长非编码RNA在神经系统损伤的研究进展

缺血性脑卒中、创伤性颅脑损伤(TBI)、蛛网膜下腔出血(SAH)、脑出血(ICH)等是常见的神经系统损伤,往往导致许多病人死亡和长期残疾。长非编码RNA(longnon-codingRNA,lncRNA)作为一类重要且普遍存在的基因,参与体内多种病理生理过程,在临床受到广泛关注。lncRNA在神经系统中含量丰富,并可以在神经系统损伤中发挥促血管生成、抗凋亡和抗炎等作用,其作用的靶点包括microRNA(miRNA)、NF-κB、PI3K/AKT、Notch和p53通路等。因此,lncRNA作为调节神经系统损伤的分子靶点有巨大的应用前景,本文将lncRNA在神经系统损伤中的最新认识及其作用做一简要综述。

α-硫辛酸在小鼠创伤性脑损伤中抗神经细胞凋亡的作用

目的创伤性脑损伤的预后与神经细胞的凋亡密切相关,文中初步探索α-硫辛酸在小鼠创伤性脑损伤中抗细胞凋亡的作用及可能机制方法将72只健康雄性ICR小鼠随机数字表法分为4组:假手术+溶剂组,假手术+α-硫辛酸组,外伤+溶剂组,外伤+α-硫辛酸组,每组18只。外伤组采用自由落体法制备闭合性小鼠脑损伤模型,假手术组仅切开头皮,不致伤。2个α-硫辛酸组造模后30 min给予α-硫辛酸灌胃,2个溶剂组仅给予相应剂量的溶剂,24 h后重复给1次,48 h后取标本,测定脑水肿,Western blot分别检测脑组织线粒体和去线粒体细胞质中细胞色素c(Cytochrome c)蛋白及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein,Bax)的表达,采用免疫组织化学染色检测Caspase-3的表达,同时用尼氏染色检测皮层区神经元的存活情况以及TUNEL染色检测细胞凋亡情况。结果外伤+溶剂组小鼠脑组织含水量、Caspase-3的表达、神经细胞凋亡指数明显高于假手术+溶剂组、假手术+α-硫辛酸组,而神经元的存活率则降低(P<0.01)。与外伤+溶剂组比较,外伤+α-硫辛酸组小鼠脑组织含水量降低[(81.71±0.66)%vs(79.89±0.55)%],Caspase-3的表达减少[(58.40±7.31)%vs(47.42±7.74)%],神经元存活率升高[(44.45±10.56)%vs(57.46±11.01)%],神经细胞凋亡指数则降低[(59.63±8.61)%vs(44.86±7.32)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。线粒体中外伤+溶剂组Cytochrome c表达较假手术+溶剂组和假手术+α-硫辛酸组明显降低,而Bax的表达则明显增加(P<0.01);外伤+α-硫辛酸组中Cytochrome c表达较外伤+溶剂组明显增加,而Bax表达则明显减少(P<0.05)。在去线粒体细胞质中,Cytochrome c、Bax的表达则呈相反变化。结论α-硫辛酸在小鼠创伤性脑损伤中有保护作用,可能通过线粒体途径抑制神经细胞的凋亡。

Nrf2基因敲除对小鼠蛛网膜下腔出血后小胶质细胞/巨噬细胞活化的影响

目的脑内小胶质细胞/巨噬细胞(microglia/macrophage,M/M)在蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)脑组织损伤和修复中具有重要作用。文中研究小鼠SAH后M/M活化及Nrf2基因敲除对M/M活化的影响。方法野生型ICR小鼠70只,来源于ICR的Nrf2基因敲除小鼠35只,采用小鼠视交叉注射自体血建立SAH模型。假手术组行同样抽血、钻孔及置针,但不行注血。实验分为4组,野生型假手术组、野生型SAH组、基因敲除假手术组、基因敲除SAH组。SAH术后第1、3、5天取标本,用Western blot法和免疫组化法检测M/M特异性蛋白Iba1的表达;同时Western blot检测SAH后第3天Iba1蛋白表达,免疫荧光染色检测SAH后第3天CD16/32+Iba1+细胞数量。结果 Western blot检测结果显示野生型假手术组、野生型SAH组第1、3、5天Iba1蛋白表达灰度值分别为0.491±0.039、0.657±0.069、0.930±0.046和0.926±0.046,而Iba1蛋白免疫组织化学染色平均光密度值为0.412±0.122、0.625±0.135、0.963±0.213和0.978±0.224,野生型SAH组第1、3、5天Iba1蛋白表达均较野生型假手术组明显增加(P<0.05),但野生型SAH组第3天与第5天Iba1表达差异无统计学意义(P>0.05);Western blot结果示野生型假手术组、基因敲除假手术组、野生型SAH组、基因敲除SAH组SAH后第3天Iba1蛋白表达灰度值分别为1.157±0.080、1.162±0.073、1.580±0.171和1.913±0.220,CD16/32+Iba1+细胞数量分别为0、0、30.200±6.300和42.800±6.260(个/HP),SAH后第3天基因敲除SAH组Iba1蛋白表达较野生型SAH组增加(P<0.05),且基因敲除SAH组CD16/32+Iba1+细胞数较野生型SAH组明显增多(P<0.05)。结论小鼠SAH后M/M活化增加,Nrf2基因敲除促进了SAH后M/M的活化和M1极化。

