水稻内生细菌新资源分离培养方案探究

为了探究适用于分离水稻内生细菌的方案以获得水稻内细菌新资源,本研究基于培养组的方法,以水稻3个品种种子及幼苗为材料,从材料表面消毒、菌悬液的制备和培养基配比3个方面进行探究,并对分离获得代表性纯培养物的16S rRNA基因进行测序鉴定。结果表明,75%乙醇和含2%有效氯的次氯酸钠溶液组合对种子先后处理90 s和12 min,对植株组织先后处理90 s和5 min即可获得良好的消毒效果。水稻种子内生细菌量为10^(5)-10^(6) CFU/g,其中90%-95%分布于颖壳内,不同品种或同一品种的不同生境来源的种子之间内生细菌群落组成有明显差异;在制备种子菌悬液时需注意控制研磨程度以获得种类丰富的菌落,剥去颖壳有利于分离培养糙米中的内生菌。对于根、茎、叶内生细菌的分离,需要根据材料不同控制接种菌悬液的浓度以获得其中微量的内生细菌;在培养基中添加组织浸提液和延长培养时间至两周以上,可促进根、茎、叶内生细菌的分离培养。采用调整后的方案,本研究对3个水稻品种的种子和它们的植株根、茎、叶内生细菌进行分离培养,分别完成了71、14、10和2个代表性纯培养物的16S rRNA基因测序鉴定,其中有8株与已知类群模式菌株同源序列相似度在97.22%-98.74%,新种获得率为8.25%。研究结果为分离培养水稻内生细菌新资源提供了方法参考。

番茄根际土尚未培养细菌的分离培养方法探究

为探究获得土壤中尚未培养细菌资源的方法,以MS无机盐为基础养分,设置1/100×TSB、1/50×R2A和土壤浸提液(SE)3种低有机营养类型,凝固剂用琼脂(A)或结冷胶(G),得到一组培养基MS+TSG、MS+TSA、MS+R2A和MS+SE,以及在此基础上添加1.5 g/L丙酮酸钠作为抗氧化剂的第二组培养基。用上述8种培养基分离培养健康番茄根际土壤中的细菌,并对各种培养基平板上代表性菌落进行16S rRNA基因分析。结果表明,在MS无机盐和低有机营养组合的培养基平板上,在28℃下培养28 d后可检测到菌落数达1×10^(7)CFU/g土,4种培养基平板上检测到的菌落数量由多到少顺序为MS+SE>MS+TSG>MS+R2A>MS+TSA;在相同的低有机营养条件下,用结冷胶作为凝固剂可获得更多菌落,添加丙酮酸钠为抗氧化剂会显著降低菌落的多样性。鉴定的84个代表性菌落属于34个属的52个种,其中7个(占检测菌株数的8.33%)为可能新种,不同培养基上种丰富度表现为MS+TSA>MS+R2A>MS+TSG>MS+SE。结果说明,采用低有机营养的MS无机盐培养基有利于分离获得土壤中的一些尚未培养细菌。

冷诱导基因转录因子CBF1的组成型表达对植物的抗寒性及生长发育的影响

通过农杆菌介导法将玉米泛素启动子(Pubi)调控的CBF1基因以及CaMV35启动子调控的GUS基因一起转化烟草,研究了冷诱导基因的转录因子CBF1(CRT/DRE binding factor 1)对植物抗寒性及生长发育的影响。结果表明:CBF1的组成型表达增强了冷敏感植物的抗寒性;在表型上使植株矮壮,叶片着生密集,叶色深绿,叶厚度增加;促进侧枝生长,延长营养生长期,推迟花期;对植株的结实性无明显影响。植株抗寒能力以及表型变化程度与CBF1的表达强度相关。因此,利用CBF1基因进行植物遗传改良时应根据物种的应用特点采用合适的表达调控策略。

