mir⁃3168靶向抑制TP53促进AGS与AGS/DDP胃癌细胞恶性转化与顺铂耐药

目的:探讨mir‑3168对AGS与AGS/DDP胃癌细胞恶性转化与顺铂耐药影响,并验证其靶基因。方法:qPCR检测胃癌顺铂敏感细胞AGS与胃癌顺铂耐药细胞AGS/DDP细胞中mir‑3168表达,合成mir‑3168 mimic、inhibitor与阴性对照,分别转染AGS与AGS/DDP胃癌细胞,qPCR检测mir‑3168与TP53 mRNA表达,梯度浓度顺铂处理与非处理下采用CCK8检测细胞活力,流式检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,Western blot检测TP53蛋白表达,数据库预测mir‑3168与TP53结合位点,根据结合位点采用双荧光素酶实验验证mir‑3168与TP53结合。结果:相对胃癌顺铂敏感细胞AGS,mir‑3168在胃癌顺铂耐药细胞AGS/DDP细胞中的表达水平明显提高;mir‑3168 mimic促进AGS与AGS/DDP胃癌细胞顺铂抵抗、增殖与侵袭,抑制AGS与AGS/DDP胃癌细胞凋亡;mir‑3168 inhibitor抑制AGS与AGS/DDP胃癌细胞顺铂抵抗、增殖与侵袭,促进AGS与AGS/DDP胃癌细胞凋亡;mir‑3168 mimic抑制TP53 mRNA与蛋白表达,mir‑3168 inhibitor促进TP53 mRNA与蛋白表达;Targetscan数据库预测mir‑3168与TP53存在结合点,双荧光素酶实验提示mir‑3168与TP53结合,且通过预测的结合位点结合。结论:mir‑3168可能通过靶向抑制TP53促进AGS与AGS/DDP胃癌细胞恶性转化与顺铂耐药。

经HIV包膜蛋白gp120刺激的T细胞外泌体促进巨噬细胞M2极化

目的:本研究旨在探讨经HIV膜蛋白gp120处理后人T淋巴细胞系(H9)外泌体对巨噬细胞极化的影响。方法:采用CCK8试剂盒检测gp120处理后人T淋巴细胞H9活力;采用ELISA法检测H9细胞上清液中炎症因子水平;通过电镜和Western blot实验鉴定外泌体特征;PHK67染色观察外泌体进入巨噬细胞情况;最后通过ELISA和免疫荧光检测巨噬细胞极化标记物,分析gp120处理后T细胞外泌体对巨噬细胞极化的影响。结果:HIV gp120蛋白抑制人T淋巴细胞H9增殖并促进炎症因子释放。成功提取人T淋巴细胞H9外泌体,电镜下为中间凹陷的膜结构,高表达标记蛋白CD9、CD63、CD81。PHK67染色结果显示H9细胞外泌体可进入巨噬细胞。经gp120处理的H9细胞外泌体可促进巨噬细胞向M2型极化。结论:HIV膜蛋白gp120处理人T淋巴细胞H9分泌的外泌体能够促进巨噬细胞M2极化,可能是gp120在免疫调节中的新机制。

茶黄素(TF_(1))对人肝癌Bel-7402细胞的抑制作用及机制研究

探究茶黄素(TF_(1))对人肝癌Bel-7402细胞的影响,并阐明其作用机制。通过CCK-8检测细胞活力,用平板克隆形成试验检测细胞增殖能力,细胞划痕愈合试验和Transwell小室法检测细胞迁移,用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、PARP)、迁移相关蛋白(E-cad、N-cad、Vimentin、MMP9)和信号通路相关蛋白(TGF-β、smad3、p-smad3)表达水平。结果表明,不同剂量TF_(1)均可抑制Bel-7402细胞的增殖和迁移,促进其凋亡,并且存在剂量依赖性,剂量越大,抑制作用越强(P<0.05)。与对照组相比,试验组Bax、E-cad蛋白表达水平较高,Bcl-2、PARP,N-cad、Vimentin、MMP9、TGF-β、smad3、p-smad3表达水平较低(P<0.05)。茶黄素可能通过TGF-β信号通路抑制肝癌Bel-7402细胞的增殖、迁移,且促进其凋亡。

