人源脐带间充质干细胞修复CCl_(4)诱导大鼠急性肝肾损伤的微生态靶点研究

目的 探索人源脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, HUMSCs)静脉注射对CCl_(4)诱导的大鼠急性肝肾损伤的保护作用和肠道微生态改变。方法 健康SPF级SD大鼠24只,随机分为健康组(8只,经腹腔注射橄榄油溶液3 ml/kg)、CCl_(4)组(8只,经腹腔注射50%CCl_(4)橄榄油溶液,3 ml/kg)和HUMSCs治疗组(8只,在CCl_(4)基础上经尾静脉注射1×10^(6)HUMSCs/ml,每周干预2次,连续干预3周)。3周后处死大鼠,称重肝肾组织,检测肝肾生化指标,并进行肝肾组织的病理学评估和Illumina高通量肠道微生态分析。结果 造模后3周,CCl_(4)组肝肾功能异常升高,HUMSCs治疗后可以显著改善肝肾功能,病理染色提示CCl_(4)组肝脏出现脂肪空泡化结构,肾脏出现肾小球萎缩和肾小管扩张,二者均呈现一定的纤维化改变,HUMSCs治疗组可以显著减轻上述的病理改变。肠道微生态结果发现,HUMSCs干预可以增加乳杆菌属(Lactobacillus)、真细菌属(Eubacterium)和颤螺菌属(Oscillospira)等益生菌的丰度。结论 CCl_(4)暴露后可以诱导大鼠出现急性肝肾损伤,而HUMSCs可以在一定程度上保护肝肾组织,这可能与维持肠道微生态的稳态密切相关,也为干细胞制剂的微生态靶点治疗提供新思路与新方法。

基于结核分枝杆菌分泌抗原的新型结核诊断试剂研究

目的基于克隆表达多个结核分枝杆菌分泌抗原，研制新型结核酶联抗体诊断试剂，并与国家批准上市的同类试剂进行比较。方法克隆表达结核分枝杆菌分泌抗原38kD，CFP10，ESAT6，并将其串联实现嵌合抗原表达，研制间接酶联免疫结核抗体诊断试剂，并与市售同类产品同时检测临床结核病患者结核菌阳性或阴性血清样品。结果47例结核病样品中菌阳35例，菌阴12例，研制的试剂菌阳检出率91．4％（32／35）、菌阴66．7％（8／12），而市场同类产品菌阳检出率88．6％（31／35）、菌阴58．3％（7／12）。研制的试剂与市场同类产品对45例献血员检测特异度分别为95．6％，91.1％。结论结核分枝杆菌嵌合分泌抗原研制的结核酶联抗体诊断试剂具有较好的敏感度和特异度，可用于临床结核病的辅助诊断。

结核分枝杆菌可视化抗体检测蛋白芯片的制备

目的:利用克隆表达的7种结核分枝杆菌优势表位抗原,建立可视化抗体检测蛋白芯片,用于结核病辅助诊断。方法:将7种结核分枝杆菌优势表位抗原,即38kD、ESAT-6、CFP10、MPT64、Mtb8、Mtb8.4和Mtb16.3点于修饰的基片上,制备可检测7种结核抗体的多靶点蛋白微阵列,建立免疫金银染色检测系统;使用该芯片对48例临床结核病患者血液样品进行检测,并与"金标准"痰涂片(48例)和痰培养(其中的29例)检测结果进行比较,分析其敏感性;对30名献血员血液样品进行检测,分析其特异性。结果:可视化抗体检测蛋白芯片的敏感性分别为98.5%和96.6%,而痰涂片和痰培养检测方法的敏感性分别为35.4%和48.3%;可视化抗体检测蛋白芯片的特异性为93.3%。结论:建立的结核分枝杆菌可视化抗体检测蛋白芯片检测敏感性显著高于痰涂片和痰培养方法,可用于结核病的临床辅助诊断,提高痰涂片和痰培养假阴性的检出率。

