2021年贵州省遵义市李斯特菌血清型和PFGE分型分析

目的了解2021年贵州省遵义市李斯特菌血清型分布和PFGE分子分型特征,为贵州省李斯特菌病防控提供实验室依据。方法收集2021年贵州省致病菌识别网遵义市网络实验室监测的242份食品样本,对其进行分离培养,PCR鉴定,多重PCR血清型分型和脉冲场凝胶电泳(pulse-field gel electrophoresis,PFGE)分子分型。结果242份食品标本分离出5株李斯特菌,分离率为2.07%(5/242),其中4株为单增李斯特菌;5株李斯特菌分成2种血清群,其中1株非单增李斯特菌未分离出血清群,l/2a、3a血清群为优势血清群,经AscⅠ酶切后5株李斯特菌分成5种PFGE带型,相似性为45%~85%。结论贵州省遵义市可能出现除单增李斯特菌外其他李斯特菌种属,李斯特菌PFGE型别呈多样性,主要以食品污染为主,未发现聚集病例,有散发病例出现的可能性,应加强对其分子分型监测。

贵阳地区2013年腹泻病例中致泻性大肠杆菌的病原监测分析

目的对贵阳地区2013年腹泻病例中致泻性大肠杆菌进行病原检测,为病例的确诊和贵阳地区致泻性大肠杆菌病疫情的预防和控制提供依据。方法收集2013年贵阳地区感染性腹泻病例粪便标本,接种麦康凯平板,初步生化符合大肠杆菌的菌落,采用多重PCR方法,进行致泻性大肠杆菌种属鉴定(uid基因)和毒力基因(bfpB、escV、stx1、stx2、elt、estIa、estIb、invE、astA、aggR、pic)检测并确定其致病型别。结果 257份腹泻病例粪便标本共检出致泻性大肠杆菌31株,检出率12.1%,其中EPEC11株,1株为典型EPEC,其余10株为非典型EPEC,EAEC15株,ETEC4株,EIEC1株,未检出EHEC。3岁及以下的婴幼儿和18岁及以上的成人是致泻性大肠杆菌感染的主要人群。结论贵阳地区致泻性大肠杆菌致病型别以EAEC、EPEC为主,婴幼儿和成人是致泻性大肠杆菌感染的主要人群,多重PCR检测方法是诊断致泻性大肠杆菌病的有效检测手段。

贵州省8例空肠弯曲菌病例的病原学诊断与分析

目的对来自贵州省的8例空肠弯曲菌病疑似病例进行病原学诊断与分子流行病学特征分析，为病例的确诊和贵州省空肠弯曲菌病疫情的预防和控制提供科学依据。方法对8例疑似病例粪便和血液标本进行细菌分离，采用传统方法和多重PCR方法对空肠弯曲菌可疑菌株进行鉴定，应用脉冲场凝胶电泳分型技术（PFGE）对空场弯曲菌分离株进行分析。结果8例空肠弯曲菌病疑似病例标本均分离出空肠弯曲菌可疑菌株，PCR扩增出空肠弯曲菌预期大小的目的基因片段，PF—GE显示8株菌经SamI酶切后产生7～10条DNA条带，聚类分析显示，8株菌株分为7个PFGE带型，8株菌的相似性〉50％，其中GZ201004和GZ201005两株腹泻病例来源分离株相似性为100％，血培养血液标本分离株GZ201201与粪便标本分离株GZ201007相似性为66．7％。结论8例空肠弯曲菌病疑似病例均检出空肠弯曲菌，PFGE显示GZ201004和GZ201005两株为同一来源，但8例病例来源菌株存在PFGE带型多态性，该研究结果为病例的确诊和疫情的预防和控制提供了科学依据。

