广东地区水禽源大肠杆菌对β-内酰胺类药物的耐药性及耐药基因检测

为了调查广东地区水禽源大肠杆菌对β-内酰胺类抗菌药的耐药性和耐药基因的流行情况,本试验于2012—2014年从广东地区患病水禽中成功分离鉴定243株大肠杆菌,采用琼脂二倍稀释法测定大肠杆菌分离株对4种β-内酰胺类药物的敏感性,并通过PCR方法检测耐药株的耐药基因blaCTX-M、blaTEM和blaOXA。药敏试验结果显示,广东各地区的分离株对氨苄西林和阿莫西林耐药率较高,耐药率为80.00%~100.00%;而对头孢他啶和头孢噻呋耐药率较低,耐药率为9.09%~50.00%。PCR检测结果显示,在4种药物的耐药菌株中,耐药基因blaCTX-M、blaTEM和blaOXA的检出率分别为88.46%~90.87%、67.21%~88.52%和51.28%~59.02%。结果表明,水禽大肠杆菌对β-内酰胺类药物普遍具有耐药性,其中青霉素类尤为严重。blaCTX-M、blaTEM和blaOXA基因为广东地区水禽源大肠杆菌携带的主要耐药基因,且耐药基因的普遍存在与临床日益严重的耐药现象有着很大的关系。

广东水禽源大肠埃希菌耐药性及氨基糖苷类耐药基因研究

为了调查广东地区水禽源大肠埃希菌对氨基糖苷类药物耐药现状和耐药基因的流行情况,探索大肠埃希菌的氨基糖苷类耐药基因型与耐药表型之间的关系,本研究采用琼脂梯度稀释法测定251株广东地区水禽源大肠埃希菌对氨基糖苷类药物的耐药性和采用PCR方法检测耐药基因。药敏试验结果显示,大肠埃希菌对链霉素耐药较严重,鸭源和鹅源的耐药率分别为81.58%和75.43%,对庆大霉素和卡那霉素较敏感,耐药率分别为25%和54.86%,对阿米卡星最为敏感,其中鸭源的菌株耐药率仅为1.32%。PCR方法检测显示,aadA1和aph(3′)-1检出率较高,为84.6%和91.9%,表明携带aadA1和aph(3′)-1耐药基因的水禽源大肠埃希菌在广东地区呈流行趋势。耐药基因型与耐药表型相关性分析结果显示,耐药基因rmtB的携带与4种药物(庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素和壮观霉素)耐药株的产生具有显著相关性,表明耐药基因rmtB对大肠埃希菌耐药株的产生起重要的作用。本试验结果可为指导广东地区水禽大肠埃希菌病的临床用药提供理论基础和研究大肠埃希菌的耐药基因提供相关的数据。

广东地区水禽源大肠杆菌耐药性和磺胺类耐药基因检测

为调查广东地区水禽源大肠杆菌磺胺类药物耐药性和磺胺类耐药基因的流行情况,采用琼脂二倍稀释法测定大肠杆菌分离株对磺胺类药物的敏感性,通过PCR方法调查磺胺耐药株携带耐药基因sul1、sul2、sul3的情况。药敏试验结果表明,256株水禽源大肠杆菌分离株对复方磺胺甲恶唑和磺胺二甲嘧啶耐药率分别为91.0%和86.7%;在248株磺胺耐药株中,sul1、sul2和sul3检出率分别为73.8%、74.6%和44.7%。表明sul1和sul2为广东地区主要携带的磺胺类耐药基因,对水禽磺胺类耐药菌株的产生起重要的作用。

水禽源大肠杆菌耐药性及β-内酰胺类和喹诺酮类耐药基因检测分析

为了解广东珠三角地区水禽源大肠杆菌（E.coli）耐药性以及β-内酰胺类和喹诺酮类耐药基因的情况，本研究通过琼脂稀释法测定251株水禽源E.coli对β-内酰胺类和喹诺酮类药物的敏感性，采用PCR方法检测β-内酰胺类和喹诺酮类耐药基因的携带情况。药物敏感性试验结果显示，水禽源E.coli对氨苄西林和阿莫西林的耐药率均高于85 %，对头孢他啶和头孢噻呋的耐药率为24.7 %和31.5 %，对环丙沙星、诺氟沙星、恩诺沙星和萘啶酸耐药率为62.9 %～89.6 %。耐药基因检测结果显示，blaCTX-M、blaTEM和blaOXA的检出率分别为89.2 %、78.4 %和49.4 %；251株水禽源大肠杆菌中均没有检测到qnrA；qnrB和qnrD检出率较低，仅为2.5 %和4 %，qnrS检出率为41.1 %；另外，有43.0 %的E.coli同时携带喹诺酮类和β-内酰胺类耐药基因。研究结果表明广东地区水禽源大肠杆菌对青霉素类和喹诺酮类药物耐药情况较严重，而且β-内酰胺类耐药基因（blaCTX-M、blaTEM和blaOXA）和喹诺酮类耐药基因（oqxB）的检出率均高于49 %，提示临床日益严重的耐药现象与耐药基因普遍存在相关性。

