基于Keap1/Nrf2/HO-1信号通路研究当归醇提物对多囊卵巢综合征大鼠的保护作用

目的使用来曲唑联合高脂饮食建立多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)大鼠模型,探讨当归醇提物(ethanol extract of Angelicae Sinensis Radix,EEA)对PCOS大鼠的保护作用及其作用机制。方法来曲唑联合高脂饮食诱导雌性SD大鼠建立PCOS模型,并用EEA干预。阴道涂片染色、HE染色、酶联免疫吸附法(ELISA)和生化指标检测评价EEA对PCOS大鼠的治疗作用,并通过荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测EEA对Keap1/Nrf2/HO-1信号通路的影响。结果阴道涂片和HE染色结果表明,EEA改善了PCOS大鼠动情周期紊乱和卵巢组织病变,ELISA和生化指标检测结果表明EEA可以调节激素紊乱,改善血脂异常;且在模型组中Keap1蛋白和mRNA表达明显上调,Nrf2和HO-1蛋白和mRNA表达明显下调而经过EEA治疗后Keap1蛋白和mRNA表达明显下调,Nrf2和HO-1蛋白和mRNA表达明显上调(P<0.05或P<0.01)。结论EEA可以减轻大鼠PCOS,其机制可能是通过促进Keap1/Nrf2/HO-1信号通路,从而抑制氧化应激。

杠板归总黄酮对小鼠酒精性肝损伤的保护作用

【目的】探究杠板归总黄酮的保肝药作用及其作用机理,为杠板归的深入研究提供活性物质基础和理论依据。【方法】随机将60只小鼠分为正常组、模型组、联苯双酯阳性组(150 mg/kg)及杠板归黄酮高剂量组(600 mg/kg)、中剂量组(400 mg/kg)、低剂量组(200 mg/kg),除正常组外,其余各组按16 m L/kg剂量灌胃56%vol白酒,1 h后各用药组按20 m L/kg剂量灌胃给药,正常组和模型组灌胃等体积蒸馏水,连续给药14 d,然后通过计算肝脏指数(LI)、脾脏指数(SI)、胸腺指数(TI),生化测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD),ELISA检测肝组织中白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等,探究杠板归总黄酮对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。【结果】各杠板归总黄酮剂量组可有效降低因酒精性肝损伤引起小鼠升高的LI,并升高SI和TI;又能降低血清ALT、AST活性及MDA含量,升高SOD活性;还可降低酒精性损伤肝组织中的IL-4、IL-6和TNF-α含量,且对小鼠肝小叶结构、肝细胞坏死和变性及炎细胞浸润等方面均有改善作用,尤其以杠板归总黄酮高、中剂量组的效果最明显。【结论】杠板归总黄酮对小鼠急性酒精性肝损伤具有保护作用,其机理是通过抗脂质过氧化、抑制肝脏炎症反应来实现保肝作用。

牛Ⅱ型胶原诱导SD大鼠类风湿关节炎模型的建立

【目的】探讨牛II型胶原诱导SD大鼠构建类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)模型的可行性,为今后深入研究RA提供理想的动物模型。【方法】选择60只4周龄的SD大鼠,依据体重相近的原则随机分组(模型组50只,对照组10只),模型组通过注射牛Ⅱ型胶原建模,并通过体征观察、病理组织切片评价、钼靶影像学检测等判定建模是否成功。【结果】通过尾静脉注射牛Ⅱ型胶原免疫SD大鼠的建模成功率高达90.0%。与对照组SD大鼠相比,模型组SD大鼠体重减轻,活动减少,精神萎靡,先是后足小趾或踝关节红肿,之后炎症漫延至前肢,最终发展成慢性、多发性、对称性关节炎;模型组SD大鼠关节滑膜层次增多,且有大量炎性细胞浸润,软骨及骨组织受损,关节腔结构紊乱;模型组SD组大鼠从初次免疫第10周开始,其关节间隙狭窄、模糊,骨质疏松,关节软骨及骨组织受损。【结论】SD大鼠是研究RA发病机制及研发抗风湿药物的理想动物模型,可丰富该疾病动物模型的选择。