贵阳市434例夏秋季腹泻病例流行特征及细菌病原分布

目的了解贵阳市夏秋季腹泻病例的流行特征和细菌病原分布。方法对2010年6～11月贵阳市6所监测哨点医院的腹泻患者进行流行病学调查,并采集粪便标本采用分离培养、生化鉴定及血清学分型的方法进行沙门菌、志贺菌、弯曲菌、气单胞菌等肠道致病菌的检测和分析。结果 434例患者男女比例为2.1∶1;高发年龄为0～岁(75.81%),腹泻病例主要集中在7～10月;病例主要分布在南明区(207/434)和云岩区(51/434)。434例腹泻标本共检出48株病原菌,平均检出率11.06%(48/434);其中以沙门菌、气单胞菌为主,其次为空肠弯曲菌、志贺菌、结肠弯曲菌,沙门菌以肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为优势血清型,志贺菌以福氏志贺菌为优势血清型;病原菌检出率最高是2～岁,达42.31%;病原菌以0～岁较高,占56.25%(27/48)。大便性状以水样便为主,占78.80%(342/434),而粘液便病原检出率明显高于水样便和稀便(2=30.89,P<0.01)。结论贵阳市夏秋季腹泻人群以0～岁的婴幼儿为主,病例主要分布在南明区和云岩区,病原菌依次以沙门菌、气单胞菌、空肠弯曲菌、志贺菌为主,应针对重点地区、重点人群开展有效预防控制工作。

贵州省首例空肠弯曲菌菌血症病例病原鉴定和亚种分型

目的对贵州省1例菌血症患儿血液中分离的疑似空肠弯曲菌进行鉴定。方法运用传统细菌学方法和分子生物学方法,对从菌血症患者血液分离的可疑空肠弯曲菌进行鉴定和亚种分型。结果来自菌血症患儿血液的可疑菌株,经传统生化鉴定为空肠弯曲菌空肠亚种,特异性多重PCR方法鉴定为弯曲菌属空肠弯曲菌,NAP-mPCR方法鉴定为空肠弯曲菌空肠亚种。结论分离自贵州省菌血症患儿血液的菌株确认为空肠弯曲菌空肠亚种,NAP-mPCR方法可将空肠弯曲菌鉴定到亚种水平。

4株气单胞菌临床分离株基于gyrB和rpoB基因序列的分子鉴定

目的：对4株气单胞菌临床分离株进行菌种的分子鉴定，为气单胞菌的种型鉴定提供病原学依据。方法对4株系统生化鉴定为气单胞菌的菌株，提取核酸作为模板，分别使用gyrB、rpoB基因进行扩增及产物测序，将所得序列在GenBank中进行同源性搜索，与GenBank中已经公布的同源性较高的气单胞菌序列比较构建系统发育树并进行分析。结果4株气单胞菌gyrB基因序列经同源性搜索，与多株嗜水气单胞菌和豚鼠气单胞菌同源性为99%，rpoB基因序列则与多株豚鼠气胞菌同源性为99%-100%，对gyrB基因和rpoB基因序列分别进行系统发育树分析显示，4株气单胞菌菌株在gyrB基因系统发育树中与多株嗜水气单胞菌和豚鼠气单胞菌聚为一簇，而在rpoB基因系统发育树中与多株豚鼠气单胞菌聚在同一分枝内。结论4株气单胞菌经rpoB基因测序分析明确鉴定为豚鼠气单胞菌，gyrB基因测序分析不能有效鉴定其种型。

2013-2014年贵阳市感染性腹泻监测病例中沙门菌的病原学监测分析

目的了解2013-2014年贵阳市腹泻监测病例中沙门菌的血清型别分布及脉冲场凝胶电泳(Pulse-Field Gel Electrophoresis,PFGE)分型特征,为贵阳市沙门菌病的防控提供科学依据。方法收集2013-2014年贵阳市4家哨点医院感染性腹泻病例的432份粪便标本,对其进行沙门菌的分离培养、生化鉴定、血清分型及PFGE分型。结果 432例感染性腹泻患者的粪便标本共检出沙门菌35株,检出率为8.10%(35/432),男女检出之比为1.5:1,发病年龄主要集中在0~5岁;各季度间沙门菌检出率经Fisher确切概率法比较无统计学差异(P=0.052)。35株沙门菌分成9种血清型,其中优势血清型为肠炎沙门菌11株(占31.43%)和鼠伤寒沙门菌9株(占25.71%),其次克勒肯威尔沙门菌6株(占17.14%),斯坦利沙门菌3株,德尔卑沙门菌2株,阿贡纳沙门菌、婴儿沙门菌和病牛沙门菌血清型各1株,1株未分型。经XbaⅠ酶切后11株肠炎沙门菌分成8种PFGE型,优势型为JEGX01.CN0007;9株鼠伤寒沙门菌分成9种PFGE型,总体型别呈多样性分布。结论贵阳市引起感染性腹泻的沙门菌以肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为主,PFGE型别呈多样性。

