2010年广西食品中沙门氏菌污染状况和血清型分布及耐药谱的研究

目的了解广西消费量较高的食品中沙门氏菌的污染状况和菌株耐药情况,为预防由该菌引起的食物中毒及临床治疗用药提供科学依据。方法采用GB4789.4-2010进行沙门氏菌分离鉴定及血清分型,药敏试验采用微量肉汤稀释法(MIC)。结果 2 880份样本中检出沙门氏菌74株,检出率2.57%。其中肉与肉制品检出率为5.25%,以禽肉样本检出率最高,达10.36%;除蔬菜及冰激凌未检出沙门氏菌外,其余样品均有检出。食品种类间检出率有统计学意义(2=78.97,P<0.01),3种肉与肉制品间检出率也有统计学意义(2=49.36,P<0.01)。菌株分布于23个血清型,以德尔卑沙门氏菌最多为12株(16.22%)。菌株的耐药情况比较严重,除19株(25.68%)对13种抗菌药全部敏感外,其余55株(74.32%)均有不同程度的耐药。对四环素、萘啶酸、氯霉素、复方磺胺甲口恶唑及氨苄青霉素的耐药率分别为62.16%、54.05%、48.65%、43.24%、41.89%。菌株的多重耐药较为严重,2重及以上耐药菌株有45株(60.81%);4重及以上耐药菌株有32株(43.24%)。结论肉与肉制品中沙门氏菌污染较为严重,血清型分布呈多态性,菌株呈高耐药和多重耐药趋势,应引起重视。

广西食品中金黄色葡萄球菌污染状况及耐药情况分析

目的了解广西各类食品中金黄色葡萄球菌污染状况及耐药情况,预防由该菌引起的食物中毒和为临床用药提供依据。方法采用GB 4789.10-2010进行金黄色葡萄球菌分离鉴定,检出菌株采用天津金章公司生产的冻干型细菌定量药敏测试盒进行药敏试验。结果 1 409份样本检出金黄色葡萄球菌118株,检出率为8.37%。其中沙拉检出率为15.63%,其余6类样本均有不同程度的检出。该批菌株对盘尼西林耐药率高达88.98%;对四环素、苯唑西林、克林霉素、红霉素耐药率分别为39.83%、33.90%、24.58%、27.12%;对其余抗生素也有一定的耐药。菌株多重耐药严重,四重及以上耐药菌株有32株,占27.12%。结论食品中金黄色葡萄球菌污染较为严重,菌株的耐药和多重耐药普遍存在,应引起足够的重视。

食品安全监测技术在保障大型活动食品安全中的应用效果研究

目的建立"食品-餐饮-哨点医院"监测管理模式与重点食源性致病菌实时荧光PCR快速检验及溯源分析方法,并在保障大型活动食品安全活动中推广应用。方法采用"食品-餐饮-哨点医院"监测管理模式和实时荧光PCR快速方法开展对南宁市市售及大型活动中餐饮重点食品中致病菌和食源性病原株主动监测,应用PFGE分子分型方法开展溯源分析,结合创新餐饮管理模式,开展食品安全评估和预警。结果首府-南宁市市售食品及餐饮食品中均存在不同程度的副溶血性弧菌、沙门氏菌、志贺氏菌、肠出血性O157:H7、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、空肠弯曲菌、阪崎肠杆菌等致病菌污染,其中以副溶血性弧菌检出率最高达41.8%,其次是金黄色葡萄球菌为21.0%;腹泻标本中分离食源性致病菌与食用食品有直接关系;食源性致病菌危险评估与预警机制建立及大型活动食品安全管理模式的应用有效减少了食源性疾病发生。5年来,首府南宁市在大型活动期间未发生食物中毒事件,全市食物中毒起数呈逐年下降趋势;实时荧光PCR和基因指纹图谱检测方法能够快速检测食品和腹泻标本中食源性致病菌,通过散发性病例中的亲缘关系可溯源到原因食品。结论 "食品-餐饮-哨点医院"监测管理新模式的应用及检测新方法的使用可有效预防和控制食源性疾病的发生,确保大型活动食品安全。

即食凉拌米粉及盒饭中蜡样芽胞杆菌限量值初步探讨

目的制定广西即食凉拌米粉及盒饭中蜡样芽胞杆菌限量。方法采取样本监测及蜡样芽胞杆菌风险评估分析,提出广西即食凉拌米粉和盒饭中蜡样芽胞杆菌限量。结果 30份监测样本中蜡样芽胞杆菌检出率为80.0%,平均菌浓度为2.0×106cfu/g,大于105cfu/g占63.3%,即食凉拌米粉和盒饭中蜡样芽胞杆菌检出率间无统计学意义(2=0.83,P>0.25),菌浓度间差异无统计学意义(t=0.456,P>0.25)。蜡样芽胞杆菌风险阈值是105cfu/g。结论即食凉拌米粉和盒饭中蜡样芽胞杆菌限量设定为n=5,c=2,m=103cfu/g,M=104cfu/g。