血管内皮细胞生长因子水平对肺癌预后的影响

目的 探讨血管内皮细胞生长因子 (VEGF)水平对肺癌预后的作用。方法 采用ELISA方法对肺癌组 (112例 )、对照组 (4 8例 )、健康组 (31例 )的血清、尿液及恶性胸腔积液 (4 6例 )和结核性胸腔积液 (31例 )中VEGF水平进行检测 ,并对其进行分析。结果 肺癌组血清VEGF含量 [(5 0 6 .2 2± 36 5 .0 6 ) μg/ml]明显高于对照组 [(2 37.16± 16 8.0 9) μg/ml]和健康组 [(131.32± 99.76 ) μg/ml](P <0 .0 0 1) ;血清VEGF的水平与病变侵袭程度、淋巴结转移、远处转移、生存时间密切相关 ;而与性别、组织学类型无关 ;恶性胸腔积液中VEGF含量 [(937.2 3±4 0 0 .92 ) μg/ml]明显高于结核性胸腔积液组 [(2 5 7.4 1± 36 1.4 7) μg/ml](P <0 .0 0 1) ;肺癌组尿液VEGF水平也明显增高 [(16 7.4 0± 186 .89) μg/ml]。 结论 血清VEGF检测可作为临床预测肺癌患者预后的重要指标之一。

一种结核杆菌融合抗原的克隆表达及活性测定

目的进一步分析优化结核杆菌抗原优势表位,获得高特异性融合抗原,以满足研制结核病检测试剂的需要。方法用分子生物学软件分析结核杆菌四种抗原MPT64、Mtb8、Mtb8.4和Mtb16.3的优势表位后,分别插入到pBVIL1载体中,构建表达质粒,并利用pBVIL1载体特点,将其基因连接后,进行融合表达,经纯化获得抗原,用间接ELISA法测其活性。结果各抗原优势肽段及融合抗原均获得了高效表达,融合抗原的特异性和灵敏性均高于各单一肽段。结论此融合抗原可用于研制结核病的诊断试剂。

酶联免疫斑点术和流式细胞术检测γ干扰素对结核性胸膜炎的辅助诊断价值

目的探讨胸腔积液PEMC中CD4＋T淋巴细胞分泌或产生IFN—γ的检测对结核性胸膜炎的辅助诊断价值。方法分离40例结核性胸腔积液（结核组）和30例恶性胸腔积液患者（疾病对照组）PELVIC，经克隆表达的早期分泌抗原靶6（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP-10）融合蛋白（简称“E／C”）刺激后，用ELISpot检测分泌IFN—γ细胞的斑点形成细胞（SFC）数量和流式细胞术（FCM）结合胞内细胞因子染色检测产生IFN-γ细胞比率，并比较这2项指标在结核组和疾病对照组间的差异，同时评价2种方法检测IFN-γ对结核性胸膜炎的辅助诊断效能。结果PEMC经E／C刺激后用ELISpot检测结核组SFC数量为205（125-450）SFC／5×10^4PEMC，疾病对照组为5（2～18）SFC／5×10^4PEMC，两组间的差异有统计学意义（u=20．00，P〈0．01）；FCM检测结核组CD4＋T淋巴细胞产生1FN—Y细胞比率为3．27％（1．81％-7．34％），疾病对照组为0．12％（0．06％-0．46％），两组问的差异有统计学意义（U=45．00，P〈0．01）。ELISpot检测PEMC经E／C刺激后分泌IFN-γ的敏感度为92．5％（37／40）、特异度为80．0％（24／30）、阳性预测值为0．86、阴性预测值为0．89、阳性似然比为4．63、阴性似然比为0．09和准确度为87．1％；FCM检测经E／C刺激后产生IFN-γ的敏感度为87．5％（35／40）、特异度为90．0％（27／30）、阳性预测值为0．92、阴性预测值为0．84、阳性似然比为8．75、阴性似然比为o．14和准确度为88．6％。结论经E／C刺激后，用FCM和ELISpot检测CD4＋T淋巴细胞产生和分泌IFN—γ细胞的方法对结核性胸膜炎诊断的敏感度和特异度高，且对结核性胸膜炎有辅助诊断价值。

