产ESBLs肺炎克雷伯菌基因型分析

目的分析肺炎克雷伯菌临床分离株产超广谱β-内酰胺酶(ESBL s)的主要基因型。方法用表型确定的临床分离产ESBL s的肺炎克雷伯菌34株,分别用TEM,SHV,CTX-M-1,CTX-M-2和CTX-M-9扩增引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增,并对PCR产物进行序列分析。结果PCR扩增结果显示TEM,SHV,CTX-M-1,CTX-M-2和CTX-M 9的阳性率分别为47.06%,85.29%,26.47%,32.35%和52.94%,CTX-M型总阳性率为88.24%,序列分析证实扩增为目的产物。结论34株ESBL s肺炎克雷伯菌的主要基因型是CTX-M型和SHV型,且同时携带2种以上基因的菌株占所测菌株的82.35%,需引起临床的高度重视。

多种呼吸道病原微生物快速筛查技术的建立

目的解决临床急性呼吸道感染病原微生物快速筛查诊断的难题,建立一种能同时快速检测多种病原体的有效方法。方法采用多重PCR与Luminex xMAP多重分析技术平台相结合,以荧光微球为检测载体,建立快速、多重检测DNA或RNA技术平台。结果经14种(18个亚型)常见呼吸道病原微生物标准株检测,在反应体系中多重PCR产物只与相应的病原菌检测微球杂交,无非特异性反应;通过138例临床标本检测验证,肺炎患者支气管肺泡灌洗液标本中,细菌检出率占总病原微生物的37.68%,其中结核分枝杆菌占18.84%;病毒检出率占总病原微生物的44.93%,支原体、衣原体占17.39%;患者支气管肺泡灌洗液和鼻咽拭子标本中流感病毒A型的检出率分别为18.75%和26.92%。结论多重检测技术平台对急性呼吸道感染疾病的病原微生物快速检测具有实用价值,尤其在解决流行病病原学分析方面具有重要意义。

金黄色葡萄球菌常见大环内酯类耐药基因快速检测和分析

目的利用SYBRGreenI实时荧光定量多重聚合酶链反应(PCR)结合融解曲线分析,对金黄色葡萄球菌(SA)常见大环内酯类耐药基因进行快速检测和分型,结合D-试验及时为临床提供用药信息。方法利用含有ermA、ermB、ermC、msrA及16srDNA引物的SYBRGreenI实时荧光定量多重PCR体系对89株表型大环内酯耐药SADNA进行扩增,结合融解温度曲线分析进行初筛,对具有4种大环内酯类耐药基因的扩增产物进行电泳以确定型别,并对37株红霉素耐药而克林霉素敏感的菌株进行D-试验,确认是否诱导耐药。结果 88株细菌具有耐药基因,5株msrA,31株ermA,11株ermB,36株ermC,3株ermA+ermC,1株ermB+ermC,1株ermA+ermB;D-试验阳性31株,红霉素诱导克林霉素耐药率83.78%(31/37)。结论本地区大环内酯耐药SA以ermC、ermA基因型为主,检出率分别为40.45%和34.83%;红霉素诱导克林霉素耐药在SA中日益严重;应选择D-试验作为大环内酯耐药的常规筛查试验以辅助临床用药。

产ESBLs大肠埃希菌基因型分析

目的分析大肠埃希菌临床分离株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的主要基因型。方法用表型确定的临床分离产ESBLs的大肠埃希菌47株,分别用TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2和CTX-M-9扩增引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增,并对PCR产物进行序列分析。结果PCR扩增结果显示TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2和CTX-M-9的阳性率分别为59.57%、4.26%、17.02%、19.15%和82.98%,CTX-M型总阳性率为93.62%,序列分析证实扩增为目的产物。结论47株ESBLs大肠埃希菌的主要基因型是CTX-M型和TEM型,且同时携带2种以上基因的菌株占所测菌株的63.83%,需引起临床的高度重视。