贵州省2006-2011年炭疽芽胞杆菌检出情况与致病性研究

目的了解贵州省2006-2011年炭疽芽胞杆菌感染和分布情况,为贵州省炭疽疫情的预防控制和炭疽病的分子流行病学研究提供科学依据。方法对来自贵州省2006-2011年不同地区的830份疑似炭疽标本(外环境标本667份、患者标本151份和牲畜标本12份),采用传统的革兰染色镜检、普通营养琼脂平板和血琼脂平板培养基分离培养炭疽芽胞杆菌,运用青霉素抑制试验和噬菌体裂解试验对可疑炭疽芽胞杆菌菌落进行鉴定。采用Real-time PCR技术检测88株经传统细菌学方法鉴定为炭疽芽胞杆菌菌株pXO1质粒上的PA基因和pXO2质粒上的CAP基因。结果从830份标本中分离出88株炭疽芽胞杆菌,总检出率为10.60%。2007年分离出炭疽杆菌的阳性标本最多,占36.36%;其次为2009年,占29.55%。阳性标本主要分布在黔西南州,其次为毕节地区和黔南州;册亨县、织金县和望谟县为炭疽杆菌检出数较多的监测县。88株炭疽芽胞杆菌CAP基因均为阳性。除2007年2株炭疽菌株PA基因为阴性外,其余86株PA基因均为阳性。结论贵州省炭疽疫源地面积广大,污染严重;检出的88株炭疽芽胞杆菌中97.73%的菌株同时具有两种毒力质粒,具有强致病性;该研究结果对贵州省炭疽疫情的预防控制及分子流行病学研究具有重要意义。

丹芍化纤胶囊对博来霉素肺纤维化大鼠肺组织结缔组织生长因子表达的影响

目的观察丹芍化纤胶囊对肺纤维化大鼠肺组织结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,探讨其治疗肺纤维化的作用及机制。方法将48只Wistar大鼠随机分为对照组、肺纤维化组、丹芍化纤高剂量预防组和丹芍化纤低剂量预防组,每组12只。肺纤维化组、丹芍化纤高剂量预防组和丹芍化纤低剂量预防组以气管内滴入博来霉素(5mg/kg)建立肺纤维化模型,丹芍化纤高剂量预防组和丹芍化纤低剂量预防组分别经胃管注入丹芍化纤胶囊0.6,0.3 g/kg,1次/d。HE染色检测肺组织肺泡炎及肺纤维化程度;测定血清羟脯氨酸(HYP)的含量;免疫组化染色检测CTGF的表达。结果与对照组比较,肺纤维化组CTGF的表达显著增高。丹芍化纤高剂量预防组和丹芍化纤低剂量预防组与肺纤维化组比较,CT-GF的表达均显著降低。结论丹芍化纤胶囊可能通过抑制大鼠肺组织CTGF的表达,从而具有抗肺纤维化的作用。

