SATB-1与α-SMA在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨特异性富AT序列结合蛋白1(SATB-1)和平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)在胰腺癌中表达以及二者的临床意义。方法运用免疫组化染色检测了71例胰腺癌组织中SATB-1和α-SMA表达情况,收集患者的临床病理特征,并分析二者与临床相关因素的关系。结果 SATB-1和α-SMA在胰腺癌中阳性率分别为70.4%和77.5%;Kaplan-Meier分析提示SATB-1和α-SMA表达与胰腺癌患者总体预后有关,Cox回归分析提示分化程度和SATB-1是影响胰腺癌患者预后的独立因素;卡方检测提示SATB-1和α-SMA二者的表达存在显著相关性(P<0.05)。结论 SATB-1和α-SMA在胰腺癌中高表达,且SATB-1可作为预测胰腺癌患者预后的独立因素。

沉默NANOG基因表达对侧群表型肝癌干细胞化疗耐药的影响

目的观察沉默NANOG基因对侧群表型肝癌干细胞化疗耐药的影响,初步探讨提高肝癌化疗效果的新方法。方法基于侧群(SP)细胞分选法,采用流式细胞术从肝癌细胞Hep3B中分选SP细胞和非侧群(NSP)细胞,通过特异性靶向NANOG基因的si RNA沉默SP细胞中NANOG基因表达,MTT法检测SP细胞对化疗药物阿霉素(DOX)的敏感性,实时荧光定量PCR(real-time PCR)和免疫印迹(Western blotting)检测NANOG和耐药相关基因ABCB1的表达。结果 (1)肝癌细胞Hep3B中分选的SP细胞比例为(13.3±1.8)%。(2)MTT法结果显示DOX处理后SP细胞存活率为(65.3±5.4)%,NSP细胞存活率为(41.2±4.7)%;SP细胞对DOX的耐药性高于NSP细胞(P<0.05)。(3)NANOG和ABCB1 m RNA在SP细胞中的表达水平分别是NSP细胞的4.5、4.0倍;NANOG和ABCB1蛋白在SP细胞中表达水平分别是NSP细胞的4.2、3.6倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。(4)RNAi沉默NANOG表达后,si NANOG组SP细胞NANOG、ABCB1的m RNA和蛋白表达水平均较Mock组和si NC组明显下降(P<0.05),SP细胞对阿霉素DOX的耐药性显著降低(P<0.05)。结论 NANOG基因在维持SP表型肝癌干细胞耐药性起重要作用,沉默NANOG表达后SP细胞耐药性受到抑制,可能与ABCB1表达下调有关。

低氧条件下转化生长因子－β3促进大鼠骨髓间充质干细胞向软骨分化的分析

目的探索低氧环境下转化生长因子－β3（TGF－β3）诱导大鼠骨髓间充质干细胞（BM－MSCs）向软骨细胞分化的作用及相关机制。方法取SD大鼠的胫骨、股骨，运用全骨髓贴壁法培养BM－MSCs，通过流式细胞术检测其细胞表面抗原、定向诱导分化等方式鉴定BM－MSCs；在常氧或低氧条件下，添加TGF-β3诱导BM-MSCs，阿利新蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色检测BM－MSCs的软骨表达情况；实时荧光定量聚合酶链反应检测软骨Ⅱ型胶原蛋白（collagen Ⅱ）、聚蛋白多聚糖（aggrecan）、Ⅹ型胶原蛋白（collagen Ⅹ）的表达情况；蛋白免疫印迹法分别检测collagen Ⅱ、低氧诱导因子－1α（HIF－1α）及β－连环蛋白的表达情况。结果BM-MSCs呈成纤维细胞状，细胞表面高表达CD90（99.26%），CD29（96.41%），CD44（95.98%），弱表达CD45（8.8%）并可诱导向成骨、成脂、成软骨分化；阿利新蓝及细胞免疫荧光染色的结果发现低氧条件下添加TGF－β3培养BM－MSCs细胞团高表达aggrecan和collagen Ⅱ。实时荧光定量聚合酶链反应的结果发现，对比对照组，低氧条件下添加TGF－β3可使BM-MSCs的collagen Ⅱ、aggrecan和collagen Ⅹ的mRNA水平分别上调2.46、2.20和1.80倍（P〈0.05）。蛋白免疫印迹法提示低氧TGF－β3组较对照组HIF-1α、collagen Ⅱ表达量增加，β－连环蛋白表达量下降。结论低氧环境下TGF－β3可以明显促进BM－MSCs成软骨分化能力，并可能与抑制Wnt/β－catenin通路相关，从而为BM－MSCs治疗关节软骨损伤提供有效的新途径。