一株耐盐酵母的分离、鉴定及其生物学特性

以洋河酒厂的酒曲为材料,首先利用盐浓度梯度富集培养和氯化三苯四唑(TTC)染色法初筛获得18株酵母菌株,再通过杜氏小管产气及摇瓶发酵实验,从18株初筛菌株中分离得到1株在1. 4 mol/L NaCl浓度下生长性能较好的菌株,命名为W58。经形态观察和26S rDNA基因序列比对分析,该酵母菌株被鉴定为1株库德里阿兹威氏毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)。对菌株的生长性能及耐受性进行研究发现:该菌最适生长温度为30℃,最适pH为6. 0,在高盐条件下(1. 4 mol/L NaCl),其胞内海藻糖的积累显著增加,比对照菌株高28. 6%。此外,菌株W58在高盐条件下,其ATPase活性比对照菌显著提高(约3倍)。综上所述,菌株W58在高盐条件下能通过胞内积累海藻糖以及维持一定的ATPase活性抵抗外界环境压力。

酿酒酵母ICT1基因敲除对其耐盐性的影响

该研究以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)BY4741为出发菌,采用同源重组技术构建一株ICT1基因缺失菌株,分析ICT1基因敲除对酿酒酵母耐盐性的影响。分别采用梯度点滴实验、碘化丙啶(PI)荧光染色法、实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-QPCR)等技术分析ICT1基因在酿酒酵母耐盐机制中的作用。结果表明,成功获得ICT1基因缺失菌株BY4741-ΔICT1。与出发菌BY4741相比,菌株BY4741-ΔICT1的盐耐受性减弱。经1.0 mol/L Na Cl处理后,麦角固醇含量减少66.9%,细胞膜受损,细胞膜上的转运蛋白基因NHA1和ENA1的转录水平分别下降65.6%和90.5%。说明ICT1基因的敲除使菌株BY4741-ΔICT1的盐耐受性下降可能与胞内麦角固醇合成减少、膜受损、离子转运蛋白基因的转录水平下降有关。