局部脑缺血食蟹猴动物模型的建立

目的:构建局部脑缺血食蟹猴动物模型,从而为局部脑缺血的研究提供必要的条件。方法:选择10只健康的食蟹猴,采用血管介入法从股动脉插管,将微导管超选至大脑中动脉(middlecerebralartery,MCA)M1分支,注入自体血栓堵塞其血管、阻断其血流。结果:栓塞后,通过数字影像血管造影系统(DSA)照影MCAM1分支血管显影不良;栓塞1h后CT灌注成像可见急性局部脑缺血病灶;48h后进行CT平扫可见低密度陈旧性局部脑缺血病灶。对2例尸体进行解剖,取出大脑组织TTC染色呈阳性;其余动物清醒后均表现出不同程度的脑缺血症状与体征。结论:用超选MCA自体白色血栓可建立稳定的猴局部脑缺血模型,因该动物模型是目前最接近临床病例的模型,对脑卒中的发生发展机制的研究、诊断及治疗,特别是溶栓治疗有着切实的临床前期应用价值。

甘蔗汁对大鼠酒精性肝损伤的保护作用

[目的]通过建立大鼠酒精性肝损伤病理模型,探讨甘蔗汁对大鼠酒精性肝损伤的保护作用。[方法]取大鼠40只随机分为4组,正常组、低剂量组、高剂组量和模型组。采用白酒灌胃的方法建立大鼠酒精性肝病模式,给予甘蔗汁进行保护。测定肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量,并取肝组织制作石蜡切片,HE染色,普通光镜观察。[结果]甘蔗汁能够直接提高SOD活性、降低MDA含量,且低剂量(7.5 m l/kg)和高剂量(15 m l/kg)能够有效清除活性氧和自由基,明显改善肝组织脂肪样变。[结论]甘蔗汁能抑制酒精诱导脂质过氧化反应对肝组织的损伤,对酒精性肝损伤有明显的保护作用。

医学院校生物技术大实验课程教学改革探讨

本文针对我校目前在生物技术专业开设的生物技术大实验课程教学过程中所采用的方法进行探讨,总结存在的不足及取得的成绩。在不继改革的基础上结合专业及课程特点,尝试开展了"两步法"(必做模块和选作模块的实验)教学模式,采取创新型和研究型实验教学体系,培养学生的综合技能,提高实验操作水平。

浅谈实验动物小鼠的繁殖

生命科学的研究发展过程中,离不开实验动物科学,而它的形成是通过动物实验逐步积累的过程。但是,科学研究快速发展的今天,事实上实验动物的应用研究早已不单单是用在生命科学领域了,而且是确保现代科学实验研究必需的条件之一。不同领域的科学研究当中,比如标准试验、对照试验、效果试验、安全试验等,实验动物在其中充当不可缺少的角色。而实验动物当中的小鼠是应用面最广、应用数量最多的动物。因此,对于小鼠饲养管理以及繁殖技术越来越受大家的重视。现就此谈谈小鼠的繁殖技术及其影响因素。

构建动物实验公共平台 培养医学研究生科研创新能力

一个民族进步、一个国家富强发达离不开创新,培养具备创新能力的高素质人才是国家发展的要求、时代所需。研究生作为国家科技创新的承担者,科研创新能力培养作为研究生教育的核心内容,也是培养质量的重要标志。动物实验是医学研究生在科学研究过程中不可缺少的重要环节,也是培养医学研究生科研创新能力的一项重要措施。介绍了构建我校动物实验公共平台的必要性,动物实验公共平台在医学研究生科研创新能力培养中发挥的作用。

海马认知障碍对血脂水平的影响及其与肝脏HMG-CR表达的关系

目的探讨海马认知障碍对血脂水平的影响及其与肝脏3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMG-CR)表达的关系。方法采用Aβ1~42大鼠海马内注射构建认知障碍模型,全自动生化分析仪检测血脂水平,半定量反转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测肝脏HMG-CR m RNA的表达,蛋白印迹法检测肝脏HMG-CR的表达。结果 1实验组大鼠甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)分别为(2.30±0.08)mmol/L、(4.60±0.10)mmol/L、(2.41±0.06)mmol/L,与假手术组和对照组相比均显著升高(P<0.05)。2实验组大鼠肝脏HMG-CR m RNA表达水平为0.49±0.03,明显高于假手术组和对照组(P<0.05)。3实验组大鼠肝脏HMG-CR表达水平为0.50±0.02,显著高于假手术组与对照组(P<0.05)。结论海马认知障碍可引起大鼠血脂水平升高,其机制可能与认知障碍大鼠肝脏HMG-CR表达水平升高有关。