桂西地区869例慢性乙型肝炎病毒基因分型与耐药突变分析

目的乙型肝炎病毒(HBV)基因型及耐药突变情况与疾病进展和药物疗效密切相关,有效开展其测定具有重要意义。文中旨在检测桂西地区869例HBV的基因型及耐药突变基因,为临床抗HBV治疗提供依据。方法收集2016年1月至2018年3月右江民族医学院附属医院感染性疾病科门诊及住院的来自桂西地区且HBV DNA>1.0×103IU/mL的869例慢性乙型肝炎病毒携带(CHB)患者。采用PCR和反向点杂交法技术检测其HBV基因分型与耐药突变情况。结果共检出7种基因分型,分别为B基因型304例(34.98%),C基因型268例(30.84%),D基因型147例(16.92%)及B+C基因型、B+D基因型、C+D基因型、B+C+D基因型。63例患者发生耐药突变,耐药突变率为7.25%,其中C基因型31例(49.21%),B基因型19例(30.16%);突变模式有rt204I、rt181V、rt236T、rt180M+rt204V+rt204I等14种,其中rt180M+rt204V突变频率最高(17.46%)。B、C基因型的总体突变率(19%、31%)差异有统计学意义(P<0.05)。结论桂西地区CHB患者HBV基因型多样,主要以B、C基因型为主,且耐药突变率较高,突变模式复杂,这一结果为桂西地区临床抗HBV治疗提供了依据。

lncRNA RP5-940J5.9表达水平与肝细胞癌患者预后相关性研究

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)RP5-940J5.9在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR检测lncRNA RP5-940J5.9在肿瘤组织中的表达水平;采用卡方检验分析lncRNA RP5-940J5.9表达与肝癌临床生理病理特征的关系;采用kaplan-meier曲线研究lncRNA RP5-940J5.9表达对肝癌患者生存期的影响。结果lncRNA RP5-940J5.9在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0.001)。lncRNA RP5-940J 5.9的表达与肿瘤数目、淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05)。此外,lncRNA RP5-940J5.9高表达的肝癌患者无病生存期(DFS)和总生存期(OS)明显较低(P<0.001)。结论lncRNA RP5-940J5.9可能参与肝癌的发生发展,可作为肝癌患者的临床生物标志物和治疗靶点。

反基因锁核酸在转基因小鼠体内抗乙肝病毒的短期效果

目的探讨短期内反基因锁核酸(anti-gene-locked nucleic acid,anti-gene,LNA)与拉米夫定(lamivudine,LAM)在乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)转基因小鼠体内的抗病毒效果。方法对照组和反基因LNA治疗组于第1 d、3 d、5 d经尾静脉注射给药,拉米夫定组以每次2 mg/kg剂量灌胃2次/天,连续7 d。采用real-time PCR检测血清的HBV DNA,磁微粒化学发光法检测血清HBsAg。结果给药后的第1 d、3 d、5 d、7 d,反基因LNA组和拉米夫定组对HBV DNA平均抑制率分别为19.45%、44.37%、51.33%、52.64%和2.54%、4.04%、5.84%、9.39%,反基因LNA组和拉米夫定组对血清HBsAg的平均抑制率分别为20.37%、36.01%、44.73%、47.44%和2.17%、4.32%、5.40%、7.71%。免疫组织化学染色观察肝组织切片中HBV HBsAg细胞阳性情况,反基因LNA组HBV HBsAg细胞阳性率为(39.30±4.90)%,拉米夫定组为(80.50±3.40)%。以上结果显示,反基因LNA短期内能有效抑制乙肝病毒,而拉米夫定未能有效抑制乙肝病毒。结论短期内反基因LNA比拉米夫定具有更好的抗乙肝病毒效果,为乙肝病毒的基因治疗提供理论依据和实验基础。

抗乙型肝炎病毒免疫治疗研究新进展

抗乙型肝炎病毒(HBV)免疫治疗主要通过介导激活免疫细胞及释放细胞因子发挥免疫调控作用,增强宿主产生有效的先天性和适应性免疫应答,从而有效抑制HBV复制与转录,实现长期稳定的控制。该综述总结抗HBV免疫治疗的几种策略,以期找到清除HBV共价闭合环状DNA治疗新方法或药物,为HBV抗病毒治疗提供参考。