制备两种p53重组腺病毒和流式细胞仪定量外源绿荧光蛋白表达

背景与目的p53作为转录因子,在细胞应激时呈活化型,可调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长,通常通过各种机制可使p53呈现非活化状态,其中包括p53C-末端负调控序列的作用。本研究旨在制备携带全长和缺失这些负调控序列p53的两种重组腺病毒,并采用流式细胞仪散点图(flow cytometry scatter plot,FCM)检测人肺癌细胞外源绿荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)表达。方法利用pAdEasy-Track载体系统,构建两种p53重组质粒并在细菌中产生重组体,转染L293细胞产生三种重组腺病毒,测序证明。三种不同浓度病毒分别感染人肺癌801D细胞,FCM scatter plot检测其GFP表达。结果测序证明重组腺病毒:Ad-p53(del)缺失p53C-末端终止密码子前111个碱基和非编码区,Ad-p53(wtp)无p53碱基缺失。Ad-(empty carrier)无p53。FCM scatter plot显示三种病毒感染801D细胞表达GFP百分率接近并随病毒浓度递增。801D包含了不同荧光强度比率的细胞。结论构建和制备了去C-末端p53和全长p53的两种重组腺病毒:Ad-p53(del)、Ad-p53(wtp)及空载体Ad-(empty carrier)。流式细胞仪散点图证明该病毒试验系统可靠,可定量外源GFP表达为病毒感染细胞选择浓度提供准确方法。

三株肺腺癌单克隆抗体的筛选和初步鉴定

目的：制备肺腺癌单克隆抗体,筛选具有较高肺癌亲和性的单克隆抗体。方法：通过杂交瘤技术制备一组肺转移腺癌H2009细胞特异性单克隆抗体,以一定通量的细胞ELISA正、负筛选,初步确定抗体的肺癌特异性,经过色谱技术获得高纯抗体,免疫印迹确定抗体识别细胞膜蛋白分子量大小,应用流式细胞分析和免疫组化进一步分析对肺癌组织结合的特异性。结果：筛选出19株高结合肺腺癌细胞系,弱结合或不结合正常肺上皮细胞的杂交瘤,类别鉴定均为Ig M,通过亲硫色谱纯化杂交瘤培养上清获得高纯度抗体,其中三株抗体7C1、9H4和11C10均识别细胞膜蛋白,分子量介于20-110 k D,条带清晰,经病理组织验证7C1和9H4具有较好的肺癌组织亲和性,而对正常肺上皮阴性或弱染色;单抗11C10除结合肺癌上皮组织外,对肺正常上皮和乳腺正常上皮细胞也呈一定阳性反应,结合蛋白低水平泛表达于上皮来源细胞。结论：通量筛选出三株杂交瘤,初步确定具有较好的肺腺癌特异性,为深入探讨它们识别的抗原及相关的肺癌免疫研究奠定了基础。

结核分枝杆菌IS6110探针的克隆化

目的 制备克隆化结核分枝杆菌IS61 1 0探针。方法 将IS61 1 0的PCR扩增 2 4 5bp片段克隆至质粒载体pCR2 .1中。结果 得到了含有IS61 1 0克隆化 2 4 5bp的质粒菌株。结论 克隆化的探针易操作且一致性较好。

