昆明犬胎儿成纤维细胞系的建立及生物学特性分析

本研究旨在探索和建立昆明犬胎儿成纤维细胞体外分离、培养的技术方法并观察其生物学特性。试验利用剖腹手术法获得发育30d的昆明犬胎儿12个,性别鉴定结果为7公5母。公、母胎儿体尺和体重分别为:体长1.90cm±0.14cm和2.00cm±0.05cm,体宽0.90cm±0.13cm和0.90cm±0.15cm;体重0.68g±0.17g和0.66g±0.06g,差异均不显著(P>0.05)。以昆明犬胎儿组织为材料,采用胶原酶消化法和细胞冷冻保存技术建立了昆明犬胎儿成纤维细胞系,并对所构建的细胞系进行生物学特性研究。结果表明,分离的胎儿成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态,生长曲线呈S型,倍增时间约为36h;冻存前和复苏后的存活率分别为96.1%和94.6%;染色体核型分析显示2n=78(XY),并在体外培养多代后仍能保持正常核型。本研究建立的昆明犬胎儿成纤维细胞系可在体外快速贴壁生长、增殖,进行稳定培养,这不仅使昆明犬遗传资源在细胞水平得以保存,且所获成纤维细胞能作为相关研究中所需细胞的来源。

妊娠合并糖尿病对产妇及其围生儿预后的影响分析

目的:探讨妊娠合并糖尿病对产妇及其围生儿预后的影响。方法:从2012年10月~2013年10月我院收治的妊娠合并糖尿病患者中随机选择65例患者作为观察组,选择同期我院收治的65例未患糖尿病的产妇作为对照组,对两组产妇及其围生儿发生并发症的情况进行对比分析。结果:两组产妇及其围生儿发生并发症的几率、进行剖宫产的几率及发生难产的几率相比较差异显著(P<0.05),有统计学意义。结论:妊娠合并糖尿病患者及其围生儿发生并发症的几率较高,其难产率和剖宫产率也较高,医务人员要提高对妊娠合并糖尿病患者的重视程度,积极改善此病患者的预后。

盆底电刺激联合阴道哑铃锻炼对产后尿失禁患者盆底肌力的影响

目的探讨盆底电刺激联合阴道哑铃锻炼对产后尿失禁患者盆底肌力的影响,为临床治疗提供理论依据。方法 2015年1月至2017年1月我院产后6周120例尿失禁患者为试验对象,随机分为观察组及对照组,各60例。对照组行盆底肌训练,观察组产后6周行盆底电刺激联合阴道哑铃锻炼治疗。治疗前、治疗后3个月、6个月采用法国PHENIX盆底肌肉康复治疗仪测量盆底肌肉最大肌电压Dmax平均值和盆底肌持续收缩60s的平均肌电压H60s值。结果两组患者治疗前Dmax平均值比较差异均无统计学意义(P>0.05),治疗3个月、6个月后差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗前H60s比较差异均无统计学意义(P>0.05),治疗3个月、6个月后差异均有统计学意义(P<0.05)。结论盆底电刺激联合阴道哑铃锻炼对患者的盆底肌力有明显的改善作用。

子宫腔填塞术在剖宫产术中胎盘附着面大出血中的应用价值

目的探讨子宫腔填塞术在剖宫产术中胎盘附着面大出血中的应用价值。方法采用回顾性方法分析,选取我院自2013年5月—2014年5月以来收治的24例剖宫产中胎盘附着面大出血患者的临床资料,所有患者均给予子宫腔填塞术治疗,分析治疗效果。并随访6周,分析随访结果。结果经过治疗,24例患者中20例患者保守治疗成功保留子宫,其临床治疗成功率达到83.33%。其中3例患者出现活动性出血,实施子宫切除成功治疗,所有患者均未出现感染症状。结论在剖宫产后胎盘附着面大出血患者中实施子宫腔填塞术,可有效提高患者子宫保留率,保障患者生育能力,值得临床大力推广应用。

急性粘连性小肠梗阻手术时机的选择(附40例分析)

目的 探讨急性粘连性小肠梗阻的手术治疗时机及手术指征。方法 分析总结 4 0例急性粘连性小肠梗阻的临床表现 ,采取的手术方式和手术效果。结果 该组 4 0例均为完全性梗阻 ,行粘连松解者 2 2例 ;切断纤维条索压迫带者 8例 ;肠坏死部分切除吻合者 8例 ;小肠广泛坏死切除后剩 90～ 10 0cm者 2例。关腹前均用大量温盐水灌洗腹腔 ,并放置乳胶管腹腔引流 1,2根。结论 单纯性和绞窄性的鉴别是非常必要的 ,单纯性梗阻 ,可先行保守治疗 ,绞窄性小肠梗阻 ,应尽早手术治疗。早期诊断及手术治疗是改善绞窄性小肠梗阻预后、降低并发症及死亡率的关键。