葡萄球菌大环内酯类耐药基因检测及其意义

目的了解葡萄球菌对大环内酯类药物表型耐药性和耐药基因以及分析大环内酯类耐药基因与诱导克林霉素耐药的相关性。方法用K—B纸片法检测2004—2005年分离的136株葡萄球菌对红霉素和克林霉素的耐药性，依据NCCLS2004年发布M100-S14的D-试验方法，测定红霉素对克林霉素的诱导耐药率；应用聚合酶链反应（PCR）法检测MsrA、Vgb、Sat4、ermA、ermB、ermC、mphA、MefA／E、ereA、ereB10种耐药基因。结果136株葡萄球菌共栓出MsrA、Sat4、ermC、mphA、ereB5种耐药基因，耐药基因总检出率为80，15％（109／136）。MRSA、MRCNS、MSSA、MSCNS耐药基因的检出率分别为81．25％（13／16）、89，47（68／76）、73，08％（19／26）、50，00％（9／18），耐药基因主要存在于MRCNS。葡萄球菌对红霉素和克林霉素同时耐药株占43．38％，红霉素耐药而克林霉素敏感株占37，50％；D-试验阳性率为25，00％（34／136），阳性株数占红霉素耐药而克林霉素敏感株的66，67％（34／51）。耐药基因MsrA、Sat4、ermC、mphA、ereB的阳性率分别为24．26％、41．91％、56，62％、1．47％、18．38％，其中核糖体甲基化酶基因ermC是诱导克林霉素耐药的主要基因。结论ermC是诱导克林霉素耐药的主要基因，临床微生物实验室应同时开展D试验和耐药基因检测，以指导临床更加合理使用抗菌素。

临床分离铜绿假单胞菌耐药性及相关耐药基因分析

目的了解铜绿假单胞菌（PAE）临床感染分布及其对不同类型抗菌药物的耐药及相关耐药基因的携带现状，以指导临床合理用药。方法采用法国生物梅里埃公司ATB Expression细菌分析系统，用ATB PSE-5药敏试条进行13种抗生素药敏试验；PCR检测16种耐药基因（TEM，SHV，CTX—M，DHA-1，0XA，CARB，VEB-1，PER-1，GES-2，AmpC，VIM-1，VIM-2，IMP-1，SPM，OprD和IntI）并进行DNA测序确认。结果临床分离的119株PAE在呼吸道的分离率为88．24％，对亚胺培南和美洛培南耐药率为24．37％和23．53％；哌拉西林／他唑巴坦（72．27％）和阿米卡星（78．15％）、多黏菌素E（96．64％）的敏感率较高，其中多重耐药PAE占19．33％；耐药基因TEM阳性103株（86．6％），SHV阳性2株（1．7％），CARB阳性14株（11．8％），OXA阳性2株（1．7％），DHA-1阳性1株（0．8％），AmpC阳性77株（64．7％），VIM-2阳性19株（16．0％），I型整合子阳性54株（45．4％），OprD缺失54例（45．4％），其余基因均阴性。结论铜绿假单胞菌TEM，AmpC，IntI，VIM-2耐药基因的携带率及0prD缺失均较高，多重耐药现象反对碳青霉烯类耐药严重，应根据药敏实验和患者的个体情况合理联合应用抗菌药物。

新型冠状病毒感染疫情下深圳地区患儿13种呼吸道病原体流行病学分析

目的探讨新型冠状病毒感染疫情下深圳地区儿童13种呼吸道病原体感染的分布特点及流行病学特征,为临床诊疗提供病原学依据。方法联合多重反转录聚合酶链反应(RT-PCR)与毛细电泳技术检测2020年2月至2022年1月4724例急性呼吸道感染(ARI)患儿13种呼吸道病原体,统计分析13种呼吸道病原体在不同性别、年龄、季节间的分布差异,同步分析痰培养检出细菌阳性的情况。结果4724例ARI患儿13种呼吸道病原体总阳性率为68.80%,混合阳性率为6.96%;检出呼吸道病原体以鼻病毒(27.77%)、呼吸道合胞病毒(19.75%)和副流感病毒(10.69%)为主;上述3种呼吸道病原体合并痰培养细菌阳性以金黄色葡萄球菌(23.29%)、卡他莫拉菌(13.21%)、肺炎链球菌(11.45%)、流感嗜血杆菌(6.46%)为主;秋季病原体阳性率最高(75.82%),幼儿(1~3岁)病原体阳性率最高(73.28%),均以鼻病毒及呼吸道合胞病毒检出为主。结论新型冠状病毒感染疫情下,儿童感染的呼吸道病原体区别于疫情前。