燃煤型砷中毒患者血清细胞因子改变及意义

目的:明确燃煤型砷中毒患者血清细胞因子的改变及意义方法:取128例燃煤型砷中毒患者,分为对照组、轻度中毒组、中度中毒组、重度中毒组四组,检测各血清中血小板活化因子(PAF)、肿瘤坏死因子(TNF)、内皮素(ET)细胞因子及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD). 结果:砷中毒患者血中PAF(分别为1.53±0.42 μg/L, 3.94±0.78 μg/L,5.73±0.96μg/L,6.92±1.43μg/L)、TNF(分别为0.68±0.18 pmol/L,1.87±0.51 pmol/L, 3.74±0.95 pmol/L,5.89±1.23 pmol/L)、ET(分别为145.7±26.9 ng/L,165.7±28.2 ng/L,178.4±36.7ng/L, 195.1±40.6ng/L)显著升高(P<0.001),且随着砷中毒程度的加重,而明显升高(P<0.05或0.01).砷中毒患者MDA(分别为63±11 μkat/L,98±21 μkat/L,111±21 μkat/L, 141±48 μkat/L)显著升高(P<0.001),且随着砷中毒程度的加重,而明显升高(P<0.01),GSH-Px(分别为47.9±4.9 μkat/L,25.8±4.6 μkat/L,24.0±3.9 μkat/L,20.6±4.2 μkat/L)和SOD(分别为2504±652 μkat/L,2025±565 μkat/L,1984±478 μkat/L,1787±427 μkat/L) 显著降低(P<0.001),且随着砷中毒程度的加重,而明显降低(P<0.05或0.01). 结论:砷中毒肝损害除了已明确砷-巯基反应外,还有细胞因子参与肝损害及氧化和抗氧化系统平衡紊乱.

银杏叶片治疗燃煤型砷中毒肝纤维化的临床研究

目的 研究银杏叶片抗燃煤型砷中毒肝纤维化作用。方法 选择燃煤型砷中毒高发区 84例慢性砷中毒患者 ,银杏叶片治疗 3月 ,对照组用安慰片。检查治疗前后患者血清PAF及四项肝纤维化指标 ,部分患者作治疗前后的病理学检查。结果 治疗组血清PAF及四项肝纤维化指标治疗后较治疗前有明显降低 (P <0 .0 1)。治疗组的显效率和总有效率分别为 4 5 .5 %和 79.5 % ,而对照组的显效率和总有效率分别是 17.5 %和 4 2 .5 % ,两者比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。治疗组治疗后的肝脏病理有一定的改善。

贵州省猪链球菌病监测结果分析

目的了解贵州省人及表观健康猪群感染猪链球菌的情况,以便为采取有效措施提供依据。方法选取罗甸、遵义、黎平、丹寨等4县做监测点,采集人感染猪链球菌疑似病例的血液、脑脊液及表观健康猪群扁桃体、鼻拭子进行病原菌的分离鉴定。结果从2006年至2011年,在人间病例监测中,从1例报告疑似病例的血液及脑脊液中检出Ⅱ型猪链球菌。宿主动物监测中,共采集表观健康猪群扁桃体和鼻拭子标本3 969份,检出各类链球菌及球菌94株,李斯特菌1株。结论在猪链球菌病监测中,罗甸县发现1例人感染猪链球菌病例;表观健康猪群未分离到Ⅱ型猪链球菌。

贵州省2013-2021年羊种布鲁氏菌分离株的多位点可变数目串联重复序列分析

目的了解贵州省2013-2021年羊种布鲁氏菌的分子流行病学特征,为贵州省布鲁氏菌病疫情防控提供科学依据。方法以贵州省疾病预防控制中心2013-2021年分离、鉴定和保存的78株羊种布鲁氏菌分离株为研究对象,运用BCSP31-PCR及AMOS-PCR技术对分离株分别进行布鲁氏菌属及种的鉴定,运用多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA-16)技术进行分型分析。对MLVA分型结果进行整理及聚类分析,了解贵州省羊种布鲁氏菌的MLVA型别分布及分子流行病学特征。结果78株羊种菌分离株经BCSP31-PCR技术均鉴定为布鲁氏菌属细菌,AMOS-PCR技术将其均鉴定为羊种布鲁氏菌,MLVA-8分型技术将其分为5种MLVA型,MLVA-16分型技术将其分为46种MLVA型,其中遵义市的MLVA-16基因型型别分布最多。基于MLVA-16分型数据聚类分析显示,78株分离株亲缘关系较近,被聚类为4个群;最小生成树图显示,78株分离株被分为8个遗传复合体和14个单体。结论贵州省羊种布鲁氏菌MLVA型别呈多样性,提示贵州省布病疫情的病原体可能存在多条传播链。