新生昆明犬成纤维细胞系的建立及生物学特性分析

本研究旨在探索和建立新生昆明犬成纤维细胞体外培养的技术方法并观察其生物学特性。试验以新生昆明犬耳部皮肤组织为材料,采用胶原酶消化法和细胞冷冻保存技术建立了昆明犬成纤维细胞系,并对所构建的细胞系进行生物学特性研究。结果表明:新生昆明犬成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态;冻存前和复苏后细胞的存活率分别为93.3%和90.8%;生长曲线呈"S"形,倍增时间约为32 h;对所制备的染色体核型分析显示2n=78(XX),细胞染色体中二倍体占主体,约为90%。该细胞系的建立,不仅使昆明犬这一国家种质资源在细胞水平得以保存,而且也为今后开展功勋犬的体细胞克隆等研究奠定了基础。

胃肠道间质瘤35例临床病理分析

目的探讨胃肠道间质瘤 (GISTs)的诊断及免疫组织化学在诊断中的价值以及治疗原则。方法对 1990～ 2 0 0 1年经手术治疗的 35例GISTs的临床病理资料进行分析总结 ,对GISTs进行光镜观察 ,用S P免疫组织化学方法检测 6种抗原标记物在肿瘤中的表达情况。结果35例GISTs占同期消化系统间叶组织源性肿瘤的 74 .4 %(35 / 4 7) ;其中梭形细胞为主者占 2 7例 ,上皮样细胞为主者 4例 ,两种细胞混合者 4例。免疫组化学显示肿瘤组织中抗原标记物表达阳性率Vimentin为 10 0 %、CD117为 88.5 %、CD3 4 74 .1%。结论GISTs是消化道最常见的间叶组织源性肿瘤 ,形态学与平滑肌源性肿瘤和神经源性肿瘤难于区别。CD117和CD3 4 等免疫标记物的配合使用可做出正确判断 ;肿瘤大小、核分裂相、细胞异型性 ,是诊断良性。

犬体型大小相关基因的研究进展

犬作为人类最早驯化的家养动物,在人类发展史和现代生活中扮演着非常重要的角色,如伴侣、看护、导盲、军警用犬等。人工选择过程使得家犬产生了极大的表型多样性,其中体型性状是犬最显著的表型性状之一,属高遗传力性状。本文综述了犬体型性状相关基因IGF1、IGF1R、GHR1、GHR2、SMAD2、STC2、HMGA2、IGSF1、ACSL4及IRS4的研究进展,为未来工作犬体型遗传改良育种提供重要的靶点和依据,为进一步阐明人类及其他家养动物在体型上的遗传变异提供参考。

昆明犬IGF-1基因CDS区克隆、生物信息学分析及组织表达研究

试验旨在系统研究昆明犬胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)基因的结构和功能,揭示该基因的组织表达规律,为探讨工作犬体型及生长发育性状提供基本数据。以昆明犬为试验材料,运用分子克隆技术扩增IGF-1基因CDS区,应用生物信息学方法进行序列同源性比对并构建系统进化树;获得对应的氨基酸序列并分析蛋白理化特性及蛋白亚细胞结构、亲疏水性和磷酸化位点,利用SOPMA和SWISS-MODEL软件预测蛋白二级结构并构建蛋白质三级结构模型;同时利用实时荧光定量方法检测该基因在昆明犬各组织的表达情况。结果显示,昆明犬IGF-1基因CDS区长462 bp,编码153个氨基酸,其核苷酸序列与家犬的同源性较高(100%),与小鼠和鸡的同源性较低(82.6%和81.2%)。IGF-1蛋白分子质量和理论等电点分别为16.97 ku和9.36,属亲水性分泌型蛋白,无跨膜结构,存在信号肽区域(第1-48位氨基酸);亚细胞定位分析表明,IGF-1蛋白主要分布于细胞核(56.5%)及线粒体(17.4%)中;磷酸化位点分析发现,IGF-1蛋白存在15个磷酸化位点;该蛋白的二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。组织表达显示,IGF-1基因在昆明犬不同组织中均有表达,尤其在脾脏、肝脏及肾脏中呈现高表达。本试验结果为今后深入研究IGF-1基因功能提供了理论参考,并为深入探讨IGF-1基因对昆明犬生长发育性状研究提供一定的基础资料。