草酸对重寄生真菌盾壳霉分生孢子萌发和菌丝生长的影响

本文研究了草酸对核盘菌的重寄生真菌盾壳霉 ( Coniothyrium minitans)分生孢子萌发和菌丝生长的影响。结果表明 :草酸对盾壳霉分生孢子萌发没有明显促进作用 ,在酸碱性非缓冲基质 (水琼脂 )和酸碱性缓冲基质中 ,抑制盾壳霉分生孢子萌发的最低浓度分别为 1 5 0和 70 0 μg/m L。在马铃薯葡萄糖琼脂培养基中 ,当草酸浓度为 1 0 0～ 2 0 0 0 μg/m L时 ,盾壳霉菌丝能够生长 ,且浓度为 3 0 0～ 5 0 0μg/m L的草酸对盾壳霉的菌丝生长具有明显的促进作用。在以草酸为唯一碳源的合成培养基中 ,在酸碱性非缓冲的条件下 ,当草酸浓度为 1 0 0～ 2 0 0 0 μg/m L时 ,盾壳霉菌丝能够生长 ,且草酸浓度为 5 0 0 μg/m L时对盾壳霉菌丝生长具有促进作用 ,而当草酸浓度为 2 5 0 0μg/m L时 ,盾壳霉菌丝则停止生长。在酸碱性缓冲的合成基质中 ,草酸浓度为 1 0 0～ 40 0 0 μg/m L时 ,盾壳霉菌丝能够生长 ,且草酸浓度为 1 5 0 0～ 2 5 0 0 μg/m L时对盾壳霉菌丝生长具有促进作用。在含草酸钙的混浊培养基 (以草酸为唯一碳源 )上 ,盾壳霉菌落区域形成了透明圈。上述结果说明盾壳霉能忍耐一定浓度的草酸而进行分生孢子萌发及菌丝生长 ,且这种真菌可能对草酸分子具有分解作用。

中华结缕草(Zoysia sinica Hance)组织培养和再生植株研究

以中华结缕草(ZoysiasinicaHance)成熟种子为外植体在附加2.5mg/L2,4-D、0.25mg/L6-BA和1～2mg/LVB1的改良MS培养基(MSm)上愈伤组织的诱导率最高为43.0%。愈伤组织的最佳继代培养基为MSm附加0.1mg/L6-BA和2.0mg/L2,4-D。在无生长调节物质的MS培养基(MS0)上,外观呈白色到淡黄色、含有密实颗粒的愈伤组织再生率为30%～60%。

黄色蠕形霉对棉花上几种病原菌拮抗作用的研究

就黄色蠕形霉对棉花上几种病原菌的拮抗作用作了初步研究，分析了葡萄糖对黄色蠕形霉抗生物质产量及活性的影响。结果表明：黄色蠕形霉对棉花大丽轮枝菌、刺盘孢菌的菌丝生长及分生孢子萌发和对棉立枯丝核菌、棉枯萎尖孢镰刀菌的菌丝生长均有明显的抑制作用，但对棉枯萎尖孢镰刀菌分生孢子萌发没有抑制作用。该菌抗生物质在葡萄糖浓度为８％时产量最高，在葡萄糖浓度０．５％～４％范围内抗菌活性最高。

盾壳霉在油菜花瓣上萌发的影响因子分析

在离体条件下分析了油菜花瓣上影响核盘菌寄生菌-盾壳霉（Coniothyriumminitans）萌发的因子。结果表明，花瓣自身物质对盾壳毒无影响，花瓣微生物区系中的细菌不利于其萌发。链霉素可以抑制花瓣上细菌增殖，促进盾壳霉萌发。100－300μg／L链霉素对盾壳霉萌发无影响，30～1000μg／L链霉素溶液配制孢子悬浮液可以促进其在油菜花瓣上萌发。

濒危药用植物新疆雪莲资源的研究进展

新疆雪莲分布于我国西部高寒山地的雪线附近,为我国特有的名贵中药材,具有多种化学成分和广泛的药理活性.本文概述了新疆雪莲的生物学特征和民间用途,总结了新疆雪莲的开发利用和资源现状,从原地保护和人工栽培、组织培养与细胞工程、遗传转化三方面阐述了雪莲资源的保护研究进展.根据已有的研究成果,本文提出了未来的研究方向,以期为今后新疆雪莲资源的合理利用与保护研究提供参考.

