从中医学“精”与“神”的关系探讨阿尔茨海默病的病因病机

阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)是一种以β-淀粉样蛋白异常沉积、Tau蛋白磷酸化、脑内神经炎症、神经递质损伤等主要病理改变引起的神经元变性或死亡的中枢神经系统退行性疾病,主要以渐进性记忆和认知功能障碍为临床表现。西医学对于该病的病因、发病机制、治疗方法并不完全明确。从中医学“精”与“神”的关系探讨AD的病因病机。首先,综述了中医学对AD的病因病机的认识,即众医家多从肝脾肾的角度出发对其进行辨证论治,对阿尔茨海默病在古代中医文献记载中出现的症状表现进行了界定,即其类似于“善忘”“痴呆”“呆病”等,并综述了中医学从《黄帝内经》时期到后期各医家对于健忘、痴呆的认识;其次,阐述了“精”和“神”的作用及其与心肾的关系,认为“精”和“神”对于记忆力的保持至关重要;然后,根据“精”和“神”的概念,阐述了精和神的相互关系,即精能化气生神,神又能够驭精役气,两者相辅相成,共同促进脑的记忆功能的保持;最后,基于“心藏神,肾藏精”的理论基础,以近期文献为依据,中医理论基础为理论指导,从“精”和“神”的层面探讨阿尔茨海默病的病因病机,得出心、肾是统摄神明的主要作用脏腑、其生理作用的正常发挥与否是影响脑记忆功能的关键原因的结论。

基于p38MAPK/NF-kB信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤干预广泛性焦虑模型大鼠的作用机制

目的:研究柴胡加龙骨牡蛎汤是否可以通过调控抑制p38丝裂原活化蛋白激酶/核转录因子-κB(p38 MAPK/NF-κB)信号通路抑制广泛性焦虑(GAD)大鼠下丘脑区炎症反应,改善GAD大鼠的焦虑样行为,缓解GAD大鼠的焦虑症状。方法:74只Wistar大鼠随机选择12只作为空白组,剩余大鼠采用慢性束缚应激法制造GAD模型大鼠,造模14 d后进行旷场实验(OFT)和高架十字迷宫实验(PMT)检测各组大鼠焦虑样行为,筛选造模成功的大鼠60只,随机分为模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组(6、12、24 g·kg^(-1))和地西泮组(1 mg·kg^(-1)),每组12只,连续14 d灌胃相应剂量柴胡加龙骨牡蛎汤和地西泮,给药14 d后继续通过旷场和十字迷宫实验观察大鼠焦虑样行为的变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠下丘脑和血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素IL-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测p38 MAPK、NF-κB p65、NF-κB抑制因子α(IκBα)、钙结合蛋白(Iba-1)mRNA的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠下丘脑p38 MAPK、磷酸化(p)-p38 MAPK、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IκBα蛋白的表达水平;免疫荧光法检测大鼠下丘脑小胶质细胞激活蛋白Iba-1表达情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量较轻且皮毛散乱黯黄、易躁易怒、喜在角落蛰伏,OFT边缘运动距离和边缘运动时间显著增加(P<0.01),PMT开臂运动距离、开臂运动时间及进入开臂次数显著减少(P<0.01),下丘脑室旁核小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度显著升高(P<0.01),血清和下丘脑中IL-1β、IL-6、TNF-α显著增多(P<0.01),下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),IκBα蛋白及mRNA表达显著减低(P<0.01)。与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组和地西泮组大鼠体质量较重且皮毛较为光滑、活动较为正常,OFT边缘运动距离和时间明显减少(P<0.05,P<0.01),PMT开臂运动距离及开臂运动时间明显增加(P<0.05,P<0.01),下丘脑小胶质细胞激活标志蛋白Iba-1荧光强度降低(P<0.05,P<0.01),血清和下丘脑组织中IL-1β、IL-6、TNF-α明显降低(P<0.05,P<0.01),下丘脑p38 MAPK、NF-κB p65、p-p38 MAPK、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白及mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),IκBα蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤可通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路,降低GAD大鼠下丘脑内小胶质细胞活化度、下调促炎因子水平,发挥改善大鼠焦虑样行为、缓解大鼠焦虑状态的作用。