流式细胞仪分离工作犬XY精子的研究

[目的]探索适用于犬性别控制的流式细胞仪分离精子的方法。[方法]采集昆明犬和德国牧羊犬的精液,采用不同浓度(6、8、10、12μl/ml)的Hoechst 33342对精液进行染色,探讨不同浓度的荧光染料Hoechst 33342及公犬个体对精子分离效果的影响。[结果]当Hoechst 33342浓度分别为6、8、10μl/ml时,X和Y精子的DNA差异不能被分辨成双峰,只有当Hoechst 33342为12μl/ml时,X/Y双峰能有效并稳定地分离。不同公犬的鲜精死精率与X/Y精子分离速度呈明显负相关性,而分离准确率则与鲜精死精率无明显相关性。[结论]当Hoechst 33342浓度为12μl/ml时,流式细胞仪能将警犬X、Y精子成功分离。选择适宜的种公犬对提高精子的分离效率和分离精液的品质都有重要意义。

昆明犬IGF2基因克隆、生物信息学分析及其时空表达研究

【目的】克隆昆明犬胰岛素样生长因子2(IGF2)基因并研究其序列特征及时空表达规律,为工作犬体型及生长发育相关研究提供基础资料。【方法】采用PCR法扩增昆明犬IGF2基因CDS区,运用生物信息学分析预测昆明犬IGF2蛋白的结构与功能;利用实时荧光定量PCR技术检测IGF2基因在2.5月龄昆明犬心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及大腿内侧肌肉和不同年龄段肝脏中的表达情况。【结果】昆明犬IGF2基因CDS区全长717 bp,编码238个氨基酸;系统进化树分析显示,昆明犬IGF2基因与赤狐的遗传距离最近,与鸡的遗传距离最远。生物信息学分析表明,IGF2蛋白分子质量为26.46 ku,理论等电点为9.61,无信号肽和跨膜结构,属于亲水性非分泌蛋白;主要分布于细胞核(47.8%)和线粒体(17.4%),存在23个磷酸化位点;该蛋白的二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,三级结构与二级结构预测结果相符。组织表达谱分析显示,IGF2基因在2.5月龄昆明犬肝脏中相对表达量最高,且极显著高于肾脏、肺脏及肌肉组织(P<0.01);仔犬期(2.5月龄)肝脏中的IGF2基因的表达量极显著高于幼犬期(6月龄)、青年期(1岁)及成年期(1.7和2.5岁)(P<0.01)。【结论】本研究成功克隆昆明犬IGF2基因,并发现IGF2在多个组织广泛表达,在肝脏中的表达量最高,可为深入探讨昆明犬IGF2基因在生长发育中的调控机理提供参考。

腰麻硬膜外联合麻醉在子宫切除术中的应用

目的评价腰麻硬膜外联合麻醉(CSEA)在子宫切除术中的应用效果。方法选择70例子宫肌瘤行子宫切除术患者,随机分为两组,每组各35例,Ⅰ组为单纯硬膜外麻醉组,Ⅱ组为CSEA组。术中监测血压(BP)、心率(HR),观察患者术中不良反应情况及术者对麻醉的满意程度。结果两组患者术中生命体征平稳,但Ⅰ组牵拉时心率减慢较Ⅱ组明显,Ⅱ组较Ⅰ组BP下降明显。两组患者术中不良反应发生率及术者对麻醉的满意度有明显差异。结论CSEA应用于子宫切除术,麻醉操作简单,效果确切可靠。

昆明犬IGF1R基因克隆及组织表达分析

【目的】旨在阐明昆明犬IGF1R基因序列特征及组织表达模式,为深入探究IGF1R基因在昆明犬生长发育中的调控机制及分子遗传育种相关研究奠定基础。【方法】基于分子克隆技术获得昆明犬IGF1R基因编码区序列,利用生物信息学手段进行序列同源性比对、系统进化树分析,对相应的氨基酸序列进行蛋白理化特性、蛋白结构特征分析,并构建蛋白质三级结构模型。同时利用qRT-PCR方法检测该基因在昆明犬各组织的表达情况。【结果】昆明犬IGF1R基因CDS区长4104 bp,编码1367个氨基酸,其核苷酸序列与家犬(100%)与赤狐(99.3%)的同源性较高,与鸡的同源性较低(78.8%)。IGF1R蛋白分子质量和理论等电点分别为154890.07 ku和5.58,包含3个纤连蛋白型结构域,1个半胱氨酸富集区和1个酪氨酸激酶结构域,属亲水性跨膜蛋白;亚细胞定位分析表明,IGF1R蛋白均匀地分布于内质网、高尔基体及质膜上,比例均为33.3%;磷酸化位点分析发现,IGF1R蛋白存在123个磷酸化位点;该蛋白的二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。组织表达显示,IGF1R基因在昆明犬不同组织中均有表达,尤其在肺脏、心脏及肾脏中呈现高表达。【结论】IGF1R基因在生物进化过程中具有较强的保守性。昆明犬IGF1R蛋白具有IGF受体蛋白特征性结构域,属亲水性跨膜蛋白。IGF1R基因在昆明犬6个组织中均有表达,其中心脏、肺脏及肾脏组织中的表达量较高。