2010年食物中毒及散发腹泻患者沙门菌PFGE分子分型研究

目的研究2010年沙门菌食物中毒及散发腹泻患者沙门菌分离株的分子分型。方法将从中毒事件患者和剩余食物及散发腹泻患者分离到的18株沙门菌进一步鉴定培养,用限制性内切酶Xba I消化酶切后进行脉冲场凝胶电泳,运用Bionumerics5.1聚类分析。结果指纹图谱聚类显示18株沙门菌分为多个分子型,同起食物中毒分离到的沙门菌有相同的指纹图谱;来自两个散发腹泻患者的分离株图谱也一致。结论脉冲场凝胶电泳可有效应用于食物中毒溯源分析及沙门菌分子流行病学研究。

肠道沙门菌O:4(B)菌群脉冲场凝胶电泳分子分型

为了明确2010年食源性疾病监测中分离的肠道沙门菌O:4(B)菌群的PFGE分子型别,探讨其多态性及其与分子流行病学关系,我们将分离获得的29株O:4(B)血清型沙门菌进一步鉴定培养,挑取单个菌落增菌,供试菌株基因组DNA用限制性内切酶XbaⅠ消化酶切后进行脉冲场凝胶电泳分型,所得结果用Bionumerics5.1软件进行聚类分析。实验结果表明,根据电泳指纹图谱,可将29株肠道沙门菌O:4(B)菌群分为24个PFGE型别,菌株间的相似值在56.31%～100%之间,同一血清型别的沙门菌有多个PFGE型别。脉冲场凝胶电泳对O:4(B)群沙门菌有较高的分型能力,可有效的应用于食物中沙门菌溯源分析及分子流行病学研究。

南宁市养殖屠宰场中沙门氏菌污染状况及耐药分析

目的了解南宁市养殖场及屠宰场中沙门氏菌的污染和菌株耐药情况,建立养殖场、屠宰场中沙门氏菌污染及耐药谱数据库。方法沙门氏菌分离鉴定依据GB 4789.4-2010,药敏试验采用微量肉汤稀释法(MIC)。结果 212份样本中检出沙门氏菌19株,检出率8.96%。屠宰场猪胴体带菌率最高,为20.00%;养殖场鸡活体带菌率次之,为15.56%;肉猪养殖场环境带菌率为6.67%;屠宰场鸡胴体带菌率为4.44%;肉鸡养殖场环境及养殖场猪活体均未检出沙门氏菌。各类样本间检出率有显著性差异(2=16.45,P<0.01),不同月份样本间检出率差异无统计学意义(2=7.72,P>0.05)。除4株菌未能分型外,其余菌株分布于4个血清群或亚群、6个血清型,里森沙门氏菌为主要优势菌(6株,31.58%)。菌株对四环素、氯霉素、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、萘啶酸及头孢西丁的耐药率分别为78.95%、73.69%、42.11%、31.58%、21.05%。多重耐药较为严重,2重及以上耐药菌株12株(63.16%);4重及以上耐药菌株7株(36.84%)。结论南宁市肉鸡、肉猪养殖场及屠宰场中沙门氏菌污染较为严重,血清型分布较广泛,菌株呈高耐药和多重耐药趋势,应引起重视。

2010年广西食源性致病菌监测结果鉴定分析

目的确保广西食品安全风险监测结果的准确,了解食源性致病菌监测网络实验室检验技术水平,为政府提高监测网络实验室的能力建设提供科学依据。方法依据《2010年国家食源性致病菌监测工作手册》和有关标准进行鉴定。结果市/县两级网络实验室上送分离菌株379株,经鉴定符合310株,符合率为81.8%,市级符合率(84.81%)高于县级(72.92%),符合率间差异有统计学意义(??2=6.80,P<0.01)。监测的8种致病菌中,沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌有较高的符合率,而出血性大肠杆菌O157、单核细胞增生李斯特氏菌、阪崎肠杆菌、创伤弧菌和空肠弯曲菌的符合较低。结论应加大监测网络实验室的能力建设投入,提高实验室的检验技术水平,确保食品安全风险监测结果的科学性和可靠性。

