-155表达降低了REH/Ara-C细胞增殖能力(P<0.05),促进了凋亡(P<0.05),增强了Ara-C的细胞毒性(P<0.05),同时抑制了Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白与耐药基因MDR1的表达(P<0.05),通过激活Wnt表达则可逆转上述现象(P<0.05)。结论:B-ALL患儿骨髓组织中miR-155表达上调,可以通过激活Wnt/β-Catenin信号通路促进B-ALL细胞增殖、抑制细胞凋亡,从而导致化疗耐药。