小鼠脑外伤模型中Nrf2与泛素-蛋白酶体系统的关系

目的 Nrf2是重要的神经保护因子,泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin proteasome system,UPS)作为一种高度特异性的细胞内蛋白降解途径,在维持基因和蛋白正常功能上发挥着重要的作用。文中初步研究脑外伤模型中Nrf2与UPS的关系。方法 42只健康雄性ICR小鼠随机数字表法分为3组:对照组,外伤+溶剂组,外伤+莱菔硫烷组,每组14只;12只Nrf2基因敲除小鼠为外伤+敲除组。外伤组采用自由落体法制备闭合性小鼠脑损伤模型,对照组仅切开头皮。外伤+莱菔硫烷组于造模后5 min予以腹腔注射莱菔硫烷5 mg/kg;外伤+溶剂组于造模后5 min予以腹腔注射同等体积的10%玉米油;造模24 h后取脑皮层,Western blot检测Nrf2、泛素化蛋白含量,同时用免疫组化、电镜分别观察Nrf2和泛素化蛋白的变化。结果与对照组相比,外伤+溶剂组中Nrf2核蛋白与泛素化蛋白表达含量均增高[(0.66±0.09)vs(0.09±0.02),(10.58±0.75)vs(3.27±0.21)],差异均有统计学意义(P<0.05);与外伤+溶剂组相比,外伤+莱菔硫烷组中核蛋白Nrf2表达明显增高[(1.22±0.14)vs(0.66±0.09)],泛素化蛋白含量则明显降低[(6.97±0.86)vs(10.58±0.75)],差异均有统计学意义(P<0.05);而外伤+敲除组中核蛋白Nrf2表达明显低于外伤+溶剂组[(0.17±0.02)vs(0.66±0.09)],泛素化蛋白含量则显著高于外伤+溶剂组[(14.35±0.65)vs(10.58±0.75)],差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫组化和电镜也观察到相应的泛素化蛋白的变化。结论脑外伤模型中Nrf2可能通过调节UPS来发挥保护作用。

3D打印在颅颈交界区椎弓根螺钉固定中的应用

目的探索3D打印导板引导技术在颅颈交界区疾病椎弓根螺钉固定中的应用价值。方法收集本中心自2015年3月至12月收治的10例病例,在3D打印导板辅助下行椎弓根螺钉内固定术,分别评价患者手术前后的解剖复位水平,椎体骨质融合率,Symon评分、美国脊柱损伤协会神经功能分级及日本骨科协会脊髓疾病评分改善率,同时评估对脊髓、椎动脉等损伤的发生率。结果患者解剖复位满意,骨质均实现融合,颈髓损伤及上肢活动功能均得到不同程度改善,所有病例均未出现颈髓及椎动脉的直接损伤。结论 3D打印计算机辅助导板设计是颅颈交界区疾病椎弓根螺钉固定良好的辅助方法。

非典型部位胚胎发育不良性神经上皮肿瘤的诊断与治疗

目的 探讨非典型部位胚胎发育不良性神经上皮肿瘤(DNT)的临床特点,提高对非典型部位DNT的诊断与治疗水平。方法 回顾性分析4例非典型部位的DNT患者的临床表现,影像学检查,手术及病理结果。结果 4例患者主要以头痛症状起病,癫痫发作较少,影像学表现特殊。免疫组化染色与常见的皮质DNT相似。所有患者进行手术治疗,随访1~6年,所有患者均可生活自理,头痛症状完全缓解,记忆力及行走不稳得到明显改善。结论 非典型部位DNT临床表现较特殊,与肿瘤阻塞脑脊液循环通路有关,可与此部位发生的其他肿瘤相鉴别。术前充分评估肿瘤的自身特点,选择合适的手术入路,掌握良好的显微手术操作技巧可完全切除。一般认为预后良好。

阿托伐他汀治疗慢性硬脑膜下血肿的疗效

目的观察阿托伐他汀治疗慢性硬脑膜下血肿的临床疗效。方法经CT或MRI诊断的慢性硬脑膜下血肿患者50例。MGS评分≤2分患者口服阿托伐他汀20 mg,每日1次,定期复查头颅CT观察血肿情况,若血肿逐渐吸收或症状改善则予以出院,继续定期复查头颅CT,口服阿托伐他汀直至血肿消失;若血肿未吸收或患者症状加重,则行钻孔引流术。MGS>2分的患者行钻孔引流术,术后立即复查头颅CT查看颅内情况,并口服阿托伐他汀20 mg,每日1次,患者症状改善后予以出院,定期复查头颅CT,口服阿托伐他汀直至血肿或积液消失。结果 MGS评分≤2分者共14例,4例口服药物未见改善行手术治疗,其余10例随访3~4个月后血肿消失;MGS>2分者共36例行手术治疗,术后口服药物3个月,经CT证实痊愈未有血肿复发。结论 MGS评分≤2分的大部分患者单纯口服阿托伐他汀可治疗慢性硬脑膜下血肿;对MGS>2分的患者钻孔引流术联合阿托伐他汀治疗可提高治疗效果。