广西南宁地区血清胃蛋白酶原参考区间的建立与验证

目的 建立适合广西南宁地区健康人群的血清胃蛋白酶原(PG)的参考区间。方法 选取2019年1月—2021年12月广西中医药大学附属国际壮医医院表观健康者6 442名,用于PG参考区间建立。另选取表观健康者652名,用于参考区间验证。检测所有研究对象血清PGⅠ和PGⅡ水平,计算胃蛋白酶原Ⅰ/胃蛋白酶原Ⅱ比值(PGR)。结果 男性、女性之间血清PGⅠ、PGⅡ水平和PGR差异均有统计学意义(P<0.01)。男性和女性各年龄组间血清PGⅠ、PGⅡ水平差异均有统计学意义(P<0.01)。男性31~40岁组与41~50岁组之间,女性≤30岁组与31~40岁组之间、41~50岁组与51~60岁组之间PGR差异均有统计学意义(P<0.01);男性、女性其他各年龄组之间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。Spearman相关分析结果显示,PGⅠ、PGⅡ与年龄呈正相关(r值分别为0.257、0.268,P<0.01),而PGR与年龄呈负相关(r=-0.095,P<0.01)。合并差异无统计学意义的年龄段后,采用百分位数法按性别和年龄分别建立参考区间。用于验证的表观健康者不同性别和年龄各组R值均>90%,建立的参考区间适用于广西南宁地区人群。结论 成功建立了广西南宁地区不同性别和年龄健康人群PGⅠ、PGⅡ和PGR的参考区间,可为临床诊治相关疾病提供参考。

基于LIS系统数据建立广西南宁地区0-12岁健康儿童血清碱性磷酸酶参考区间

目的 利用实验室信息系统(LIS)数据,建立广西南宁地区0~12岁健康儿童血清碱性磷酸酶(ALP)的参考区间,为临床诊疗工作提供可靠依据。方法 筛选广西中医药大学附属国际壮医医院0~12岁健康儿童共2 314例为参考人群,另筛选240例为参考区间验证组。将研究对象分为<28d、28d至<1岁、1岁至<3岁、3岁至<6岁、6岁至<9岁、9岁至<12岁6个年龄组。使用四分位间距法剔除离群值后,采用Kolmogorov-Smirnov Z检验分析数据分布特性,通过Mann-Whitney U检验分析ALP水平在性别、相邻年龄组间的差异,Spearman秩相关分析ALP水平与年龄的相关性。采用非参数法(P2.5~P97.5)建立血清ALP参考区间。结果 剔除离群值、重复值后,共2 256例纳入研究,数据呈偏态分布。ALP水平在性别间差异无统计学意义(P>0.05)、与年龄呈正相关(r=0.526,P<0.05)。将差异无统计学意义的年龄组合并,最终建立血清ALP的参考区间:105.98~288.03U/L(<28d)、136.60~350.40U/L(28d至<3岁)、153.00~354.10U/L(3岁至<12岁),并通过验证。建立的参考区间与试剂说明书、行业标准提供的参考区间相比均有一定的差异。结论 本研究建立了0~12岁健康儿童血清ALP参考区间,对于提高儿童血清ALP检测在本地区临床实验室的应用价值具有重要意义。

壮医临证施护联合水蛭疗法治疗类风湿关节炎短期疗效的研究

目的:观察壮医临证施护联合水蛭疗法在类风湿关节炎活动期中的短期抗炎止痛及减轻疾病活动度的效果。方法:纳入类风湿关节炎活动期患者120例,采用随机数字表法将患者分为对照组与观察组,每组60例。对照组采用双氯芬酸钠双释放肠溶胶囊治疗,观察组采用壮医临证施护联合水蛭疗法,疗程14 d。观察两组患者治疗前、治疗1周后、治疗2周后关节疼痛评分(目测模拟标尺法VAS)、肿胀评分、DAS28评分及血清学指标(CRP、RF、ESR、PT、PLT)及治疗后临床疗效。结果:治疗后,两组患者关节疼痛(VAS)、关节肿胀数、DAS28评分及血清学指标(CRP、RF、ESR、PT、PLT)均较治疗前明显改善(P<0.05),且观察组与对照组相比明显改善(P<0.05);观察组临床总有效率(93.33%)明显高于对照组(53.33%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:壮医临证施护联合水蛭疗法在治疗类风湿关节炎活动期患者时,短期内展现出显著的抗炎止痛效果,并能减轻疾病活动度。

