白藜芦醇和EGCG联用对小鼠骨骼肌抗氧化能力的影响

【目的】研究白藜芦醇(Resveratrol,RES)和表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-Gallate, EGCG)联合使用对小鼠骨骼肌抗氧化能力影响的机制,为开发能通过提高畜禽骨骼肌抗氧化能力进而改善肉品质的新型、绿色、安全的饲料添加剂提供理论依据。【方法】将体重18~22 g的清洁级昆明种小鼠40只,随机分为4组,即二甲基亚砜(DMSO)对照组(CK)、RES组、EGCG组和RES+EGCG联用组,每组10只,采取灌胃的方式对应给药,剂量为每天400 mg/kg,连续给药28 d后测定小鼠骨骼肌中抗氧化酶活力指标,并通过荧光定量PCR方法测定小鼠骨骼肌中抗氧化相关基因的表达量。【结果】RES和EGCG联用小鼠的采食量、体重和脏器指数无显著影响(P>0.05)。与CK相比,RES组、EGCG组及RES+EGCG组血清和肌肉中丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05,下同),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力显著升高,小鼠腓肠肌中GSH-Px、超氧化物歧化酶1(SOD1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)和核因子NF-E2相关因子(Nrf2)基因表达水平显著升高,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)基因表达水平显著降低。与RES或EGCG单独使用组相比,RES+EGCG联用组血清中GSH-Px、T-SOD活力显著升高,MDA含量显著降低,腓肠肌中GSH-Px基因表达水平显著升高;联用组SOD1基因表达水平与EGCG组相比显著升高,SOD2基因表达水平与RES组相比显著升高。【结论】RES和EGCG联用显著提高小鼠肌肉抗氧化酶活力及相关抗氧化基因的表达,并可能激活Keap1-Nrf2信号通路,表明RES和EGCG联用可提高肌肉的抗氧化水平。

饲粮中添加白藜芦醇对“杜×长×大”猪空肠抗氧化能力及紧密连接蛋白表达的影响

试验旨在研究饲粮中添加白藜芦醇(resveratrol,RES)对"杜×长×大"猪空肠抗氧化酶活性及抗氧化基因指标和紧密连接蛋白相关基因表达水平的影响。试验选用12头体重约为65 kg的育肥猪分为2组,每组6头。对照组育肥猪饲喂基础饲粮,试验组育肥猪饲喂在基础饲粮中添加400 mg/kg的RES的饲粮,试验期41 d。结果表明,与对照组相比,饲粮中添加400 mg/kg的RES显著提高了育肥猪空肠过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及总抗氧化能力(T-AOC)(P<0.05),显著降低丙二醛(MDA)的含量(P<0.05);显著提高育肥猪空肠抗氧化基因铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶-1 (GPx-1)和谷胱甘肽过氧化物酶-4 (GPx-4)活性(P<0.05);显著提高育肥猪空肠抗氧化酶活相关基因CAT、T-SOD和GSH-Px的表达水平(P<0.05),显著降低MDA的表达水平(P<0.05);显著提高育肥猪空肠紧密连接蛋白咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白-1 (Claudin-1)和链接黏附分子A (JAM-A)的表达水平(P<0.05)。研究表明,饲粮添加400 mg/kg的RES能够显著提高育肥猪空肠抗氧化能力及紧密连接蛋白的表达,改善动物肠道健康。

巴马香猪CIDEa基因克隆及组织表达分析

本试验旨在对巴马香猪CIDEa基因序列进行克隆,预测其蛋白结构和功能,并进行组织表达分析。根据NCBI已经公布猪的CIDEa基因序列(登录号:NM_001112696.2),利用Oligo 7.0软件设计引物,采用RT-PCR法扩增并克隆巴马香猪CIDEa基因序列,利用生物信息学软件分析其核苷酸序列及编码蛋白的疏水性、理化性质、跨膜结构域、二级结构、三级结构及互作蛋白,并采用实时荧光定量PCR方法检测CIDEa基因在巴马香猪皮下脂肪、肝脏、肾脏、肺脏、脾脏、背最长肌及心脏的表达规律。结果显示,试验成功获得巴马香猪CIDEa基因CDS区序列,全长660 bp,编码219个氨基酸,与GenBank中猪、牛、马、犬、人、猕猴和家鼠的核苷酸相似性分别为99.4%、84.7%、81.5%、80.9%、79.7%、78.9%和76.1%。与GenBank中野猪CIDEa基因核苷酸序列比对发现,发生4处碱基突变,其中A609G和T627C位点为同义突变,C173T(Pro→Leu)和C631T(Arg→Cys)位点为错义突变。巴马香猪CIDEa蛋白分子质量为24483.57 u,等电点为9.48,不稳定指数为52.86,属于不稳定蛋白;该蛋白中亮氨酸(Leu)含量最高(13.2%),色氨酸(Trp)含量最低(0.5%)。巴马香猪CIDEa蛋白为膜外亲水性蛋白,包含1个超家族结构域(CIDE-N)。二级结构预测发现,巴马香猪CIDEa蛋白包含α-螺旋(45.66%)、β-转角(5.94%)、延伸链(14.61%)和无规则卷曲(33.79%),三级结构预测结果与二级结构一致。蛋白互作分析结果表明,巴马香猪CIDEa蛋白与PPARG、PPARGC-1、COX8H、PRDM16、DIO2、TMEM26、ELOVL3、COX7A1、CIDEC、DFFB蛋白存在相互作用。实时荧光定量PCR结果显示,CIDEa基因在巴马香猪皮下脂肪中表达量最高,且显著高于其他组织(P<0.05),心脏中表达量最低。研究结果为进一步探讨CIDEa基因对巴马香猪脂肪沉积的调控机制提供理论依据。