盐芥ThDREB2B基因克隆及功能分析

利用RACE技术从抗逆模式植物盐芥中克隆获得了1个DREB(dehydration responsive element binding)类转录因子基因,命名为ThDREB2B(NCBI登录号EF653377)。结果表明:(1)ThDREB2B基因cDNA全长1 486bp,包含1个954bp的开放阅读框,编码316个氨基酸;推测编码的蛋白质分子量约36.0kD,等电点为4.81,第76～135位氨基酸构成1个AP2结构域。(2)系统进化分析表明,ThDREB2B属于DREB亚家族的A-2亚组,与拟南芥AtDREB2B基因遗传距离最近。(3)半定量RT-PCR检测显示,ThDREB2B基因在正常生长条件下低丰度表达,在低温、干旱或高盐胁迫下上调表达。(4)酵母单杂交结果表明,ThDREB2B蛋白能与DRE元件特异结合,但转录激活能力弱。推测ThDREB2B蛋白可能需要翻译后修饰以获得转录激活功能。

盐芥(Thellungiella halophila)DREB1E基因的克隆

以盐生植物盐芥为材料,依据拟南芥中DREB1E的序列信息设计引物,扩增出盐芥中DREB1E的部分序列,然后使用SMARTTM RACE等方法,从盐芥中克隆到全长的DREB1E cDNA序列。将这一基因命名为ThDREB1E。同源性分析结果表明,ThDREB1E与拟南芥DREB1E cDNA编码区的同源性为83.78%;根据基因核酸序列推测的氨基酸序列同源性为81.18%。

中华结缕草成熟胚再生影响因素研究

以中华结缕草(Zoysia sinica Hance)成熟胚为外植体,研究了培养基、水解酪蛋白(CH)、水解乳蛋白(LH)、植物生长调节剂等对愈伤组织诱导及其生长的影响,以及不同继代周期对愈伤组织分化及植株再生的影响。结果表明:2,4-D是影响愈伤组织诱导的关键因素;MS无机成分及有机成分含量对愈伤组织生长影响不显著,附加CH 500mg/L利于愈伤组织生长;继代培养次数直接影响胚性愈伤组织的诱导及植株再生;不经继代培养转入分化培养基的愈伤组织植株再生率最高达34.2%,随继代次数的增加,再生率明显下降,继代培养3次的愈伤组织再生率低于10%。

综合设计性实验与学生综合素质培养

开展综合设计性实验对培养学生的实践能力具有重要作用.本文在实践的基础上就如何开展综合设计性实验以获得最佳教学效果所涉及的几个问题进行了讨论.实践证明,在专业课实验教学中开展综合设计性实验能够更好地培养学生的综合素质.

水稻种子相关细菌的系统发育分析与促生能力评价

对15株分离自水稻冀粳14号(90-3)的种子表面及其内生细菌进行了多功能筛选评价和16S rRNA系统发育分析。结果表明,供试菌株都能够溶解无机磷,不能分解有机磷;筛选获得6株具有明显分泌植物生长素吲哚-3-乙酸(IAA)能力的菌株;12株菌株明显产生铁载体,占所测菌株总数的80%,其中7株铁载体产量达到中等水平,通过16S rRNA基因系统发育及聚类分析,供试菌株聚为8个类群,分别属于Rhizobium、Citrobacter、Xanthomonas、Psedomonas、Bacillus、Pantoea、Microbacterium和Moraxella属。

血浆纤维蛋白黏合剂的制备及其在重组肉中应用

目的:充分利用肉品加工中所产生的碎肉和屠宰中产生的大量血液制备纤维蛋白黏合剂。方法:采用纤维蛋白原冷沉淀法从肉用动物血浆制备了黏合剂,之后将其用于碎肉的加工中,制备重组肉制品及优化制备过程及参数,而且进一步对重组肉产品的粘合效果做了对比实验。结果:建立了高效的重组肉制备工艺,利用肉用动物血浆制备了纤维蛋白黏合剂,之后用其制备重组肉,并优化了制备过程及参数,制备工艺简单、周期短、成本低、自制纤维蛋白黏合剂所生产的重组肉性状好于其它黏合剂。结论:此方法操作简单,成本低廉,所制作的重组肉粘合效果好、口感好、绿色环保。