南宁地区健康人群血清鳞状上皮细胞癌抗原参考区间的建立

目的建立南宁地区健康人群血清鳞状上皮细胞癌抗原(SCC-Ag)的参考区间(RIs),为鳞状上皮细胞癌的诊断和疗效评估提供实验室依据。方法收集2019年3月至2021年12月在广西国际壮医医院健康管理中心进行体检的健康体检者10197例,使用化学发光微粒子免疫检测技术法(CMIA)检测血清SCC-Ag水平。使用Mann-Whitney U检验比较血清SCC-Ag水平在不同性别和相邻年龄组之间的差异,使用非参数法取单侧第95百分位数(P95)确定参考区间上限。另选取与参考区间入选人群纳入标准相同的健康体检者1035例对已建立的参考区间进行验证。结果血清SCC-Ag水平呈偏态分布(Z=0.08,P<0.05),男性血清SCC-Ag水平显著高于同年龄段的女性。男性18~30岁与31~40岁、51~60岁与61~90岁之间有差异(P<0.05),女性18~30岁与31~40岁、31~40岁与41~50岁以及51~60岁与61~90岁之间有差异(P<0.05)。血清SCC-Ag的参考区间:18~30岁男性和女性为0~1.64 ng/mL;男性31~60岁和61~90岁分别为0~1.57 ng/mL、0~1.70 ng/mL;女性31~40岁、41~60岁、61~90岁分别为0~1.50 ng/mL、0~1.52 ng/mL、0~1.42 ng/mL。结论根据不同性别和年龄分组建立了南宁地区健康人群的血清SCC-Ag参考区间。

miRNA-152在肝癌组织中的表达及临床意义

目的探讨微小RNA(miR)-152在肝癌组织中的表达及临床意义。方法收集56例肝癌患者癌及癌旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应技术(Real-time PCR)检测肝癌及癌旁组织标本中miR-152的表达水平,分析其与肝癌患者临床病理特征及预后的相关性。结果miR-152在肝癌及癌旁组织中相对表达水平分别为0.616±0.041及0.768±0.042,两者差异有统计学意义(P=0.011);其与患者的TNM分期(P=0.042)、病理分化(P=0.035)、肿瘤转移(P=0.048)及血管侵犯(P=0.042)明显相关,而与性别、年龄、AFP水平、肿瘤个数、肿瘤直径等无明显相关;miR-152低表达组患者总生存时间(P=0.035)和无进展生存时间(P=0.012)明显低于miR-152高表达组,多因素Cox回归分析的结果显示,miR-152低表达、肿瘤复发和病理分化是影响肝癌患者预后的独立危险因素。结论miR-152在肝癌组织中表达下调,且与肝癌患者的病理分化程度、TNM分期、有无转移、有无血管侵犯及预后密切相关。

M2型肿瘤相关巨噬细胞对肝癌细胞侵袭转移和上皮间质转化的影响

目的:观察M2型肿瘤相关巨噬细胞对肝癌细胞侵袭、迁移、粘附和上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的影响,探讨M2型肿瘤相关巨嗔细胞在肝癌侵袭转移中的作用方法:体外将人单核白血病细胞株THP-1诱导为M2型肿瘤相关巨噬细胞,模拟体内微环境在体外建立M2型肿瘤相关巨噬细胞与肝癌细胞Huh7和SMMC7721的共培养体系,利用Transwell侵袭实验、迁移实验和粘附实验观察共培养后Huh7和SMMC7721细胞侵袭、迁移和粘附能力的变化,用荧光定量PCR检测共培养前后Huh7和SMMC7721 EMT相关标志物E-cadherin,N-cadherin,Vimentin和-smooth muscle actin(-SMA)mRNA的表达水平结果:肝癌细胞Hiih7和SMMC7721与M2型肿瘤相关巨噬细胞共培养后,细胞形态发生明显变化,由原来上皮细胞形态转化成为一种梭形的间质细胞形态,细胞的侵袭和迁移能力增强(P<0.0l),而粘附能力下降(P<0.05).荧光定量PCR结果显示,共培养后Huh7和SMMC7721上皮标志E-cadhermmRNA表达水平下降(P<0.05),间质标志物N-cadherin,Vimentin和-SMAmRNA的表达水平上升(P<0.05).结论:M2型肿瘤相关巨噬细胞通过诱导肝癌细胞发生EMT促进肝癌细胞的侵袭.

SERPINA1在肝癌组织的表达及临床意义

目的探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂A1(SERPINA1)在肝癌组织的表达及临床意义。方法选取行手术切除的78例肝癌病例,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot检测肝癌组织和癌旁组织SERPINA1 mRNA和蛋白表达;免疫组织化学检测肝癌组织中SERPINA1表达。根据SERPINA1表达将肝癌患者分为SERPINA1高表达组和SERPINA1低表达组,分析SERPINA1表达与肝癌转移和预后的关系。采用RNA干扰技术干扰肝癌HepG2细胞中的SERPINA1表达,Transwell侵袭实验检测SERPINA1对肝癌细胞侵袭能力的影响,Western blot检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和金属基质蛋白酶9(MMP-9)表达的变化。结果患者肝癌组织中SERPINA1 mRNA和蛋白表达明显高于癌旁组织(t=4.872、5.811,P<0.05)。肝癌组织中SERPINA1阳性表达率明显高于癌旁组织(χ^(2)=5.03,P<0.05),肝癌组织中SERPINA1阳性表达与TNM分期、病理分级和血管侵犯有关(P<0.05)。SERPINA1高表达组肝癌患者5年累积生存率低于SERPINA1低表达组(χ^(2)=5.899,P<0.05),5年累积复发率高于SERPINA1低表达组(χ^(2)=7.305,P<0.01)。HepG2细胞沉默SERPINA1表达后,穿过Transwell小室基底膜的细胞数较对照组和Mock组减少,上皮标志物E-cadherin表达升高,间质标志物N-cadherin和MMP-9表达降低。结论SERPINA1表达与肝癌的侵袭转移和预后相关,其可能是预防肝癌转移和早期干预的新靶点。