脉冲场凝胶电泳技术在铜绿假单胞菌现场调查中的应用研究

目的建立铜绿假单胞菌脉冲场凝胶电泳分子分型方法，对某医院患者送检标本及桶装矿泉水中分离到的铜绿假单胞菌进行分子分型，开展分子流行病学分析。方法将铜绿假单胞菌标准株和分离株进行复苏生化鉴定，用SpeI内切酶对试验株菌悬液凝胶块原位消化酶切后进行脉冲场凝胶电泳，比较获得的分子分型指纹图谱，运用Bionumerics5．1聚类分析。结果6株试验菌株中，有3株分离自患者，3株分离自桶装矿泉水，以及1株标准菌种，均获得清晰指纹图谱，条带数在20至25个之间，可分为A、B、C、D、E、F共6个基因型，相似度在70．6％～100．0％之间，其中两株患者来源的菌株相似度为100．O％。结论铜绿假单胞菌基因组经SpeI内切酶酶切后可获得理想的条带数便于分型。患者标本和饮用桶装矿泉水分离株没有直接相关性，但提醒仍需加强桶装矿泉水污染铜绿假单胞菌的管理；脉冲场凝胶电泳技术可有效应用于铜绿假单胞菌遗传学特征、传播途径及分布规律的分子流行病学研究。

2016年广西壮族自治区食源性沙门菌的耐药性与耐药谱研究

目的了解广西壮族自治区食源性沙门菌耐药状况,建立广西壮族自治区食源性沙门菌耐药性数据库。方法对2016年从广西壮族自治区各市县收集的分离自食品的70株沙门菌和分离自腹泻患者的234株沙门菌采用微量肉汤法对8类14种抗生素进行耐药性试验,开展耐药谱研究。结果所有沙门菌菌株均对亚胺培南敏感,对其余13种抗生素产生不同程度的耐药。70株食品来源的沙门菌对四环素耐药率最高(45.71%,32/70);234株腹泻患者来源的沙门菌对氨苄西林耐药率最高(70.94%,166/234),其次为四环素(70.09%,164/234)。腹泻患者来源沙门菌对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、四环素、萘啶酸、头孢噻肟和头孢唑啉的耐药率均高于食品分离株,差异有统计学意义(P<0.05)。2种来源的沙门菌耐药谱广泛,共同耐药谱为ACTT/S(耐氨苄西林-氯霉素-四环素-甲氧苄啶/磺胺甲噁唑)。结论广西壮族自治区食源性沙门菌耐药状况不容乐观,特别是对青霉素类、氯霉素类、磺胺类、四环素类抗生素严重耐药,提示应对其加强监测,建立科学的防控策略。

2011-2016年广西壮族自治区市售婴幼儿食品食源性致病菌监测结果分析

目的了解广西壮族自治区婴幼儿食品中食源性致病菌污染状况和趋势,为有效开展食源性疾病防控提供科学依据。方法2011-2016年从广西壮族自治区14个市采集婴幼儿食品,按照GB 4789系列标准和《2014年国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》规定方法分别进行4种致病菌检验。结果共检测7956份样品,其中婴幼儿谷类辅助食品阳性率为6.1%(249/4084),婴幼儿配方食品阳性率为4.7%(183/3872)。不同年度监测结果显示,婴幼儿谷类辅助食品中,阪崎肠杆菌阳性率范围为2.7%~5.6%,蜡样芽胞杆菌为2.3%~8.4%(除2011和2015年),金黄色葡萄球菌为0.0%~0.4%;婴幼儿配方食品中,阪崎肠杆菌阳性率范围为0.2%~1.8%,蜡样芽胞杆菌为10.2%~12.4%(除2011和2015年),金黄色葡萄球菌为0.0%~0.3%;沙门菌检出1份,产地为内蒙古自治区。婴幼儿谷类辅助食品中,国内阳性率为6.1%(248/4077),7份国外样品检出1份阳性样品;婴幼儿配方食品中,国内阳性率为4.7%(177/3758),国外为5.3%(6/114)。结论广西壮族自治区市售婴幼儿食品中阪崎肠杆菌和蜡样芽胞杆菌污染持续存在,对婴幼儿食品安全造成威胁,应加强对国内生产企业的卫生监管。

急性腹泻病患者与健康体检人员肠集聚性大肠埃希菌分子特征及耐药性研究

目的比较急性腹泻病患者与健康体检人员肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)在携带毒力基因、耐药性及分子分型之间的差异。方法以PCR方法检测EAEC的7种毒力基因,微量肉汤稀释法检测菌株对13种抗菌药物的耐药性,脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型分析。结果来自急性腹泻病患者的分离株中,毒力基因检出率最高为air,体检分离株为sat。48株EAEC对13种抗菌药物中的12种均表现出不同程度的耐药,对亚胺培南完全敏感,急性腹泻病患者分离株耐药性较体检分离株强。PFGE分型共得到43种带型,均呈现高度多态性。结论不同来源EAEC携带的毒力基因差异不显著,PFGE带型呈高度多态性,来源于腹泻病患者的EAEC耐药性明显高于健康体检人员。