设计性实验与学生综合素质培养的有效对接

设计性实验是学生在教师的指导下独立完成实验设计并实现自己想法的实验,在培养学生的综合素质方面发挥了重要作用。根据微生物实验的特点,在设计性实验的开设程序、选题与内容设计、组织管理、实验总结汇报和实验论文撰写等方面进行了探索与实践。

镉胁迫对盐芥根木栓质代谢的影响

以盐芥为试验材料,研究不同浓度镉胁迫下盐芥根木栓质组分及含量、木栓质代谢相关基因表达变化,旨在分析盐芥根木栓质对不同浓度镉胁迫的响应。结果表明,2种浓度(50μmol/L、100μmol/L)镉胁迫下,盐芥根木栓质优势组分未发生变化,检测出的4种类型的木栓质,其含量从高到低依次为ω-羟基脂肪酸、未被取代脂肪酸、α,ω-二羧酸、脂肪醇; 4种类型的木栓质包括21种单体,50μmol/L镉胁迫下,木栓质总量升高,而100μmol/L镉胁迫下,木栓质总量未发生明显变化;对木栓质代谢相关的16个基因进行表达模式分析,50μmol/L镉胁迫下,CYP86B1、CYP86A7、FAR4、FAR5、KCR2、ABCG2、GPAT6、FACT、MYB107、CYP86A4、KCR20、ABCG6、ABCG20、GPAT5、ASFT共15个基因显著或极显著上调表达,100μmol/L镉胁迫下,CYP77A6、CYP86A7、FACT、CYP86A4、ABCG2、GPAT5、ASFT、MYB107共8个基因显著或极显著上调表达。

结缕草愈伤组织诱导的营养因素优化

试验以优化设计结缕草成熟胚愈伤组织诱导的营养因素为目的,采用L9(34)的正交设计,优化选择结缕草成熟胚性愈伤组织诱导的培养基类型、糖类型及浓度、酶水解酪蛋白浓度等营养因素。试验表明:①不同营养因素组合的各处理对出愈率和出愈时间的影响不具显著差异。②培养基类型和酶水解酪蛋白的含量对愈伤组织大小的影响具有显著的效应。③培养基类型、酶水解酪蛋白相对于糖浓度和糖类型对胚性愈伤组织的形成具有显著作用。试验结论:MS培养基、糖类型S+G、糖浓度40g/L、酶水解酪蛋白1g/L,为结缕草愈伤组织诱导的最佳营养因素组合。

新疆雪莲遗传转化中Basta筛选压的确定

[目的]研究新疆雪莲(Saussurea involucrate Kar.et Kir.)遗传转化中除草剂Basta的筛选压。[方法]用新疆雪莲愈伤组织或再生苗转接于含不同浓度Basta培养基上,观察其存活状况。[结果]浓度为2～12 mg/L的Basta对雪莲愈伤组织或再生苗的生长有不同程度的抑制作用。[结论]Basta可以作为新疆雪莲遗传转化体的一种有效筛选剂,筛选压设为4～5 mg/L比较合适。

结缕草转录因子基因ZjDREB4.1克隆和逆境表达模式

以日本结缕草(Zoysia japonica)‘Meyer’品种为材料,克隆获得了1个DREB(dehydration responsive element binding)类转录因子基因,命名为Zj DREB4.1。该基因编码区长651 bp,编码216个氨基酸,推测的蛋白质Zj DREB4.1分子量为22.9 k D,等电点p I为5.74,第50-110位氨基酸组成一个典型的AP2保守结构域。在基因的系统发生树中,Zj DREB4.1蛋白与拟南芥At TINY蛋白和玉米Zm DBF2蛋白聚为一支,属于DREB亚家族A-4组。在叶组织中Zj DREB4.1为组成型表达,受低温诱导上调表达,在干旱和高盐胁迫下表达先下调后恢复至正常水平。