贵州省2017-2018年非伤寒沙门菌临床分离株耐药及分子分型研究

目的了解贵州省2017-2018年非伤寒沙门菌(NTS)的血清型分布、耐药情况与脉冲凝胶电泳(PFGE)分子分型特征。方法对分离自贵州省临床病例的191株非伤寒沙门菌菌株进行生化鉴定、血清型分型,微量肉汤稀释法测定16种抗生素的最小抑菌浓度,PFGE进行分子分型分析。结果 191株非伤寒沙门菌分出18种血清型,鼠伤寒沙门菌(45.5%,87/191)和肠炎沙门菌(29.3%,56/191)为主要血清型。对所测抗生素产生耐药的菌株占96.8%(185/191),对磺胺异恶唑、链霉素、氨苄西林、四环素、多西环素耐药率较高,均超过60.0%。对头孢曲松和环丙沙星耐药率分别为7.9%(15/191)和13.1%(25/191)。多重耐药率为84.3%(161/191),共有69种耐药谱,主要耐药谱型为氨苄西林+链霉素+磺胺异恶唑+萘啶酸和氨苄西林+氯霉素+链霉素+磺胺异恶唑+四环素+多西环素+复方新诺明。87株鼠伤寒沙门菌共分为60种带型,优势型别为JPXX01.GZ0047(12.6%,11/87)。56株肠炎沙门菌共分为21种带型,优势型别为JEGX01.GZ0005(23.3%,13/56)。结论贵州省NTS主要血清型为鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌,多重耐药现象严重,PFGE带型总体呈多样性,部分带型与耐药表型有一定的关联性。

银杏制剂对肺纤维化的干预作用及可能机制

目的探讨转化生长因子(TGFβ1)在肺纤维化形成过程中的作用及银杏制剂干预肺纤维化的可能机制。方法四组大鼠除正常对照组外,其余均一次性气管内注射BLM复制肺纤维化模型,两预防组于模型制备2小时后分别予以高剂量、低剂量银杏制剂每天灌胃治疗,于28天后处死动物,测定血清羟脯氨酸(HYP)含量;肺组织肺泡炎及肺纤维化程度;检测肺组织中TGFβ1的表达。结果肺纤维化模型组与对照组比较,28天时血清HYP含量、TGFβ1蛋白的表达显著增多(P<0.01);肺泡炎、肺纤维化程度显著增加(P<0.01)。两银杏制剂预防组与模型组相比,28天时血清羟脯氨酸含量、TGFβ1蛋白的表达显著减少(P<0.01);肺泡炎、肺纤维化程度显著减轻(P<0.05)。结论TGFβ1参与了肺纤维化的发病过程;银杏制剂对博莱霉素所致肺纤维化有一定的预防作用,其作用机制可能通过下调TGFβ1的表达,抑制细胞外基质的沉积,从而阻断肺纤维化的发生发展。

