运用法医学二代测序技术侦破19年久冷案

基于Y染色体STR(Y-STR)多态性的男性家系排查技术帮助全国各地破获了诸多冷案积案。然而对于出现明显降解的生物检材,或因检出Y-STR基因座数量过少而无法开展有效排查。STRSeqTyperY68男性家系精细化排查试剂盒,定位于二代测序技术,利用Mi Seq FGx二代测序平台可单管实现52个单拷贝Y-STR基因座、6个二拷贝Y-STR基因座、1个三拷贝Y-STR基因座和1个性别判定基因座的分型检测,并能同时支持STR长度和/或序列多态分型,全部基因座扩增子长度在350bp以下,且其中62个不大于300bp,适用于降解检材的检测。本文报道一起长达19年未破的强奸杀人案,用传统STR检测方法仅得到24个Y-STR基因座分型,部分300bp以上的Y-STR片段未检出,但通过二代测序方法使用STRSeqTyperY68试剂盒完整得到了67个Y-STR和1个性别基因座分型,从而帮助办案单位锁定了嫌疑人所在的男性家系,为案件侦破提供了关键技术支撑。

马立克氏病毒UL36蛋白的表达及其去泛素化酶活性分析

选取马立克氏病毒(MDV)去泛素化酶UL36蛋白N端具有蛋白酶活性的一段氨基酸序列,表达纯化并分析UL36的去泛素化酶活性特点。利用p Cold TF为表达载体,并在UL36-323的C端连接Strep tagⅡ作为纯化标签,构建重组质粒p Cold TF-UL36-Strep。应用大肠杆菌表达体系,低温诱导表达,并对该段蛋白进行纯化,得到可溶且纯度较高的蛋白后,通过Western blot确定所纯化的蛋白即是UL36蛋白。应用Di-Ub(K48)和SUMO1-GST作为底物鉴定其去泛素化酶活性。最终得到了可溶且纯度较高的UL36-323-Strep蛋白,并且通过酶切反应确定了其去泛素化酶活性,为进一步探究UL36在MDV感染及复制中的作用奠定前期基础,也为探究MDV的致病机理提供了必要的前提条件。

以CE-PCR产物为模板的STR序列多态分型方法

目的实现以荧光标记复合扩增产物为扩增模板的STR序列多态分型。方法筛选常用STR分型试剂盒基因座并设计引物,构建常染色体STR复合扩增体系。分别以毛细管电泳(CE)试剂盒GlobalFilerTM、PowerPlex?21和IdentifilerTM Plus的扩增产物为模板,扩增、建库测序及数据分析,评估体系分型准确性及对CE扩增产物的通用性,并与Precision ID GlobalFilerTM NGS STR Panel体系进行比较。结果该复合扩增体系能够从3款CE试剂盒的扩增产物中获得所有基因座的正确分型和序列多态信息,其体系均衡性和杂合子均衡性亦良好,且均优于Precision ID体系。结论该复合扩增体系建立了CE技术与二代测序技术之间的桥梁,实现了检材的零利用,能够进一步挖掘荧光标记扩增产物的STR序列多态信息,是对现有技术的提升和有效补充。