三叶木通总黄酮对急性肝损伤小鼠的保护作用及机制研究

目的:研究三叶木通总黄酮对四氯化碳(CCl_4)诱发的急性肝损伤小鼠的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法:各组小鼠灌胃给予药物或溶剂干预10 d后,腹腔注射0.1%CCl_4花生油溶液建立急性肝损伤模型。生化法检测小鼠血清中门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)的含量,蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测肝组织中核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达,HE染色观察肝组织病理学改变。结果:与模型组比较,三叶木通总黄酮能显著降低小鼠血清AST、ALT活性,提高血清SOD、GSH-Px活性,降低血清MDA及肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6含量,下调肝组织NF-κB蛋白表达,并改善肝组织病变。结论:三叶木通总黄酮对CCl_4诱导的急性肝损伤小鼠具有保护作用,其保肝作用机制可能与抗氧化和抑制炎症反应有关。

山茱萸提取物对认知障碍大鼠海马神经元的保护作用

【目的】明确山茱萸提取物对认知障碍大鼠海马神经元的保护作用及其机制,为开展中药治疗认知障碍的深入研究提供科学依据。【方法】以柠檬酸铝和亚硝酸钠联合腹腔注射60 d建立40只认知障碍大鼠模型,随机分为模型组及山茱萸提取物低、中、高剂量组,分别以4、8和12 g/(kg·d)的山茱萸提取物连续灌胃4周后,利用Morris水迷宫检测各组大鼠的认知功能,采用尼氏染色法观察大鼠海马神经元存活状态,并以TUNEL法检测大鼠海马神经元的凋亡情况。【结果】与模型组相比,山茱萸提取物高、中剂量组大鼠爬上平台所需时间极显著缩短(P<0.01,下同),跨越平台次数极显著增加;山茱萸提取物低剂量组大鼠爬上平台所需时间与模型组间无显著差异(P>0.05),但跨越平台次数显著增加(P<0.05,下同)。山茱萸提取物高、中、低剂量组大鼠海马CA1区神经元尼氏小体数目明显增加,着色加深,对应的平均光密度值分别为0.46±0.11、0.39±0.06和0.32±0.06,均显著高于模型组;山茱萸提取物低、中、高剂量组大鼠海马CA1区绿色荧光标记的神经元数量逐渐减少,凋亡指数逐渐降低,对应的凋亡指数分别为(24.20±3.45)%、(16.33±5.68)%和(9.56±2.80)%,显著或极显著低于模型组[(38.78±4.36)%]。【结论】山茱萸提取物可有效改善认知障碍大鼠在Morris水迷宫中的游泳轨迹,其海马CA1区神经元尼氏小体数目增加、着色加深,绿色荧光标记的神经元逐渐减少,凋亡指数逐渐降低,即山茱萸提取物对大鼠认知功能的保护作用可能与海马CA1区神经元功能改善有关。