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

[目的]了解本院产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌分布及耐药特点。[方法]采用NCCLS推荐的纸片扩散法对我院从临床标本中分离的107株大肠埃希菌和95株肺炎克雷伯菌进行ESBL的确诊试验,并应用ATB G-5药敏卡对20种抗生素进行药敏试验。[结果]107株大肠埃希菌分离到产ESBLs菌株44株,检出率为41.12%,95株肺炎克雷伯菌分离到产ESBLs菌株35株,检出率为36.84%。ESBLs检出模式以单用头孢噻肟、头孢噻肟/棒酸一组为底物阳性率最高,分别占68.18%和62.85%;单用头孢他定,头孢他定/棒酸一组为底物,会造成大肠埃希菌68.18%和肺炎克雷伯菌62.85%的漏检。产ESBLs菌株对青霉素类、头孢菌素类的耐药率为55%～100%;但对哌拉西林/他唑巴坦的敏感率大于77%,对亚胺培南,美洛培南的敏感率均大于91%。[结论]本院分出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs严重,且产ESBLs菌多呈多重耐药。建议各地根据感染菌株的特点及三代头孢菌素的使用情况,采用多种底物检测ESBLs。碳青酶烯类应作为治疗产ESBLs菌株的首选药物。

深圳地区四家医院感染性腹泻来源沙门菌耐药性及分子分型研究

目的分析2012-2016年深圳地区感染性腹泻沙门菌耐药状况及分子型别特征,为沙门菌感染防控提供科学依据。方法收集深圳地区四家医院的137株沙门菌,传统血清学方法鉴定沙门菌血清型,微量肉汤稀释法测定菌株药物敏感性,脉冲场凝胶电泳(PFGE)对鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌作分子同源性分析。结果 137株沙门菌可分为30种菌型,鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌是本地优势菌型。菌株对链霉素、氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸钾耐药最为严重,对青霉素类、头孢类、氨基糖苷类、大环内酯类抗生素的耐药呈逐年增高的趋势。49株鼠伤寒沙门菌经脉冲场凝胶电泳可获得38种带型,相似度65.5%~100%,TY18为优势带型;27株肠炎沙门菌经脉冲场凝胶电泳可获得9种带型,相似度61.8%~100%,EN7为优势带型。结论感染性腹泻来源沙门菌耐药状况比较严重,菌株PFGE带型多样化,呈高度散发,部分带型与其耐药谱之间具有一定的聚集与关联性。

PCT、CRP、WBC、NEU%在血流感染诊断中的应用价值

目的探讨降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)和中性粒细胞百分比(NEU%)在血流感染诊断中的应用价值。方法回顾性分析2018年1月至2020年1月于深圳市罗湖医院集团治疗的血培养阳性患者134例(血培养阳性组)及血培养阴性患者109例(血培养阴性组)的PCT、CRP、WBC、NEU%检测结果,比较2组及血培养阳性组中革兰阳性菌及革兰阴性菌感染者4项指标的结果,绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),评价PCT、CRP、WBC、NEU%单项及联合检测对血流感染的诊断价值。结果134株病原菌中革兰阳性菌57株(42.5%),以金黄色葡萄球菌、肠球菌属为主;革兰阴性菌77株(57.5%),以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌为主。血培养阳性组PCT、CRP、WBC、NEU%明显高于血培养阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。血培养阳性组中革兰阴性菌感染者PCT水平明显高于革兰阳性菌感染者,差异有统计学意义(P<0.05);而CRP、WBC、NEU%差异无统计学意义(P>0.05)。PCT、CRP、WBC、NEU%单项检测诊断血流感染患者的曲线下面积(AUC)分别为0.849、0.749、0.727、0.833;PCT、CRP、WBC、NEU%联合检测的AUC为0.895。结论PCT、CRP、WBC、NEU%4项指标均能有效诊断血流感染,其中PCT单项检测的AUC最大,辅助诊断价值较CRP、WBC、NEU%高,且PCT可较好地区分细菌感染类型;PCT、CRP、WBC、NEU%联合检测可提高对血流感染患者的诊断价值。

2639例下呼吸道感染患儿病原菌分布及耐药性分析

目的分析深圳市罗湖区人民医院下呼吸道感染患儿病原菌在不同性别、年龄、季节的分布特点及耐药性情况,指导临床合理用药。方法对2014年5月至2017年4月在深圳市罗湖区人民医院治疗的2 639例下呼吸道感染患儿痰标本进行分离培养后予以细菌学鉴定和药敏试验,并进行统计分析。结果检出病原菌1 431株,总阳性率为54.22%,其中革兰阴性菌占58.14%,以流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌为主;革兰阳性菌占41.86%,以肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌为主;男性患儿流感嗜血杆菌阳性率为15.69%,明显高于女性的11.88%,男性患儿金黄色葡萄球菌阳性率为11.66%,明显高于女性的8.67%,差异均有统计学意义(P<0.05);≤3岁组病原菌总阳性率为66.08%,明显高于>3岁组的14.14%,差异有统计学意义(P<0.05);春季以流感嗜血杆菌检出率最高,冬季以卡他莫拉菌检出率最高,肺炎链球菌及金黄色葡萄球菌无明显的季节差异(P>0.05);流感嗜血杆菌对四环素、氧氟沙星、利福平、氯霉素、头孢噻肟耐药率均<5%;肺炎链球菌及金黄色葡萄球菌对利奈唑胺和万古霉素敏感。结论本地区小儿下呼吸道感染病原菌分布存在性别、年龄、季节差异,临床对儿童下呼吸道感染应进行有针对性的治疗与干预,合理使用抗菌药物。