EGCG对热应激巴马香猪肠道热休克蛋白以及肠道屏障相关基因表达的影响

本研究旨在探究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对于热应激巴马香猪小肠中热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)、紧密连接蛋白(tight junction proteins,TJPs)和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR-4)等基因表达的影响。25头平均体重为(34.28±1.19)kg的8月龄雄性巴马香猪被随机分成5个处理组,包括TN组(22℃,自由采食)、PF组(22℃,采食量配对)、HS0组(35℃,自由采食)、HS250组(35℃,自由采食+0.025%EGCG)和HS500组(35℃,自由采食+0.05%EGCG)。预实验7 d,正式实验28 d。实验结束后进行屠宰并采集小肠组织样品,检测各组小肠中HSPs、TJPs和TLR-4基因的表达。结果表明:(1)热应激显著增加了小肠中热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)和热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)基因的表达量,而添加EGCG均显著降低了它们的相对表达量,且0.05%EGCG作用效果优于0.025%EGCG。(2)热应激显著降低了小肠中膜闭锁连接蛋白-1(zonula occluden-1,ZO-1)、闭合蛋白3(Claudin-3)、咬合蛋白(Occludin)和黏蛋白2(mucin 2,Muc-2)基因的相对表达量,而添加EGCG显著增加了它们的相对表达量,且0.05%EGCG作用效果优于0.025%EGCG。(3)热应激显著增加了肠道中TLR-4基因的相对表达量,而添加EGCG显著降低了其相对表达量,且0.05%EGCG作用效果优于0.025%EGCG。以上结果说明,热应激显著增加了巴马香猪肠道中HSP70和HSP90基因的表达,并可能通过破坏它们的紧密连接而增加TLR-4基因的表达,从而影响肠道屏障功能;而热应激猪日粮中添加EGCG可以降低HSPs基因的表达,减弱热应激可能导致的肠道屏障受损,提高肠道中TJPs基因的表达以及降低TLR-4基因的表达,从而缓解热应激,且0.05%EGCG作用效果优于0.025%EGCG。本研究为今后开发EGCG作为一种改善热应激巴马香猪肠道健康的绿色安全饲料添加剂提供了科学依据。

陆川猪DGAT2基因克隆、序列分析及表达水平研究

为了获得广西陆川猪二脂酰甘油酰基转移酶2(DGAT2)基因编码区(CDS)序列,并探讨该基因在陆川猪和杜长大猪肌肉中的表达水平差异,试验以陆川猪背最长肌组织总RNA为模板,克隆获得DGAT2基因CDS序列并利用生物软件进行序列分析,同时采用实时荧光定量PCR技术检测150日龄陆川猪和杜长大猪背最长肌中DGAT2基因的相对表达量。结果表明:陆川猪DGAT2基因CDS序列长度为1086 bp,与GenBank中的野猪、虎鲸、双峰骆驼、羊驼、佛罗里达海牛、野驴、马和家猫的同源性分别为99.8%、93.1%、93.0%、92.9%、92.1%、91.8%、91.7%和91.5%;陆川猪与野猪的遗传距离最近;陆川猪DGAT2蛋白由361个氨基酸组成,其中亮氨酸含量最高,半胱氨酸含量最少,DGAT2蛋白具有较弱的疏水性;在DGAT2蛋白高级结构中,α-螺旋占比39.34%,无规则卷曲占比43.21%,延伸链占比17.45%;150日龄陆川猪背最长肌中DGAT2基因相对表达量极显著高于同日龄的杜长大猪(P<0.01)。说明DGAT2基因在猪肌肉脂肪沉积过程中发挥了一定作用,但其作用于肌内脂肪的沉积机制尚不明确,可将DGAT2基因作为开展陆川猪肌内脂肪沉积分子机制研究的主要候选基因之一。