贵州省鼠伤寒沙门菌单相变异株的CRISPR基因型和遗传多样性研究

目的了解贵州省鼠伤寒沙门菌单相变异株规律的成簇间隔短回文重复序列(CRISPR)的基因型及遗传多样性,为贵州省沙门菌病的预防控制提供依据。方法对分离自2013—2018年贵州省7个市(州)的71株疑似鼠伤寒沙门菌单相变异株进行系统生化鉴定及血清分型,结合双重PCR法确定疑似菌株为鼠伤寒沙门菌单相变异株。提取鼠伤寒沙门菌单相变异株的DNA作为模板,进行CRISPR1和CRISPR2的PCR扩增,将阳性扩增产物进一步测序,获得菌株的CRISPR1和CRISPR2间隔序列,根据间隔序列的组成,确定CRISPR基因型,并使用Bionumerics软件对菌株进行遗传多样性分析。结果71株疑似鼠伤寒沙门菌单相变异菌株经系统生化鉴定、血清分型及双重PCR法鉴定为鼠伤寒沙门菌单相变异株,经CRISPR1和CRISPR2两个位点的PCR扩增和产物测序,71株菌共检测到163个间隔序列,其中CRISPR1有102个,CRISPR2有61个。联合CRISPR1和CRISPR2两个位点的间隔序列进行分析,发现71株菌被分为33个CRISPR基因型(TSTs),其中TST11和TST1为贵州省的优势基因型,分别占总菌株数的25.35%和12.68%。71株菌经Bionumerics软件聚类分析后被分为A、B、C、D 4个簇,A簇包含的菌株最多,B簇包含的基因型最多,不同来源的3株参考株独立成簇,D簇包含7个TSTs基因型。结论贵州省鼠伤寒沙门菌单相变异株具有优势的CRISPR基因型和遗传多样性的特点,可能有其他的感染来源。

荧光偏振法在布鲁菌病抗体检测中的应用

目的 荧光偏振法应用于人体血清布鲁菌病(简称“布病”)抗体检测,分析其在布病诊断中的应用价值,为布病实验室检测提供科学依据。方法 收集贵州省2021年布病重点监测人群的血清245份,同时应用荧光偏振法(fluorescence polarisation method, FPA)、虎红平板凝集试验(rose bengal test, RBT)、血清凝集试验(serum agglutination test, SAT)和酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)进行检测,分析4种检测方法结果间的一致性、敏感性和特异性。结果 FPA与RBT、SAT、ELISA的Kappa值分别为0.852、0.845、0.778,FPA与传统RBT、SAT的Kappa值均>0.750,即FPA与其他3种诊断方法比较,有很高的一致性。ELISA与RBT、SAT、FPA的Kappa值分别为0.779、0.804、0.778,ELISA与其他3种方法的Kappa值为0.610~0.800,即ELISA与其他3种诊断方法比较,有较好的一致性。与确诊试验SAT比较,RBT的敏感性和特异性均高。FPA、ELISA与SAT比较敏感性和特异性也较高,敏感性均为86.2%,但FPA的特异性(98.4%)高于ELISA的特异性(94.3%)。结论 与SAT进行比较,FPA和ELISA敏感性好、特异性强、一致率高、Kappa值较高;RBT一致性较好、敏感性高、特异性一般、易出现假阳性。通过比较和分析4种布病血清抗体的实验室检测方法,荧光偏振法作为一种新技术,有较高的灵敏度和特异度,对布病的防治有重要意义。

贵州省2022-2023年流感季A(H1N1)pdm09亚型流感病毒抗原性和血凝素基因特征

目的了解贵州省A(H1N1)pdm09亚型流感病毒抗原性和血凝素(Hemagglutinin,HA)基因特征。方法选取贵州省流感监测点2022年10月至2023年3月A(H1N1)pdm09亚型流感病毒分离株,采用红细胞凝集抑制试验检测抗原性,测定HA全基因组序列,构建遗传进化树,分析核苷酸同源性和氨基酸位点变异。结果共获得78株A(H1N1)pdm09亚型流感病毒,均鉴定为疫苗类似株。22株毒株获得HA全基因组序列,与疫苗株的核苷酸同源性为97.28%-99.14%;其中6B.1A.5a.2a、6B.1A.5a进化分支分别为19株、3株;19株发生Sb抗原决定簇的A186T和Q189E氨基酸替换并分布在1个抗原决定簇,3株发生Sa抗原决定簇的K156N和I161L氨基酸替换并分布在1个抗原决定簇。19株发生190位螺旋(184-191)A186T和Q189E以及220位环E224A氨基酸替换,3株发生220位环D222Y氨基酸替换,均发生在HA1区域。未发现糖基化位点变异。结论贵州省2022-2023年流感季A(H1N1)pdm09亚型流感病毒与疫苗株匹配性良好,但存在部分氨基酸位点变异。需加强流感病毒监测及其抗原性和基因序列分析,以利于流感防控策略制定和流感疫苗株筛选。