广西食源性与禽源性沙门氏菌血清型分布及耐药性研究

目的了解广西食源性与禽源性沙门氏菌的菌型分布与耐药情况,为临床用药提供依据。方法随机采集农贸市场生鸡肉和大型养鸡场鸡肛拭标本,按照GB4789.4-2010进行沙门氏菌分离鉴定及血清分型,药敏试验采用微量肉汤稀释法(MIC)。结果 158份生鸡肉样本沙门氏菌检出率为22.78%,血清型以德尔卑沙门氏菌为主;194份鸡肛拭样本沙门氏菌检出率为13.92%,血清型以肠炎沙门氏菌为主。分离自鸡肛拭和生鸡肉中沙门氏菌对四环素、萘啶酸、氯霉素、氨苄青霉素耐药率分别为74.07%(58.33%)、85.18%(72.22%)、80.76%(63.89%)、55.56%(47.22%),5重耐药株分别占40.74%(38.89%)。结论广西食源性和与禽源性沙门氏菌菌型不同,均有高耐药和多重耐药。应当限制抗生素在食源性动物饲养过程中的应用,确保食品安全。

大豆及豆制食品中转基因成分检测分析

建立大豆及豆制食品中转基因成分分析的real-time PCR扩增体系和方法。选择市售的大豆、豆粉、豆干、豆腐、豆浆和腐竹等6种大豆及豆制食品,针对不同的样品探索高质量基因组DNA的提取方法,扩增大豆内参基因lectin进行质量检测。针对我国批准的3种主要转基因大豆品系(GTS40-3-2,A2704-12和MON89788)设计特异性的引物和探针,进行real-time PCR检测。购买3种转基因大豆品系的标准品作为质控对照。从该6种大豆及豆制食品中均提取到了高质量的基因组DNA,建立了稳定的针对外源基因特异性、结构特异性和品系特异性片段检测的real-time PCR扩增体系。成功建立了6种大豆及豆制食品中针对3种转基因大豆品系成分检测的real-time PCR方法。

广西市售婴儿食品中克罗诺菌分离株基因特征及进化分类鉴定

目的分析广西市售婴儿食品中的克罗诺菌分离株的种类、表型和基因特性。方法将保存的试验菌株进行复苏,通过API 20E生化条和omp A基因扩增检测进行初步鉴定,扩增16S r RNA基因后进行测序,将获得的全16S r RNA基因序列在Gene Bank数据库上比对,构建进化树,确认是否为克罗诺菌。将试验菌接种于显色平板观察其表型和黄色素的产生情况,通过手工生化进行分型,确定其种属。结果 9株分离菌确定为克罗诺菌,有5种生化型,属于4个克罗诺种。检出Cronobacter sakazakii 6株菌,C.malonaticus、C.muytjensii和C.dublinensis各有1株;7株菌符合API 20E鉴定结果,9株分离菌均可检测到omp A基因。结论广西市售婴儿食品中克罗诺菌的污染以C.sakazakii为主,生化表型、种属及基因型具有多样性;鉴定时仅以单一的生化或其他表型作为判别依据存在很大的局限,需辅以分子生物学手段加以鉴别。

2011年广西沙门菌血清型分布及耐药分析

目的了解广西沙门菌血清型分布及菌株耐药情况,建立广西沙门菌血清型及耐药谱数据库。方法沙门菌血清分型依据GB 4789.4-2010,药敏试验采用微量肉汤稀释法(MIC)。结果 74株菌分布于7个群或亚群、21个血清型,以B群沙门菌为优势菌(32株,43.24%)。菌株的耐药情况比较严重,除23株(31.08%)对8种抗菌药无耐药外,其余51株(68.92%)均有不同程度的耐药。对四环素、氯霉素、奈啶酸及甲氧苄啶/磺胺甲噁唑的耐药率较高,分别为55.41%、45.94%、37.84%、33.78%。菌株的多重耐药较为严重,2重及以上耐药菌株有34株(45.95%);4重及以上耐药菌株有20株(27.03%)。不同来源菌株耐药率差异无统计学意义(χ2=3.52,P>0.05)。结论沙门菌血清型分布呈多态性,菌株呈高耐药和多重耐药趋势,应引起重视。