转录组测序分析急、慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞基因变化

目的筛选急性乙型肝炎(acutehepatitisB,AHB)和慢性乙型肝炎(chronichepatitisB,CHB)外周血单个核细胞中异常表达基因。方法收集在右江民族医学院附属医院就诊的3例AHB与3例CHB外周血,分离单个核细胞,提取RNA后进行转录组测序,根据P<0.05且|log2FC|>1计算两组样本的表达差异,绘制差异基因热图。对差异基因进行GO功能与KEGG信号通路聚类。结果AHB组和CHB组两组间满足P<0.05且|log2FC|>1差异条件的基因共计725个,其中上调372个,下调353个。差异基因主要富集的GO功能:微管发生功能、内源性刺激反应功能、组织发生功能、细胞增殖调控功能与细胞增殖功能和细胞外区域功能。差异基因主要富集的KEGG信号通路:PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、硫胺素代谢通路、癌症转录失调和IL-17信号通路。结论提供了AHB和CHB外周血单个核细胞中差异表达基因变化的一般情况与可能调控功能和通路,可能有助于阐明AHB和CHB的发展机制。

circRNA_000203在HIV-1感染儿童疾病进展的表达与临床意义

目的检测环状RNA(circRNA)_000203在人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)感染儿童外周血单个核细胞中表达,探讨其表达与HIV-1感染儿童的临床意义。方法收集71例HIV-1感染儿童与71例体检正常儿童外周血,分离单个核细胞,采用RT-PCR检测单个核细胞中circRNA_000203表达,统计分析HIV-1感染儿童与正常组表达差异,以及HIV-1不同进展期的表达差异,并分析circRNA_000203表达与CD4细胞数、病毒载量的相关性。结果HIV-1感染的儿童组中circRNA_000203的相对表达量显著高于对照组(P<0.001),HIV进展患儿组中circRNA_000203的相对表达量高于HIV长期未进展患儿组(P<0.001);而ART(antiretroviral therapy)无响应患儿组中circRNA_000203的相对表达量高于ART响应患儿组(P<0.001)。HIV-1感染儿童中circRNA_000203相对表达量与CD4细胞数成反比(R=-0.332,P=0.005),与HIV-1病毒载量成正比(R=0.390,P<0.001)。结论circRNA_000203与HIV-1感染相关,且可能与HIV-1感染预后不良相关,可能是HIV-1感染儿童的潜在诊断指标。

HBV C编码链抗HBV潜在药物靶标的设计、筛选及鉴定

目的针对HBV C编码链设计合成反基因锁核酸(locked nucleic acid,LNA)片段,以HepG2.2.15细胞为研究对象,筛选并鉴定出能特异性阻断HBV复制和表达的有效治疗靶点药物。方法利用RNAstructure 5.0软件针对HBV C区编码链1914~1928 nt、1969~1983 nt、2002~2016 nt、2053~2067 nt、2069~2073 nt、2162~2176 nt和2404~2418 nt位点设计合成7条反基因LNA片段(分别以SQ1~SQ7表示),以阳离子脂质体lipofectamine 3000(lipo3000)介导转染HepG2.2.15细胞,隔3天对应给药,连续给药3次,分别于给药后第3、6、9天收集培养上清液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBeAg水平;实时荧光定量聚合酶链反应技术(FQ-PCR)测定HBV-DNA浓度。结果针对HBV C区编码链2162~2176 nt(SQ6)和2404~2418 nt(SQ7)位点的反基因LNA片段对HBV-DNA复制和HBeAg表达的抑制效果最明显,用药后第3、6、9天,SQ6对HBeAg的平均抑制率分别为43.91%、59.95%和59.07%,HBV-DNA则分别为42.91%、50.09%和51.14%;SQ7对HBeAg的平均抑制率分别为44.18%、60.81%和60.02%,HBV-DNA则分别为47.28%、54.16%和52.22%。结论针对HBV C区编码链2162~2176 nt和2404~2418 nt位点的反基因LNA片段体外能有效抑制HBV的复制和表达,为抗HBV治疗提供一定的理论依据和实验依据。

