泡叶藻聚糖脱色工艺的研究

为了选取最优的脱色工艺以脱除泡叶藻(Ascophyllum nodosum)聚糖发色基团或物质,通过比较活性炭吸附、有机溶剂(甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮和四氢呋喃)萃取、大孔树脂(D101、D101-1、DM130)吸附、H_2O_2氧化等不同脱色方法对泡叶藻聚糖脱色效果的影响,研究结果表明,H_2O_2氧化法优于大孔树脂吸附法、活性炭吸附法和有机溶剂萃取法。进一步以脱色时间、脱色温度、H_2O_2质量分数和脱色pH值为因素,进行单因素试验确定关键影响因素及其水平,并采用L9(34)正交设计进行试验,以泡叶藻聚糖的白度值和脱色后聚糖保留率为指标,并分析脱色后的泡叶藻聚糖对诱导小鼠吞噬细胞RAW264.7生成一氧化氮活性的影响,筛选出具有较好保留泡叶藻聚糖免疫诱导潜力的H_2O_2氧化法的脱色工艺条件。结果表明,H_2O_2氧化法脱除泡叶藻聚糖发色基团或物质最佳工艺条件为:H_2O_2质量分数8.6%,脱色时间4.0 h,脱色温度60℃,pH值11.0,泡叶藻聚糖白度值达到(61.05±1.12)%,提高了4.1倍,聚糖保留率为(90.02±0.03)%。

泡叶藻聚糖低分子质量降解片段组成特征及其体外免疫诱导活性

目的:对从泡叶藻(Ascophyllum nodosum)中提取的泡叶藻聚糖进行化学法降解,将得到的低分子质量降解产物进行分离纯化,分析其基本组成特征和体外免疫诱导活性,为泡叶藻聚糖或其他海藻多糖的生物活性和基本结构特征研究提供参考。方法:通过酸水解法和双氧水氧化降解法制备泡叶藻聚糖低分子质量降解片段,利用超滤法和Sephadex G-50凝胶柱层析分离纯化得到4个泡叶藻聚糖低分子质量片段:HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F1、H2O2-F2;采用对氨基苯甲酸乙酯柱前衍生样品后进行高效液相色谱及化学方法分析其单糖组成和化学组成;采用高效分子排阻色谱法测定其重均分子质量;通过小鼠巨噬细胞RAW264.7模型分析HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F1、H2O2-F2的体外免疫诱导活性。结果:泡叶藻聚糖低分子质量片段的组成特征表明HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F1、H2O2-F2均为杂多糖,且单糖组成存在较大差异,其重均分子质量分别为4.80、4.20、5.30、2.30 kDa。免疫活性分析细胞模型结果表明,HCl-F1、HCl-F2、H2O2-F2在所测定质量浓度范围(0~200μg/mL)内能明显诱导RAW264.7细胞活化,释放NO和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),而H2O2-F1诱导RAW264.7细胞释放NO和TNF-α的活性明显低于HCl-F1、HCl-F2和H2O2-F2。结论:泡叶藻聚糖低分子质量降解片段(HCl-F1、HCl-F2和H2O2-F2)具有明显的免疫诱导活性,其中HCl-F1和H2O2-F2的免疫诱导活性明显高于泡叶藻聚糖。结合其化学组成分析的结果,提示泡叶藻聚糖低分子质量降解片段的免疫诱导活性是由单糖组成和硫酸根质量分数共同决定的。

响应面法优化纤维素酶辅助从泡叶藻中提取泡叶藻聚糖的工艺

通过单因素实验研究纤维素酶辅助提取泡叶藻聚糖时液料比、酶添加量、酶解温度、酶解时间等关键因素对泡叶藻聚糖提取率的影响,并进一步采用Box-Behnken实验设计和响应面分析法优化其工艺参数.结果表明,纤维素酶辅助提取泡叶藻聚糖的优化工艺条件为液料比30 mL/g、酶浓度200 IU/mL、酶解时间2.0 h、酶解温度50℃,该条件下多糖提取率为14.65%±0.73%,与模型预测值14.75%非常接近,采用响应面法对泡叶藻聚糖提取条件进行优化合理可行.