制备两种P53重组腺病毒和流式细胞仪定量外源绿荧光蛋白表达

目的P53作为转录因子在细胞应激时呈活化型，调控细胞周期和程序性死亡抑制肿瘤生长，通常，通过各种机制P53呈非活化状态，其中包括P53C-末端负调控序列的作用。该研究目的是制备携带垒长和缺失这些负调控序列P53两种重组腺病毒和用流式细胞仪散点图（Flow cytometry scatter plot，FCM）检测人肺癌细胞外源绿荧光蛋白（Green fluorescence protein，GFP）表达。材料和方法利用pAdEasy-Track载体系统，构建两种P53重组质粒并在细菌中产生重组体，转染L293细胞产生三种重组腺病毒。三种不同浓度病毒分别感染人肺癌801D细胞，FCM分析GFP表达。结果测序证明重组腺病毒：Ad—P53（del）缺失p53C-末端终止密码子前111个碱基和非编码区，Ad—P53（wtp）没有P53碱基缺失。Ad（empty carrier）无P53。FCM scatter plot显示三种病毒感染801D细胞表达GFP百分率接近并随病毒浓度递增。801D包含了不同荧光强度比率的细胞。结论构建和制备了去C-末端P53和全长p53两种重组腺病毒，Ad—p53（del），Ad-p53（wtp）及空载体Ad-（empty）。流式细胞仪散点图证明该病毒试验系统可靠，可定量外源GFP表达，为病毒感染细胞选择浓度提供准确方法。

自身免疫性疾病患者PD-L1自身抗体的筛查

目的调查自身免疫性疾病和结核病患者PD—L1自身抗体产生情况。方法以重组人PD-L1蛋白为抗原，间接ELISA和免疫印迹法对血清样本进行测定，包括63例类风湿性关节炎（RA）、38例系统性红斑狼疮（SLE）、42例强直性脊柱炎（AS）、28例干燥综合征（ss）、50例结核病（TB）和60例健康人对照。结果ELISA结果显示，与健康人对照组（0．1317±0．0284，N=20）相比，RA（0．1996±0．0579，P〈0．0001）、SLE（0．1689±0．0338，P=0．0005）和AS组（0．1729±0．0619，P=0．0107）PD-LI自身抗体水平显著增高，而SS组（0．1341±0．0397，P=0．6834）无显著性差异。与健康人对照组（0．1541±0．0139，N=40）相比，结核病组（0．1709±0．1069，P=0．4215）PD—L1自身抗体水平无显著差异，但存在ELISA检测阳性个体，经免疫印迹证实存在PD—L1自身抗体。在46％RA、26％SLE、29％AS、1l％SS和12％TB中可检出PD-L1自身抗体，而健康人对照组未检出。结论自身免疫性疾病可检测到PD-L1自身抗体，此为进一步研究PD-L1与免疫相关疾病和免疫检查点调控机理奠定了基础。

血管内皮细胞生长因子水平对肺癌预后的影响

目的探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平对肺癌预后的作用。方法采用ELISA方法对肺癌组(112例)、对照组(48例)、健康组(31例)的血清、尿液及恶性胸腔积液(46例)和结核性胸腔积液(31例)中VEGF水平进行检测，并对其进行分析。结果肺癌组血清VEGF含量[(506．22±365．06)μg/ml]明显高于对照组[(237．16±168．09)μg/ml]和健康组[(131．32±99．76)μg/ml(P<0．001)；血清VEGF水平与病变侵袭程度、淋巴结转移、远处转移、生存时间密切相关；而与性别、组织学类型无关；恶性胸腔积液中VEGF含量[(937．23±400．92)μg/ml]明显高于结核性胸腔积液组[(257．41±361．47)μg/ml](P<0．001)；肺癌组尿液VEGF水平也明显增高[(167．40±186．89)μg／ml]。结论血清VEGF检测可作为临床预测肺癌患者预后的重要指标之一。