反基因锁核酸体内抑制HBV S基因的表达

目的目前针对乙型肝炎的治疗仍缺乏有效治疗手段,探讨反基因锁核酸在转基因小鼠体内抑制HBV S基因的表达和抗病毒效果。方法采用随机数字表法将HBV转基因小鼠分为5组,每组6只,分别为空白组、无关序列组、拉米夫定组、反义锁核酸组、反基因锁核酸组。空白组、无关序列组、反义锁核酸组、反基因锁核酸组于第1、3、5 d经尾静脉分别注射5%GLU-脂质体、5%GLU-脂质体-无关序列、5%GLU-脂质体-反义锁核酸、5%GLU-脂质体-反基因锁核酸各500μL。拉米夫定组以2 mg/kg剂量每天灌胃2次,连续7 d。采用RT-PCR检测血清HBV DNA;酶联免疫法检测血清HBs Ag;逆转录PCR检测肝HBV S mRNA水平;免疫组化检测肝细胞HBs Ag水平;血清肝肾功能检查和组织细胞HE染色监测反基因锁核酸的毒副作用。结果给药后第3、5、7天,反基因锁核酸组对HBV DNA复制的的平均抑制率分别为37.18%、50.27%和61.46%,第7天的抑制作用较空白组、无关序列组、拉米夫定组、反义锁核酸组明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。给药后第3、5、7天,反基因锁核酸对HBs Ag表达的平均抑制率分别为30.17%、44.00%和57.76%,第7天的抑制作用较空白组、无关序列组、拉米夫定组、反义锁核酸组明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组、无关序列组、拉米夫定组和反义锁核酸组比较,反基因锁核酸更能抑制HBV S基因mRNA的表达(P<0.05)。空白组、无关序列组、拉米夫定组、反义锁核酸组、反基因锁核酸组阳性细胞率分别为93%、92%、78%、47%和31%,反基因锁核酸组肝组织切片中HBV HBs Ag阳性细胞率明显小于拉米夫定组及反义锁核酸组(P<0.05)。各组肝细胞切片中,肝组织结构和肝细胞形态正常,肾细胞切片中,各组肾小球结构完整,未见肾小球肥大,肾小球基膜和系膜基质未见明显病理改变和炎细胞浸润。结论反基因锁核酸在转基因小鼠体内能有效抑制HBV S基因表达,具有明显的抗病毒效果,为乙肝病毒的基因治疗提供理论依据和实验基础。

针对HBV preS1、preS2编码链的反基因锁核酸对HepG2.2.15细胞的抗病毒效果

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)preS1、preS2 DNA同聚嘌呤区设计的锁核酸在体外对HBV复制和表达的抑制作用。方法设计并合成锁核酸,以Lipo3000作为载体转染至锁核酸-脂质体组,设空白对照组,运用荧光定量PCR、化学发光免疫分析等技术观察锁核酸对HBsAg表达、HBV DNA复制的抑制作用,采用CCK8比色法观察锁核酸对HepG2.2.15细胞基本代谢的影响。结果加入锁核酸后,HBsAg、HBV DNA表达量相对于空白对照组逐渐降低,并随时间呈递增趋势,其中,preS1的3023-3037nt位点在第9天对HBsAg表达的抑制率达(61.94±4.11)%,对HBV DNA复制的抑制率达(56.08±3.22)%;preS2的3305-3320nt位点在第9天对HBsAg表达的抑制率达(72.93±4.14)%,对HBV-DNA复制的抑制率达(61.79±3.40)%。结论HBV preS1编码链的3023-3037nt位点和preS2编码链的3305-3320nt位点的反基因锁核酸片段对HBsAg表达和HBV-DNA复制的抑制效果最为明显,两者均可以作为抗HBV治疗的有效靶位。

基于lncRNA-mRNA共表达网络的HBV相关肝癌生物靶点筛选及综合分析

目的对公共基因表达数据库(GEO)中的HBV相关肝癌数据进行生物信息学分析,探讨长链非编码RNA(lncRNA)与mRNA在HBV相关肝癌中的作用。方法从GEO数据库下载HBV相关肝癌数据集,利用相应R包对数据集的差异表达基因进行计算与比较,获取差异基因并构建lncRNA-mRNA共表达网络、蛋白质相互作用(PPI)网络和模块分析;继而对共表达网络中的mRNA进行基因本体论(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)路径分析;并分析与关键lncRNA高度相关的mRNA与患者生存曲线的相关性。结果通过基因分析获得HBV相关肝癌高度相关的差异lncRNA 30个,mRNA 676个。共表达的mRNA主要参与的GO通路有细胞黏附、细胞运动的负调控、生物黏附、酶联受体蛋白信号通路、细胞趋化性;KEGG通路主要有类固醇激素生物合成、视黄醇代谢、PI3K-Akt信号通路、ECM-受体相互作用、化学致癌作用、黏着斑、Rap1信号通路等。与关键lncRNA(DNM3OS、HAND2-AS1、HELLPAR、AC126118.1、FAM230E、LINC01139、LINC01943、AL022344.1和PCAT7)高度相关的mRNA(GGT5、CEP55、DPT、TEK、TRIP13、STAB2、ESM1和MS4A1)与患者生存曲线有显著相关性(P<0.01)。结论 lncRNA (DNM3OS、HAND2-AS1、HELLPAR、AC126118.1、FAM230E、LINC01139、LINC01943、AL022344.1和PCAT7)对HBV相关肝癌的发生发展及预后具有重要作用,为HBV相关HCC发生发展的机制研究、预后指标、药物治疗靶点的选择等提供参考。