猴局部脑缺血模型的建立及t-PA溶栓效果的评价

目的探讨猴脑缺血模型的建立及组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)在该模型中的溶栓效果。材料与方法对21只成年食蟹猴,术前做CT平扫及介入血管造影排除脑血管及颅内病变,行介入法于大脑中动脉注入自体血栓造成大脑中动脉血栓栓塞(MCAo);再经介入血管造影和CT灌注扫描证明栓塞成功,术后30mic颈内动脉t-PA灌注溶栓,术后2h再次做CT灌注扫描和(或)介入血管造影确认溶栓成功,术后14天连续观察行为学表现。结果21只实验动物中,3只手术前发现病变,未行手术(占14.3%)。18只进行手术的动物中,共有17只DSA及CT灌注扫描证实栓塞成功,成功率94.4%,1只栓塞后介入血管造影及CT灌注扫描均未发现明显缺血,动物麻醉复苏后无脑缺血的行为学表现,占5.6%。17只栓塞成功的动物中13只发现明显血管闭塞、消失(占76.5%),4只表现为部分血管分支显影不良(占23.5%),1只由于栓塞体积过大死亡,1只手术后因穿刺部位出血而死亡,手术死亡率为11.1%。将栓塞术成功并存活的15只动物随机分成两组,8只作为假治疗组;7只为溶栓组,其中1只由于溶栓后颅内出血死亡,溶栓后死亡率为14.3%。MCAo后CT灌注扫描可见缺血区对比剂平均通过时间(MTT)明显增高,和对侧相同区域比较有明显差异。结论(1)血管介入法导入自体血栓制作猴脑缺血模型,手术创伤小,能降低动物的死亡率,增加手术的稳定性;(2)t-PA溶栓治疗脑缺血可以增加脑血流量,改善神经功能。

自体白色血栓性猴局部脑缺血模型的建立

目的探讨自体白色血栓在局部脑缺血动物模型制作中的作用与意义。方法自体白色血栓经血管介入造影法准确导入至猴大脑中动脉(middlecerebralartery,MCA)M1分支。结果栓塞后:数字影像血管造影系统(DSA)照影提示大脑中动脉M1分枝血管显影不良;1h后CT灌注成像可见急性局部脑缺血病灶;72h后CT平扫可见低密度陈旧性局部脑缺血病灶。两例进行尸体解剖,大脑TTC染色呈阳性;存活动物均有不同程度的脑缺血症状与体征。结论用自体白色血栓可建立稳定的猴局部脑缺血模型,因该动物模型是目前最接近临床病例的模型,对脑卒中的发生发展机制的研究、诊断及治疗,特别是溶栓治疗有着切实的临床前期应用价值。

狗肝菜多糖对肝纤维化MAPK信号通路调控作用的研究

目的:研究狗肝菜多糖对大鼠肝纤维化MAPK信号通路的调控作用及机制。方法:将90只大鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱(0.1 mg/kg)阳性组及狗肝菜多糖高(300 mg/kg)、中(150 mg/kg)、低(75 mg/kg)剂量组,每组15只。除正常对照组外,其余各组大鼠均腹腔注射0.5%DMN溶液(1.5 m L/kg),隔天1次,连续8w。造模同时秋水仙碱组与狗肝菜多糖各组按剂量灌胃给药,正常对照组与模型组灌胃等体积蒸馏水,第8周末取血和收集肝脏。酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C和血清Hyp、NO含量;肝脏病理组织经Masson染色加以验证;Western blot检测肝组织MAPK信号通路中JNK、ERK、p38相关蛋白及相应磷酸化蛋白的表达情况。结果:与模型组比较,狗肝菜多糖能显著降低肝纤维化大鼠肝组织HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C及血清Hyp、NO含量,并能降低肝组织p-JNK、p-ERK、p-p38蛋白表达;Masson染色结果与之呈一致性。结论:狗肝菜多糖可抑制HF大鼠MAPK信号通路的活化,从而缓解或阻止HF的进程。

基于JAK2/STAT3信号通路研究七味净肝灵保肝作用机制

目的:基于JAK2/STAT3信号通路研究七味净肝灵的保肝作用机制。方法:将60只小鼠随机分为正常对照组、模型组、水飞蓟宾(0.5 g/kg)阳性对照组及七味净肝灵高(20 g/kg)、中(10 g/kg)、低(5 g/kg)剂量组,每组10只。各给药组小鼠均按相应剂量灌胃给药,正常对照组与模型组灌胃等体积注射用水,1次/d,共7 d。末次给药后,正常对照组腹腔注射花生油,其余各组均按10 mL/kg腹腔注射0.12%CCl4花生油建立急性肝损伤模型。禁食不禁水24 h后,测定血清ALT、AST、MDA、SOD、GSH-Px水平及肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测肝组织SOCS-3、p-JAK2及p-STAT3蛋白表达;并观察肝组织病理改变。结果:与模型组比较,七味净肝灵各组小鼠血清MDA、AST及ALT水平显著降低,SOD及GSH-Px活性显著升高;肝组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平及pJAK2、p-STAT3蛋白表达显著降低,SOCS-3表达显著升高(P<0.05或P<0.01);七味净肝灵组小鼠肝损伤程度明显减轻。结论:七味净肝灵有显著的保肝作用,其作用机制可能与抗氧化及通过SOCS-3调控JAK2/STAT3信号通路抑制炎症反应有关。