卡介苗缺失免疫显性抗原在结核病血清学检测中的作用

目的探讨卡介苗（BCG）缺失免疫显性抗原在结核病血清学检测中的作用。方法选取主流结核病血清学检测抗原的四种不同组合试剂A（结核分枝杆菌抗体IgG检测试剂）、B（结核分枝杆菌抗体检测试剂）、C（结核杆菌TB特异性抗体检测试剂）、D（活动性结核抗体检测ELISA系统），通过免疫印迹、胶体金和酶联免疫吸附等免疫学方法检测109例活动性结核患者和97名健康人群（分为结核菌素纯蛋白衍生物PPD阳性和阴性组）的结核抗体，应用贝叶斯概率统计学方法，综合分析不同抗原组合对结核病检测准确率的影响。结果试剂A、B、C、D对活动性结核病IgG检出率分别是80．0％、66．7％、80．7％、56．0％，明显高于健康人群的23．9％、8．9％、6．6％、1．0％，差异均有统计学意义（χ^2值分别为47．53，51．59，90.48，69．68，均P〈0．01）。其中A、B试剂对健康人群结核抗体检出率随PPD阳性反应强度而增高（χ^2值分别为2．124，2．220，均P〈0．05），C、D试剂对健康人群结核抗体检出率与PPD反应强度无相关性（χ^2值分别为0．122，0．479，均P〉0．05），试剂D的准确率最高，其对活动性肺结核患者IgM检出率为2．1％。结论IgG检出的敏感性与抗原的选择及组合数量呈正相关，高的检测敏感性常伴随特异性的损失，选择BCG缺失抗原可显著提高检测特异性。

天然调节T细胞与结核病免疫病理关联

目的检测调节性T细胞（Tr）在结核病病人是否增高，确证Tr与结核免疫病理的关联性，为Tr功能研究提供疾病模型。方法流式细胞术（FACS）分选CD3＋CD4＋T及CD3＋CD8＋T等主要淋巴细胞亚群，通过RT—PCR测定Foxp3基因在正常和结核病病人T细胞亚群中的表达，FACS多色分析Foxp3T细胞在CD4＋CD25＋细胞群体中的分布，累积病例分析Tr细胞在外周血扩增情况，免疫组化方法分析Tr在结核病理的浸润，结合临床资料分析Tr数量的改变与结核病的关联性。结果Foxp3基因在正常和结核病病人CD3＋CD4＋T细胞中特异性扩增，FACS分析表明Foxp3F要表达于CD4＋CD25＋。“亚群中，占CD4＋CD25highT细胞的80％以上，以CD4＋CD25highFoxp3＋三联标志检测40例正常与51例活动性结核病病人外周血Tr占CD4＋T细胞比例分别为（0．23±0．20）％和（1．01±1．00）％，结核病病人较正常人高4．4倍，Tr在结核病明显扩增（P〈0．01），结核病理组织中有高频率Foxp3＋细胞浸润。Tr扩增与结核病有效治疗和预后的关联性有深入探讨价值。结论Tr细胞在结核病病人增高，并与结核免疫病理损伤相关，结核病可作为Tr细胞功能研究的疾病模型。

结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38kD-ESAT6-CFP10的构建与抗原性初步检测

目的为了提高结核病诊断试剂的特异性和敏感性,构建了结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38 kD-ESAT6-CFP10,并且采用双抗原夹心ELISA方法初步分析了该融合抗原的抗原性。方法运用生物学软件分析抗原优势肽段并模拟其串联后的三维结构,以确保串联后仍保持良好的抗原性。通过PCR方法分别扩增38 kD、ESAT-6和CFP10抗原优势肽段基因并将其进行连接,然后将融合基因分别连接入pBVIL1和pGEX-4T-2表达载体,在大肠杆菌菌株DH5α中进行表达。将两种不同载体表达的38 kD-ESAT6-CFP10融合抗原分别作为包被抗原和标记抗原,以双抗原夹心ELISA方法初步评价其抗原性。结果获得了38 kD、ESAT-6和CFP10的抗原优势肽段融合抗原38 kD-ESAT6-CFP10,并在大肠杆菌中进行了高效表达,初步验证所获得的抗原具有良好的抗原性。结论该种抗原优势肽段融合抗原有望成为结核病血清学诊断的重要候选抗原,并且双抗原夹心ELISA方法有助于提高检测的特异性和敏感性。