基于lncRNA-mRNA共表达网络的HBV相关肝癌生物靶点筛选及综合分析

目的 关于lncRNAs作为预测性生物标志物和治疗靶点的研究仍然非常有限。文中旨在筛选出HBV相关肝癌差异表达lncRNA谱,寻找灵敏性高、特异性好的HBV相关肝癌早期诊断分子标志物。方法 从GEO下载HBV相关肝癌芯片数据集GSE55092、GSE19665和GSE84402,筛选出差异表达的lncRNA和mRNA,并对差异基因进行功能分析。收集2019年2月至2020年12月右江民族医学院附属医院肝胆外科及体检科患者。肿瘤组(n=45)为HBV阳性原发性肝癌患者,对照组(n=38)为乙肝病毒携带无肿瘤患者。筛选差异表达基因,及HBV相关HCC的候选诊断lncRNA生物标志物,利用DAVID对共表达的差异基因进行GO富集分析及KEGG分析,利用qRT-PCR检测候选lncRNA在血浆样本的相对表达量,通过ROC曲线评价单个血浆lncRNA及与甲胎蛋白联合在HBV相关肝癌诊断中的价值。结果 随机森林的特征变量筛选出上调的AC093642.1、AL445524.1、TRIM52-AS1、EHMT2-AS1、AL356056.2,及下调的AC003991.1、LINC00844、LINC01018、AC008040.1作为HBV相关肝癌的候选诊断性lncRNA生物标志物。候选lncRNA与126个mRNA存在共表达,共199个mRNA-lncRNA共表达对。共表达mRNA的GO功能富集结果表明,表达失调的基因主要富集于与单羧酸代谢过程、类固醇代谢过程、细胞分裂、有丝分裂细胞周期过程等。KEGG通路分析显示,差异基因主要富集在p53信号通路、视黄醇代谢、PI3K-Akt信号通路、化学致癌作用和过氧化物酶体等信号通路。AC003991.1、AL445524.1、LINC00844、AL56056.2、AC008040.1、TRIM52-AS1、LINC01018肿瘤组与对照组比较差异有统计学意义,肿瘤组表达上调(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,AC003991.1、AL445524.1、LINC00844和LINC01018 4种lncRNA联合构建logistic回归模型的AUC为0.910,敏感度和特异度分别为0.828、0.911;4-lncRNA与甲胎蛋白联合构建logistic回归模型的AUC为0.986,敏感度和特异度分别为0.969、0.964。结论 血浆lncRNA AL356056.2、AL445524.1、TRIM52-AS1、AC008040.1、AC003991.1、LINC00844和LINC01018可作为HBV相关肝癌临床诊断潜在的循环标志物;AL445524.1、AC003991.1、LINC00844、LINC01018联合及与甲胎蛋白联合,对HBV相关肝癌具有早期诊断价值。

HBV S编码链的反基因锁核酸对转基因小鼠体内病毒复制与表达的影响

目的探讨针对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)S编码链的反基因锁核酸(anti-genelocked nucleic acid,Anti-G-LNA)在转基因小鼠体内的抗病毒效果.方法将30只HBV转基因小鼠随机分为5组(n=6),分别为空白对照组(Control)(5%GLU+脂质体)、无关序列对照组(USQ)、拉米夫定对照组(LAM)、反义锁核酸对照组(Anti-SLNA)、反基因锁核酸组(Anti-G-LNA).拉米夫定组用灌胃法;锁核酸经尾静脉注入小鼠体内.采用实时荧光定量PCR检测血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA);酶联免疫法检测血清乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg);逆转录PCR检测肝脏乙型肝炎病毒S基因mRNA(HBV S mRNA)水平;免疫组织化学检测肝细胞HBsAg水平.结果治疗后的第3、5、7天,反基因锁核酸对HBV DNA抑制率分别为37.18%、50.27%、61.46%,HBsAg抑制率分别为30.17%、44.00%、57.76%,与给药前比较有统计学意义(P<0.05),与各对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).HBV S基因mRNA的相对表达量为0.33、肝细胞HBsAg阳性细胞率为31%,与对照组相比有统计学意义(P<0.05);肝肾功能检查和组织HE染色未发现异常改变.结论针对HBV S编码链设计的反基因锁核酸在转基因小鼠体内具有较好的抗病毒效果,为HBV基因治疗提供理论依据和实验基础.