基于网络药理学和实验验证探讨大补肝汤治疗广泛性焦虑症的作用机制

基于网络药理学、分子对接和动物实验探讨大补肝汤治疗广泛性焦虑症(generalized anxiety disorder, GAD)的作用机制。通过网络药理学和分子对接获得大补肝汤治疗GAD的可能靶点和相关信号通路。建立GAD大鼠模型,随机分组后相应药物灌胃,连续干预28 d后检测各组大鼠焦虑状态,并检测大鼠海马病理改变,采用酶联免疫吸附法(ELISA)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测相关蛋白表达水平。初步筛选共得到大补肝汤中化合物65种,作用靶点403个,GAD疾病靶点7 398个,“药物-疾病”共有靶点279个,蛋白-蛋白互作(protein-protein interaction, PPI)网络关键节点为丝氨酸和苏氨酸激酶1(Akt1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)、白细胞介素(interleukin, IL)-6、细胞肿瘤抗原p53(tumor protein 53,TP53)、IL-1β等;基因本体论(Gene Ontology, GO)功能分析与京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)通路富集分析显示,PI3K-Akt信号通路是最主要途径。分子对接显示,药物核心成分与对应关键靶点均具有较好的结合活性。动物实验显示,大补肝汤可有效改善大鼠焦虑行为,增加大鼠在高架十字迷宫中开臂端运动距离及总距离、进入明箱次数及停留时间、进入旷场中央时间百分比及次数。苏木精-伊红(HE)染色、尼氏染色显示,大鼠海马神经细胞数量增加,排列紧密,细胞体损坏改善,细胞中尼氏体增加,海马组织中TNF-α、IL-6、IL-1β表达下降,TP53、磷酸化丝氨酸和苏氨酸激酶1(p-Akt1)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)表达上升,其机制可能与激活PI3K-Akt信号通路、抑制炎症反应有关。结果表明,大补肝汤对GAD起到很好的治疗调控作用,体现了中药复方整体作用和多靶点、多通路的特点。同时,初步探讨了大补肝汤治疗GAD可能通过激活PI3K-Akt信号通路,抑制炎症反应、抗细胞凋亡,从而改善GAD状态,为大补肝汤的临床应用提供实验数据支持。

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨黑逍遥散对AD模型大鼠神经炎症的影响

目的:研究黑逍遥散是否可以通过调控激活Wntβ-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制阿尔茨海默病(AD)大鼠海马区炎症反应,改善AD大鼠认知和记忆功能障碍。方法:90只雄性Wistar大鼠先随机分别选择12只作为空白组和假手术组,剩余大鼠在左右两侧海马区注射β淀粉样蛋白42(Aβ42)制造AD模型大鼠,随机分为模型组、黑逍遥散低、中、高剂量组和多奈哌齐组,每组12只,并连续42 d给予相应剂量黑逍遥散和多奈哌齐灌胃。尼氏染色观察海马CA1区病理形态学变化;Morris水迷宫实验检测1~5 d大鼠逃避潜伏期的变化,第6天的空间探索能力。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠海马组织和血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测检测海马中海马区糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、β-catenin、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠GSK-3β、β-catenin、PPARγmRNA的水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠海马CA1区神经元数量明显减少,排布不均,细胞体损坏比较明显,尼式小体不清;模型组大鼠第3~5天的逃避潜伏期均相比治疗组显著延长(P<0.01),跨台次数显著减少(P<0.01);模型组大鼠血清和海马组织中IL-10水平显著降低,IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.01);模型组GSK-3β蛋白和mRNA显著升高,β-catenin、PPARγ蛋白表达显著降低(P<0.01),差异较为明显;与模型组比较,黑逍遥散中、高剂量组和盐酸多奈哌齐组大鼠神经元细胞数量分布较多,排列整齐,结构完整,尼式小体清晰明确;黑逍遥散中、高剂量组和多奈哌齐组的第3~5天逃避潜伏期显著缩短(P<0.01),跨越平台次数显著增多(P<0.01);大鼠海马组织和血清中IL-10的表达水平明显升高,IL-6和TNF-α显著降低(P<0.01);大鼠海马中GSK-3β蛋白和GSK-3βmRNA表达明显降低,β-catenin、PPARγ蛋白和β-catenin、PPARγmRNA表达水平显著升高(P<0.01)。盐酸多奈哌齐组与黑逍遥散高剂量组之间各指标比较,差异无统计学意义。结论:黑逍遥散可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制AD大鼠海马区炎症反应,改善AD模型大鼠认知和记忆障碍。