DNA指纹技术方法学的建立及在结核分支杆菌菌株鉴定中的应用

目的探讨结核分支杆菌ＤＮＡ指纹技术的方法学及其在结核分支杆菌菌株鉴定中的应用。方法以结核分支杆菌染色体ＤＮＡ插入序列ＩＳ６１１０为基础，根据不同来源的结核分支杆菌菌株ＤＮＡ相异的ＩＳ６１１０拷贝数和相对分子质量，应用增强化学发光标记技术对结核分支杆菌ＤＮＡ酶切产物进行杂交和检测。结果不同来源的５０例结核患者临床分离株具有相异的ＤＮＡ指纹图谱。同一患者痰和膝关节脓培养阳性的结核分支杆菌菌株ＤＮＡ指纹图谱有较大的差异。人工诱导的结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ氧氟沙星耐药株和敏感株有一致的ＤＮＡ指纹图谱。

酶联免疫斑点术和流式细胞术检测γ干扰素对结核性胸膜炎的辅助诊断价值

目的 探讨胸腔积液PEMC中CD＋4T淋巴细胞分泌或产生IFN-γ的检测对结核性胸膜炎的辅助诊断价值.方法 分离40例结核性胸腔积液（结核组）和30例恶性胸腔积液患者（疾病对照组）PEMC,经克隆表达的早期分泌抗原靶6（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP-10）融合蛋白（简称＂E/C＂）刺激后,用ELISpot检测分泌IFN-γ细胞的斑点形成细胞（SFC）数量和流式细胞术（FCM）结合胞内细胞因子染色检测产生IFN-γ细胞比率,并比较这2项指标在结核组和疾病对照组间的差异,同时评价2种方法检测IFN-γ对结核性胸膜炎的辅助诊断效能.结果 PEMC经E/C刺激后用ELISpot检测结核组SFC数量为205（125 ～450）SFC/5×104PEMC,疾病对照组为5（2～18）SFC/5×104PEMC,两组间的差异有统计学意义（U=20.00,P〈0.01）;FCM检测结核组CD＋4T淋巴细胞产生IFN-γ细胞比率为3.27%（1.81%～7.34%）,疾病对照组为0.12%（0.06%～0.46%）,两组间的差异有统计学意义（U=45.00,P〈0.01）.ELISpot检测PEMC经E/C刺激后分泌IFN-γ的敏感度为92.5%（37/40）、特异度为80.0%（24/30）、阳性预测值为0.86、阴性预测值为0.89、阳性似然比为4.63和阴性似然比为0.09,准确性为87.1%;FCM检测经E/C刺激后产生IFN-γ的敏感度为87.5%（35/40）、特异度为90.0%（27/30）、阳性预测值为0.92、阴性预测值为0.84、阳性似然比为8.75和阴性似然比为0.14,准确性为88.6%.结论 经E/C刺激后,用FCM和ELISpot检测CD＋4T淋巴细胞产生和分泌IFN-γ细胞的方法对结核性胸膜炎诊断的敏感度和特异度高。