杠板归总黄酮提取及大孔树脂纯化工艺优化研究

目的:采用正交试验和大孔树脂吸附法优化杠板归总黄酮提取和纯化工艺条件,为其开发和利用提供参考。方法:首先以提取时间、次数、温度和料液比为考察因素,采用正交试验优选提取工艺;接着以静态吸附容量、动态吸附率为考察指标,从4种型号大孔树脂中筛选出1种,并对其吸附和解吸条件进行探究。结果:杠板归总黄酮最佳提取工艺为提取2次,每次100 min,温度80℃,料液比1:12;HPD-100型大孔树脂适宜杠板归总黄酮的纯化,其纯化工艺为上样液浓度2.5 g/L,上样速率2 BV(柱体积)/h,上样液体积2.5 BV,用70%乙醇以2 BV/h流速洗脱,在此工艺条件下,吸附的总黄酮纯度55.4%,解吸得率83.2%。结论:该提取和纯化工艺稳定、简单、可行,可用于工业生产。

七味净肝灵对二甲基亚硝胺诱导肝纤维化大鼠的保护作用及其作用机制

目的:研究七味净肝灵对二甲基亚硝胺(DMN)诱导肝纤维化大鼠的保护作用及其作用机制。方法:90只大鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱(0.12 mg/kg)阳性对照组和七味净肝灵高(8 000 mg/kg)、中(4 000mg/kg)、低(2 000 mg/kg)剂量组,每组15只。除正常对照组腹腔注射相应体积的生理盐水外,其余组均按1.5m L/kg腹腔注射0.5%DMN溶液,1次/2 d,同时每天灌胃相应药物进行干预,正常对照组与模型组灌胃相应体积生理盐水,共40 d。实验期间观察并记录大鼠的活动、体质量、外观及毛发变化情况。末次给药后,禁食不禁水16h,随后眼球取血,收集血清及肝脏。采用生化法检测各组大鼠血清中AST、ALT、ALB、TBIL水平;ELISA检测各组大鼠肝组织中PCⅢ、LN、Ⅳ-C、HA含量;Western blot检测各组大鼠肝组织中α-SMA、TGF-β_1蛋白表达水平;HE染色进行肝组织病理学检查。结果:与模型组比较,七味净肝灵高、中剂量组大鼠血清AST、ALT、TBIL水平显著降低,ALB水平显著升高(P<0.05或P<0.01);肝组织中PCⅢ、LN、Ⅳ-C、HA含量显著降低(P<0.05或P<0.01),α-SMA、TGF-β_1蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01);病理切片显示,七味净肝灵高、中剂量组大鼠肝纤维化病变程度较模型组明显减轻。结论:七味净肝灵对DMN诱导的大鼠肝纤维化具有显著的改善作用,其作用机制可能与抑制TGF-β_1有关。

病理生理动物实验计算机教学软件的研制及初步应用

本文总结研制“动物实验”计算机多媒体教学软件(CAI)的设计思路和制作过程,介绍使用本软件辅助教学的初步体会,并希望在改革传统教学手段、提高教学质量的探索中起到抛砖引玉的作用。

医学遗传学教学与21世纪医生综合素质的培养

随着人类基因组计划的顺利完成,人们已经认识到人类所有的疾病都直接或间接地与基因有关,研究遗传病的发病机制、传递规律及诊断、治疗与预防的医学遗传学在临床实践医学中的重要性日益突显,医学遗传学已经成为现代医学新的5大支柱学科之一,是医学生从医学基础跨入临床医学的重要桥梁课程[1]。因此,结合当前时代的要求,培养面向21世纪的4种核心能力、终身学习意识、大医学观念、较快适应社会能力等综合素质的医学生已是当务之急[2]。现就如何在医学遗传学教学中加强医学生综合素质的培养谈一些思路。