诺如病毒合并副溶血性弧菌引起的食源性疾病相关分析

目的通过实验室检测结果进行病原体相关性研究,分析导致引起食源性疾病的真正病因,为类似事件的实验室检验提供参考。方法 2018年12月广西某市发生1起聚餐引起的疑似食源性疾病事件。采集参与聚餐的腹泻患者肛拭标本5人份,参照GB 4789《食品微生物学检验》以及本实验室建立的快速检测方法进行病原体的检测,将分离到的病原菌进行诊断血清分型、毒力基因检测及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型等实验以分析其相关性。结果该起食源性疾病的5份标本中诺如病毒阳性3份,其中GII型2份,GI/GII混合型1份;检出致泻大肠埃希菌2份,分离到的2份标本检出2株致泻大肠埃希菌uidA和eae基因阳性,均为肠道致病性大肠埃希菌(EPEC);检出副溶血性弧菌2份,其毒力基因相同,均为tdh+、trh-、tlh+、ORF8+;脉冲场凝胶电泳分析结果显示,2株副溶血性弧菌具有100%相似度。结论该起食源性疾病事件的病因是由GI、GII型诺如病毒合并副溶血性弧菌混合感染引起。建议在处理类似事件过程中运用各种新的科学检测方法进行全局分析,才能有效地避免出现误诊和漏诊。

2011年-2012年广西食源性致病菌监测结果鉴定分析

目的了解广西食源性致病菌监测结果的准确性,评价广西食源性致病菌监测网络实验室检验技术水平,探讨提高食源性致病菌监测网络实验室检验技术水平的方法。方法分别依据2011年、2012年各年度《食源性致病菌监测工作手册》)进行菌株鉴定。结果 2011年-2012年广西各市、县网络实验室上送食源性致病菌分离菌株11类共1649株,经鉴定符合菌株1408株,符合率85.39%。创伤弧菌鉴定符合率最高(96.77%),出血性大肠埃希氏菌最低(42.86%);11类菌株中有4类(36.36%)鉴定符合率低于80%。2011年、2012年上送菌株鉴定符合率分别为87.03%、84.19%,二者比较差异无统计学意义(χ2=2.60,P>0.05);市级、县级网络实验室上送菌株鉴定符合率分别为87.92%、82.61%,二者比较差异有统计学意义(χ2=9.29,P<0.05)。结论广西市、县食源性致病菌监测网络实验室检测能力及技术水平还比较低,应加大实验室能力建设的投入,不断提高实验室的检验技术水平。

广西食源性鼠伤寒沙门菌血清型和分子特征研究

目的掌握广西食源性沙门菌优势血清型,建立广西食源性沙门菌优势血清型脉冲场凝胶电泳(PFGE)指纹图谱资料库。方法对2015年收集的菌株进行血清分型,用PFGE方法对优势血清型鼠伤寒沙门菌进行分子分型,结合相关流行病学信息进行分析。结果 2015年从广西共收集到330株沙门菌,80株经血清学鉴定为鼠伤寒沙门菌,其中哨点医院病例中77株,食品中3株。80株鼠伤寒沙门菌经Xba I酶切分为67种型别,其中24株菌11种型别同源性分别达到100%,优势型别为JEX001.CN0056(3株)和JEX001.CN0062(3株)。36株菌26种型别同源性达到96%以上,JEX001.CN0015为食品分离株与腹泻病例株完全匹配型别。结论鼠伤寒沙门菌是2015年广西食源性沙门菌的优势血清型,呈高度散发状态。食品分离株与临床株之间同源性不高,但大部分散发腹泻菌株具有高度同源性。

广西北部湾经济区2016—2018年沙门菌血清种类的区位熵模型和偏离-份额分析法模型分析

目的通过分析广西北部湾经济区食源性和人源沙门菌的空间分布和增长情况,为预防和控制沙门菌引起的疾病提供科学参考。方法以北部湾经济区为研究区域,采用2016—2018年的沙门菌血清种类数据,通过构建区位熵(LQ)模型和偏离-份额分析法(SSM)模型,有效获取沙门菌的区位熵和区域增长份额、沙门菌构成偏离份额和区位偏离份额的数值。结果根据LQ模型,北部湾经济区沙门菌的区位熵大于1的种类有两种:鼠伤寒沙门菌(区位熵为1.05)和肠炎沙门菌(区位熵为1.19)。根据SSM模型,北部湾经济区鼠伤寒沙门菌的总偏离量为23.50株,肠炎沙门菌的总偏离量为4.18株,增长速度均快于广西沙门菌总体的增长速度。结论北部湾经济区沙门菌区域集聚水平比较高的种类是鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌。北部湾经济区鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌具备种类优势且具有很强的增长趋势。