痰液宏基因组测序在肺部感染中的诊断价值

目的探讨痰液宏基因组测序(mNGS)在肺部感染中的诊断价值。方法选取2020年7月至2021年7月重症肺部感染患者,采集其痰液标本,并行微生物培养和mNGS同步检测,分析两种检测方法对重症肺部感染的诊断效能。结果22例患者的痰液同时进行微生物培养和mNGS检测,两种检测方法的阳性符合率93.8%,阴性符合率为33.3%,总符合率为77.3%。细菌检出率mNGS高于微生物培养法(77.3%vs.63.6%)。两种检测方法对1种及>2种病原体的检出率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在肺部感染病例中,痰液mNGS对病原菌的检出率高于微生物培养法,尤其对混合感染诊断价值更高,能为早期肺部感染提供诊断依据。

深圳市罗湖区发热性中性粒细胞减少性血液病患者病原菌分布和耐药性分析

目的分析深圳市罗湖区发热性中性粒细胞减少性血液病患者病原菌分布和耐药性。方法回顾性分析2017年6月~2019年12月深圳市罗湖区305例发热性中性粒细胞减少性血液病患者的临床资料、药敏实验结果,分析病原菌分布和耐药性。结果305例血培养阳性标本,共分离出非重复的病原菌82株,其中革兰氏阴性菌61株,占74.39%,以大肠埃希菌最多,共31株(37.80%);革兰氏阳性菌18株,占21.95%,以凝固酶阴性葡萄球菌最多,共8株(9.76%);真菌3株,占3.66%。药敏实验结果显示,肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对β内酰胺酶类抗菌药物的耐药率在40.00%~90.00%,但大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对β内酰胺酶抑制剂的复合物哌拉西林/他唑巴坦的耐药率较低,分别为6.00%、11.00%;大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对阿米卡星的耐药率分别为25.50%、12.30%;大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢西丁耐药率分别为38.00%、10.00%。肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对美洛培南、亚胺培南抗菌药物均高度敏感。铜绿假单胞菌对美洛培南、亚胺培南抗菌药物同样高度敏感,对哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟、氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物的耐药率为12.00%~26.00%。金黄色葡萄球菌对红霉素、苯唑西林、青霉素类抗菌药物的耐药率高达33.00%~100.00%。凝固酶阴性葡萄球菌耐药性高于金黄色葡萄球菌,达44.00%~100.00%。结论深圳市罗湖区发热性中性粒细胞减少性血液病患者病原菌分布以革兰氏阴性菌为主,对美洛培南、亚胺培南抗菌药物均高度敏感。

呼吸道病毒感染多重、快速检测技术

众多资料显示急性呼吸道感染中90％～95％是由病毒感染所致，其中多种病毒具有感染力强、传播快、潜伏期短、发病急等特点，并且近来新的致病性病毒还在不断地被发现，如人类偏肺病毒、SARS病毒、高致病性禽流感病毒等，给临床疾病诊断和治疗造成极大的困难。

大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌产ESBLs表型与基因型分析

目的了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌发生率及主要基因型分布特点。方法采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的纸片扩散法对临床标本中分离的110株大肠埃希菌和94株肺炎克雷伯菌进行ESBLs的表型确定试验,同时分别用聚合酶链反应(PCR)扩增法检测TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9耐药基因,并对其产物进行序列分析。结果产ESBLs阳性菌株的检出率分别为:肺炎克雷伯菌占36.2%,大肠埃希菌占42.7%,总检出率为39.7%;ESBLs检出模式以头孢噻肟、头孢噻肟/克拉维酸单组为底物阳性率最高,占阳性菌株的66.7%;单用头孢他啶,头孢他啶/克拉维酸一组为底物,会造成大肠埃希菌68.1%和肺炎克雷伯菌64.7%的漏检;耐药基因型分析显示,TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-2、CTX-M-9基因检出率分别为54.3%、38.3%、21.0%、24.7%、70.4%,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌均以CTX-M型为主要基因型,占91.4%;同时携带>2种耐药基因菌株占71.6%。结论医院分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株携带多种耐药基因严重,需引起临床的高度重视。