流式细胞术检测特异性刺激后淋巴细胞亚群变化对结核性胸腔积液的诊断价值

目的应用流式细胞术检测胸腔积液单个核细胞经早期分泌抗原靶蛋白-6（ESAT-6）／培养滤过蛋白-10（CFP-10）融合蛋白刺激后Th1、Th2细胞百分率，探讨结核性胸腔积液局部抗原特异性Th1、Th2反应特点及对结核性胸膜炎的诊断价值。方法2008年9月至2009年3月期间在北京胸科医院收治的结核性胸腔积液40例为结核组，其中男30例，女10例；年龄16～53岁，平均（29±12）岁；同期收治的恶性胸腔积液患者30例为肿瘤组，其中男23例，女7例；年龄35～65岁，平均（47±15）岁。分离胸腔积液单个核细胞并冻存，经细胞复苏、与抗原共培养（同时设立阴性对照和阳性对照），应用流式细胞内细胞因子染色技术检测抗原特异性Th1、Th2细胞百分率。两组问正态分布数据采用t检验，非正态分布数据采用Wilcoxon检验。结果结核组单个核细胞经抗原刺激后Th1百分率及Th1／Th2比值的中位数（四分位间距）分别为3．06％（1．59％～6．92％）和17．00（7．38～35．53），显著高于阴性对照[0．38％（0．02％～1．80％）和3．59（0．49—25．09）]和肿瘤组[0．12％（0．05％～0．39％）和1．05（0．25～2．52）]，差异均有统计学意义（Z值为-6．624～-3．314，均P〈0．01），Th2细胞百分率（0．22±0．19）％显著高于阴性对照（0．10±0．08）％，差异有统计学意义（t=4．108，P〈0．01）；与肿瘤组[（0．15±0．02）％]比较，差异无统计学意义（t=1．954，P〉0．05）。Th1诊断结核性胸腔积液的曲线下面积（0．937）和敏感度（85．4％）显著高于Th1／Th2（0．883和81．5％），两种方法的特异度一致（均为90．6％）。结论结核性胸腔积液中ESAT-6／CFP-10融合蛋白特异性Th1、Th2反应为以Th1占明显优势的Th1／Th2混合反应，Th1和Th1／Th2有望成为流式细胞内细胞因子染色技术鉴别结核性与恶性胸腔积液的指标。

卡介苗缺失免疫显性抗原在结核病血清学检测中的作用

目的探讨卡介苗（BCG）缺失免疫显性抗原在结核病血清学检测中的作用。方法选取主流结核病血清学检测抗原的4种不同组合试剂A（结核分枝杆菌抗体IgG检测试剂）、B（结核分枝杆菌抗体检测试剂）、C（结核杆菌特异性抗体检测试剂）、D（活动性结核抗体检测ELISA系统），通过免疫印迹、胶体金和酶联免疫吸附等免疫学方法检测109例活动性结核患者和97名健康人群[分为结核菌素纯蛋白衍生物试验（PPD）阳性和阴性组]的结核抗体，应用贝叶斯概率统计学方法，综合分析不同抗原组合对结核病检测准确率的影响。结果试剂A、B、C、D对活动性结核病IgG检出率分别是80．0％、66．7％、80．7％、56．0％，明显高于健康人群的23．9％、8．9％、6．6％、1．0％，差异均有统计学意义（X2值分别为47．53，51．59，90．48，69．68，均P〈0．01）。其中试剂A、B对健康人群结核抗体检出率随PPD阳性反应强度而增高（X2值分别为2．124，2．220，均P〈0．05），试剂C、D对健康人群结核抗体检出率与PPD反应强度无相关性（X2值分别为0．122，0．479，均P〉0．05），试剂D的准确率最高，其对活动性肺结核患者IgM检出率为2．1％。结论IgG检出的敏感性与抗原的选择及组合数量呈正相关，高的检测敏感性常伴随特异性的损失，选择BCG缺失抗原可显著提高检测特异性。

小鼠4-1BB分子的配体识别主要区域定位及结构分析

目的明确4-1BB分子的配体结合4-1BB分子胞外区的关键区域和基本结构。方法分区表达鼠4-1BB胞外区结构域及其天然配体，利用ELISA和Western blot等方法对4—1BB分子的配体识别结构域进行定位。结果4—1BB分子半胱氨酸富集结构域（cysteine-rich domain，CRD）Ⅱ是配体结合的主要结构域，不结合CRDⅠ和CRDⅢ。免疫刺激性抗4-1BB单克隆抗体2A，主要结合4—1BB分子CRD与跨膜区之间的连接区（STP区），同时对包括CRDⅡ的各个CRDs有弱识别，可封阻4-1BB与其配体结合。结论4-1BB分子配体的主要识别区位于4-1BB分子胞外CRDⅡ，具有空间结构特点，此为进一步分析结合区及其关键氨基酸提供了资料。