HBV前S1编码链锁核酸的设计及体外抗HBV效果观察

目的针对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)前S1 dsDNA同聚嘌呤区设计反基因寡核苷酸药物-锁核酸(locked nucleic acid,LNA),并在体外观察抑制HBV复制的效果。方法针对HBV前S1 dsDNA的3023~3037 nt、3094~3109 nt两个同聚嘌呤区,利用RNA structure软件分别设计并合成LNA,以阳离子脂质体为载体,将药物转染入HepG2.2.15细胞内,采用荧光定量PCR技术和化学发光免疫技术分别检测3 d、6 d和9 d细胞培养上清液中HBV DNA和HBsAg的含量;CCK8法检测锁核酸对HepG2.2.15细胞代谢的影响。结果LNA对HepG2.2.15细胞的HBV DNA转录和HBsAg表达有显著的抑制作用,并且抑制效果随着时间进一步加强,在第9天的抑制率分别为45.37%和52.09%。两个同聚嘌呤组与空白对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.05),而封闭3023~3037nt同聚嘌呤区的LNA抑制作用较强,且最适序列长度为15~25 bp。CCK8实验显示LNA对HepG2.2.15细胞无任何明显的代谢影响。结论针对前S1 dsDNA同聚嘌呤区的反基因锁核酸分子在体外能够有效地抑制HBV的复制,以封闭3023~3037 nt靶位效果较强,且合适序列长度为15~25 bp。

针对乙型肝炎病毒S编码链的反基因锁核酸在转基因小鼠体内的抗病毒效果

目的探讨针对乙型肝炎病毒（HBV）S编码链的反基因锁核酸在转基因小鼠体内的抗病毒效果。方法将30只HBV转基因小鼠随机分为5组（力=6），分别为空白（5％葡萄糖＋脂质体）对照组、无关序列对照组、拉米夫定对照组、反义锁核酸对照组、反基因锁核酸组。拉米夫定组用灌胃法，锁核酸经尾静脉注入小鼠体内。采用实时荧光定量PCR检测血清HBVDNA；酶联免疫法检测血清HBV表面抗原（HBsAg）i逆转录PCR检测肝脏HBVSmRNA水平；免疫组织化学方法检测肝细胞HBsAg水平。组间比较用单因素方差分析。结果治疗后的3、5、7d，反基因锁核酸对HBVDNA抑制率分别为37．18％、50．27％、61．46％，HBsAg抑制率分别为30．17％、44．00％、57．76％，与给药前比较差异有统计学意义（p〈0．01）。HBVS基因mRNA的相对表达量为0．33、肝细胞HBsAg阳性细胞率为31％，与对照组比较，差异有统计学意义（p〈0．05）；肝肾生物化学指标检查和组织HE染色未发现异常改变。结论针对HBVS编码链设计的反基因锁核酸在转基因小鼠体内具有较好的抗病毒效果，为HBV的基因治疗提供理论依据和实验基础。

广西、云南和贵州交界地区慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒基因型和耐药基因突变研究

目的分析广西、云南和贵州交界地区慢性乙型肝炎(Chronic hepatitis B,CHB)患者乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)基因型和耐药突变。方法选择该地区2016年1月至2020年1月就诊且HBV-DNA>1.0×10^(3)IU/mL的CHB患者,采用PCR和反向杂交技术检测HBV基因序列,分析HBV基因型构成、耐药突变发生率和突变位点分布。结果在纳入的967例CHB患者中,B、C、D、B+C、B+D、C+D、B+C+D基因型HBV患者分别为334例(34.54%)、310例(32.06%)、150例(15.51%)、38例(3.93%)、28例(2.90%)、1例(0.10%)、1例(0.10%)。CHB患者的耐药突变发生率为16.34%(158例);共检出23种耐药突变位点模式,其中rt180M+rt204V、rt204I、rt204V、rt181V突变患者分别占耐药突变患者的15.19%、13.29%、11.39%、10.13%。结论研究地区CHB患者HBV以B和C基因型为主,耐药突变率高,耐药突变位点多样化;研究结果有助于CHB患者的精准化治疗。