GPCR48通过诱导肝癌细胞上皮间质转化促进肝癌侵袭转移的机制

目的观察G蛋白偶联受体48 (GPCR48)在不同转移潜能肝癌细胞株中的表达及其对肝癌细胞Huh7上皮间质转化(EMT)特性和侵袭转移的影响。方法采用蛋白质印迹(Western blot)检测不同转移潜能肝癌细胞GPCR48的蛋白表达水平。构建携带GPCR48基因的慢病毒载体,在肝癌细胞Huh7过表达GPCR48;采用Real-time PCR和Western blot检测GPCR48的过表达水平,采用Transwell侵袭实验和迁移实验检测对照组、Mock组和GPCR48过表达组肝癌细胞Huh7的侵袭和迁移能力;采用Real-time PCR和Western blot检测对照组、Mock组和GPCR48过表达组肝癌细胞Huh7 EMT相关标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和γ连环蛋白(γ-catenin)的mRNA和蛋白的表达水平。数据组间差异比较采用方差分析。结果 GPCR48蛋白表达水平在转移性肝癌细胞株明显高于非转移性肝癌细胞株(P < 0.05)。携带GPCR48基因的慢病毒载体可以有效转染肝癌细胞Huh7,稳定表达GPCR48的mRNA和蛋白。GPCR48过表达组肝癌细胞Huh7与Mock组和对照组相比,侵袭和迁移能力明显增强(F≥5.54,P值均< 0.05),上皮表型标志物E-cadherin和γ-catenin的mRNA和蛋白表达水平下降(P值均<0.05),间质表型标志物N-cadherin和Vimentin的mRNA和蛋白表达水平上升(P值均< 0.05),表明过表达GPCR48的肝癌细胞Huh7发生了EMT改变。结论 GPCR48表达水平与肝癌细胞转移潜能呈正相关,过表达GPCR48可以下调上皮表型标志物的表达和上调间质表型标志物的表达,诱导肝癌细胞发生EMT改变,从而促进肝癌细胞侵袭和迁移。

GPCR48表达与肝癌术后转移和预后的关系研究

目的探讨肝癌组织中G蛋白偶联受体48(GPCR48)的表达与肝癌转移和预后的关系。方法选择2019年1月至8月在广西国际壮医医院肝胆外科行手术切除(R0切除)的10例肝癌患者,其中男性6例,女性4例,年龄37.0~64.0岁;选择2019年1月至12月在广西国际壮医医院肝胆外科行肝部分切除术的6例因外伤或结石行肝部分切除的患者,其中男性3例,女性3例,年龄16.0~63.0岁。收集肝癌患者的肝癌组织、癌旁组织及肝部分切除患者的正常肝组织,利用实时荧光定量PCR、蛋白印迹技术和免疫组化技术检测肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中GPCR48的mRNA和蛋白表达,比较分析肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中GPCR48表达的差异。选择2009年6月至2019年6月在南宁市第一人民医院肝胆外科行肝癌切除术的68例肝癌患者癌组织标本以及相关临床资料,其中男性56例,女性12例,年龄范围31.0~76.0岁,采用免疫组化技术检测肝癌组织中GPCR48的表达,根据肝癌组织中GPCR48的表达水平将肝癌患者分为GPCR48高表达组和GPCR48低表达组,分析GPCR48的表达水平与肝癌转移和预后的关系。结果肝癌组织GPCR48 mRNA的表达水平高于癌旁组织[(0.894±0.086)比(0.583±0.095)]和正常肝组织[(0.894±0.086)比(0.485±0.111)],肝癌组织GPCR48蛋白的表达水平高于癌旁组织[(0.772±0.080)比(0.453±0.052)]和正常肝组织[(0.772±0.080)比(0.329±0.046)],差异均具有统计学意义(P<0.05)。肝癌组织GPCR48蛋白阳性率为70.0%(7/10),癌旁组织为20.0%(2/10),两者差异具有统计学意义(P<0.05)。GPCR48表达与肿瘤长径、TNM分期、血管侵犯、肿瘤包膜等相关(P<0.05),与肝癌其他临床病理学参数无关(P>0.05)。68例肝癌患者中,GPCR48高表达组46例,GPCR48低表达组22例,GPCR48高表达组患者肿瘤累积复发率高于GPCR48低表达组(χ^2=15.577),累积生存率低于GPCR48低表达组(56.5%比27.3%,χ^2=6.309),差异均具有统计学意义(8.7%比36.4%,P<0.05)。结论GPCR48 mRNA和蛋白在肝癌组织中表达上调,与肝癌复发转移有关,影响肝癌患者的预后。