广东地区水禽大肠杆菌血清型鉴定

禽大肠杆菌病是由大肠埃希菌的某些致病性菌株或某些致病血清型引起的一种非接触性传染病。表现为大肠杆菌性败血症、肠炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、肝周炎、眼炎和大肠杆菌性肉芽肿等多种症状。防治大肠杆菌病的主要措施是应用疫苗及抗生素。制备疫苗的最大困难是大肠杆菌血清型众多,仅国内报道就有80余种,并且不同动物及不同地区流行的主要血清型不完全一样。O抗原又称菌体抗原,是大肠杆菌重要的抗原,

传染性法氏囊病病毒VP2基因在昆虫细胞中的表达

本研究将鸡传染性法氏囊病病毒超强毒（very virulent infectious bursal disease virus,vvIBDV）JM-1/10株VP2基因克隆至pcDNA-3.1（＋）启动子CMV之后,随后将CMV-VP2基因序列一同克隆入杆状病毒表达系统的质粒 pFastBacTM Daul中构建了pFast-CMV-VP2。将pFast-CMV-VP2转化Escherichia coli DH10Bac感受态细胞,筛选出重组质粒Bacmid-CMV-VP2。用 Bacmid-CMV-VP2转染Sf9昆虫细胞,获得了重组杆状病毒vBac-CMV-VP2。将该重组杆状病毒转导BHK-21细胞,48~72 h后经间接免疫荧光试验（IFA）检测到VP2蛋白具有特异性荧光;样品经Western blotting分析,结果显示目的蛋白得到表达。结果表明,本试验制备的重组 vBac-CMV-VP2 既能在昆虫细胞中表达,也可在哺乳动物细胞中表达。

广东省水禽源大肠杆菌Ⅰ型整合子的检测分析

为了解广东省水禽源大肠杆菌中Ⅰ型整合子基因盒流行情况,本试验对251株广东地区水禽源大肠杆菌的Ⅰ型整合子进行了检测分析。采用PCR方法扩增Ⅰ型整合酶基因和Ⅰ型整合子基因盒,经限制性内切酶酶切和测序鉴定基因盒插入区。结果显示:98%水禽大肠杆菌检测到Ⅰ型整合酶基因,但只有67.7%大肠杆菌扩增出Ⅰ型整合子基因盒。携带Ⅰ型整合子的大肠杆菌共扩增出8类(A、B、C、D、E、F、G和H)不同的基因盒插入区,其中C类(插入基因为dfrA1-aadA1)检出率最高,高达57.1%(97/170),而A类和H类检出率最低,仅1.15%(2/170)。52株大肠杆菌扩增出2个基因盒,2株大肠杆菌扩增出3个基因盒,分别占携带Ⅰ型整合子大肠杆菌的30.6%和1.15%。结果表明:大肠杆菌Ⅰ型整合子插入的耐药基因盒较多,结构较复杂,促进细菌多重耐药菌株的进化。

广东地区水禽源大肠杆菌对四环素的耐药性及耐药基因检测

采用琼脂二倍稀释法测定256株水禽大肠杆菌分离株对四环素类药物的敏感性,并通过PCR方法调查分离株携带耐药基因tet A、tet B、tet C和tet M的情况。药敏试验结果表明256株水禽大肠杆菌分离株对四环素和多西环素耐药率分别为92.2%和77.3%。在237株大肠杆菌四环素耐药株中,tet A、tet B、tet C和tet M的携带率分别为49.8%、57.8%、49.4%和40.1%,仅8.0%的耐药株没有检测到4种耐药基因。结果表明:tet A、tet B、tet C和tet M广泛存在于水禽源大肠杆菌中。tet A和tet B对水禽源大肠杆菌四环素耐药株的产生起重要作用,主动外排作用是大肠杆菌对四环素产生耐药性的主要机制。

广东地区水禽源大肠杆菌药物敏感性分析

我国是世界上水禽生产量最大的国家，广东省又是我国水禽生产和消费最大的省份之一。然而随着养殖规模的不断扩大，水禽饲养水域环境不断恶化，细菌性疾病的发病率呈上升趋势。大肠杆菌病已成为目前危害水禽养殖较为严重的传染病之一。大肠杆菌病是由大肠杆菌引起，以水禽出现腹膜炎、输卵管炎、气囊炎和眼炎等为特征的细菌性传染病。大肠杆菌菌株的血清型种类众多。禽群难以实施针对性免疫接种，应用抗菌药物防治该病成为非常重要的手段。因此，对该地区水禽源大肠杆菌的耐药性监测是非常必要的。本研究于2011—2014年对广东地区210个水禽养殖场进行细菌分离鉴定，获得256株大肠杆菌，并对其进行药物敏感性分析，以期为该地区临床用药提供科学的理论依据。