流式细胞仪精子分离技术在工作犬繁育中的应用展望

动物的性别控制是指通过人为作用使雌性动物按照人们的意愿繁殖出所需性别后代的一门生物技术，该技术具有巨大的利用价值。在人类领域，性别控制最重要的意义在于帮助具有性连锁遗传病的患者选择后代性别，避免遗传病的发生；

静脉注射依托咪酯过敏反应1例

依托咪酯又名乙咪酯，为咪唑类衍生物，系催眠性静脉麻醉药，临床麻醉中应用普遍。我院近期遇1例少见的依托咪酯过敏反应，现报道如下。

右美托咪定复合罗哌卡因腹横肌平面阻滞的应用进展

腹横肌平面阻滞(transversus abdominis plane block,TAPB)是一种新的区域阻滞麻醉技术,2001年Rafi[1]首次报道了TAPB,因其操作简单、镇痛效果好、围术期阿片类药物消耗量减少、不良反应少等优点被广泛用于腹部手术[2,3]。研究表明,TAPB用于下腹部手术是安全而有效的镇痛技术[4]。

体细胞克隆技术在乌金猪遗传资源保护上的应用

旨在通过猪体细胞克隆技术,生产乌金猪火毛系,并分析生长发育能力及繁殖性能,为该技术在地方优良猪种保种上的应用提供理论依据。本研究采集了符合乌金猪种质特征的3头公猪和12头母猪的耳组织样品。公猪年龄分别为3、6、11月龄,母猪年龄差距较大,最小的2月龄,最大的10岁。其中3头母猪和1头3月龄公猪已被去势,10岁母猪已无繁殖能力。结果,成功建立了15头乌金猪的耳组织成纤维细胞系,分别选择1头3月龄乌金猪(♂)和10岁乌金猪(♀)的成纤维细胞进行体细胞核移植,经胚胎移植入16头代孕母猪,共获得25头克隆猪,克隆猪生长发育正常,性成熟后进行自然交配共获得39头F1代活仔。本研究通过体细胞克隆技术成功克隆了乌金猪,具备正常的生长发育性能和繁殖性能,为地方猪种的保护研究提供了新的途径。

低雌激素闭经患者激素替代治疗对其骨密度的影响

目的探讨低雌激素闭经患者激素替代治疗（HRT）对其骨密度的影响。方法选取2012年4月至2014年5月在我院治疗的原发性低雌激素闭经患者57例,观察患者HRT前后骨代谢以及骨密度情况。结果患者L1~4骨密度和股骨颈骨密度分别与血清雌二醇（E2）水平呈正相关（r=0.844、0.916,P〈0.05）;治疗后血清降钙素（CT）和空腹尿Ca/Cr分别为（40.11±12.05）pg/L和（0.09±0.03）,与治疗前比较差异均有统计学意义（P〈0.05）,HRT治疗可使患者血清CT升高,空腹尿Ca/Cr降低;患者治疗后L1~4骨密度和股骨颈骨密度分别为（0.93±0.10）g/cm2和（0.83±0.09）g/cm2,均较治疗前有所提高,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论激素替代治疗可增加低雌激素闭经患者骨密度,在早期防治骨质疏松有重要意义。

臂丛神经阻滞致气胸3例

我院每年实施臂丛阻滞麻醉约300例,很少有并发气胸。2012-06至2012-09,我院医师为改善麻醉效果,减少局部麻醉药用量,尝试低位肌间沟及C7（第七颈椎）横突法臂丛阻滞共25例,致3例出现气胸。

犬人工授精不同输精部位对母犬繁殖性能的影响

以公安部昆明警犬基地的警用种犬作为研究对象,应用自主设计和组装的犬用内窥镜输精枪人工授精系统,进行不同输精部位人工授精试验,并从输精受孕率、精液利用率、窝均产仔数等方面进行比较分析。结果显示:子宫角深部输精的母犬受孕率为65.0%,显著高于子宫颈部输精的52.5%和阴道内输精的30.0%,低于对照组(自然交配)的77.5%。表明采用犬用内窥镜输精枪人工授精系统从子宫角深部输精效果最佳,能使优良犬种的冷冻精液得到广泛应用,并能显著提升优良犬种的繁殖率,具有较高的推广和应用价值。