白细胞介素-2mRNA在大鼠垂体前叶的表达

目的 研究白细胞介素 - 2 (IL- 2 ) m RNA在正常大鼠垂体前叶的表达 .方法 从正常大鼠垂体前叶组织和离体原代培养的细胞中提取总 RNA,采用二步法 RT- PCR技术 ,扩增出相应大小的 DNA片段 ,将此片段通过凝胶电泳回收纯化后与 p GEM- T easy载体连接 ,转染到大肠杆菌细胞内 ,并接种于 L B培养基中培养 10～ 14h,挑选出阳性克隆进行 DNA序列测定 .结果 测定的 DNA与 IL- 2基因片段相同 .因而 ,在正常大鼠垂体前叶组织和培养细胞中都有 IL - 2 m RNA的表达 .结论 首次证实了 IL - 2不仅存在于垂体肿瘤组织中 ,而且在正常垂体组织中也有表达 .

17-β雌二醇对大鼠胸主动脉的舒张作用及其机制的研究

目的 :研究 1 7 β雌二醇 (E2 )对大鼠胸主动脉 (TA)的舒张作用及其机制。 方法 :采用体外血管灌流的方法 ,观察E2 对血管内皮完整和去内皮TA的舒张作用 ,以及雌激素受体 (ER)调节药他莫昔芬 (Tamoxifen)、左旋硝基精氨酸甲酯 (L NAME)、亚甲蓝 (MB)、四乙铵 (TEA)和格列本脲对这一过程的影响。 结果 :E2 (5× 1 0 -8～ 5×1 0 -5mol/L)可引起急性血管舒张 ,此作用具有剂量依赖性 ,而去内皮的血管舒张效应不明显 (P <0 .0 1 )。他莫昔芬 (1 0 -6mol/L)几乎能完全抑制E2 的舒张效应。一氧化氮 (NO)合成酶抑制剂L NAME(1 0 -5mol/L)部分抑制E2舒张TA的作用。MB是鸟苷酸环化酶 (GC)的抑制剂 ,1 0 -5mol/L的MB不仅有抑制E2 舒张TA的作用 ,而且有增强去甲肾上腺素 (NE)产生的收缩反应。钙激活钾通道 (KCa)的阻断药TEA (1 0 -4mol/L)和ATP敏感钾通道(KATP)的阻断药格列本脲 (1 0 -5mol/L)可减弱E2 的舒血管作用。 结论 :E2 对TA的急性舒张作用具有内皮依赖性。此作用是E2 通过非基因组方式使血管内皮细胞分泌NO ,进而引起血管平滑肌细胞 (VSMC)内的环磷酸鸟苷(cGMP)水平升高实现的 ,并且与KCa和KATP有关。

Idoxifene对人乳内动脉的舒张作用

为了研究idoxifene(吲哚昔酚,一种新型雌激素受体调节剂)对人乳内动脉(human internal mammary artery,HIMA)的舒张作用及其机制,采用离体血管灌流的方法,观察idoxifene对完整内皮和上内皮HIMA的舒张作用,以及L-NAME和美蓝(methylene blue,MB)对这一过程的影响,并且和17β雌二醇(17β-estradiol,E2)的舒血管作用进行了比较。实验中观察到保留血管内皮时idoxifene(0.01～10μmol/L)和E2(0.1～100μmol/L)可以剂量依赖性地舒张血管,且血管对idoxifene的灵敏度比对E2高15倍左右,而去皮时则无此作用;NO合成酶阻断剂L-NAME和鸟苷酸环化酶(guanylate cyclase,GC)的抑制剂MB使idoxifene舒张HIMA的作用完全消失。上述结果表明:idoxifene能够剂量依赖性地舒张HIMA,而且比E2更有效。idoxifene 的这种作用是通过NO—GC—cGMP通路实现的。

低钾加重大鼠心肌细胞再灌注损伤的机制

目的:观察低钾灌流液对大鼠心肌细胞再灌注时钙震荡的影响并探讨其作用机制.方法:Ca2+荧光指示剂Fura-2标记心肌细胞,在代谢抑制并低氧25min后,改用低钾台氏液([K+]=3.0mmol/L)灌流,记录细胞钙震荡的变化.以(再灌注末期细胞长度-缺血末期细胞长度)/(缺血前细胞长度-缺血末期细胞长度)×100%反映再灌注后细胞长度的恢复状况.结果:与含正常钾浓度的灌流液对照组([K+]=5.4mmol/L)相比,在再灌注10min内,低钾灌流液组出现钙震荡的次数显著增加(P<0.01,低K+组:138.80±9.54vs对照组:82.30±8.16,n=6),心肌细胞长度的恢复显著被抑制[P<0.01,低K+组:(24.30±6.01)%vs对照组:(54.50±6.56)%,n=6];再灌注期间给予钠-钙交换体反向交换模式抑制剂KB-R7943,可显著抑制低钾溶液对钙震荡和细胞长度的影响[P<0.01vs低K+组,n=6;钙震荡:27.40±6.76和细胞长度恢复:(58.90±7.30)%].结论:低钾再灌注液通过增强反向钠-钙交换体活性加重钙震荡,进而引发心肌损伤.

17β-雌二醇对CNE2细胞κ阿片受体表达的抑制作用

目的：观察雌激素对κ阿片肽受体（κOR）mRNA含量和蛋白表达的调节作用．方法：采用半定量RT—PCR和Western blot方法，检测17β-雌二醇作用24～72h后CNE2细胞κOR mRNA含量和蛋白表达的变化．结果：17β-雌二醇（μmol／L）作用24h后，CNE2细胞表达κOR mRNA和蛋白明显降低，mRNA和蛋白含量分别下降到对照组的（49．2±7．66）％（P〈0．01）和（60．8±8．36）％（P〈0．01）；作用时间延长到48h后，CNE2细胞κOR蛋白含量为对照组的（32．9±7．13）％（P〈0．01）；而延长到72h后，κOR mRNA和蛋白含量分别下降到对照组的（20．8±7．71）％（P〈0．01）和（29．8±8．41）％（P〈0．01）．结论：雌激素能够从转录水平抑制κOR在CNE2细胞的表达．

运用多媒体技术强化教学中的重点难点内容

教学中的重点和难点内容往往是学生学习和教师备课所面对的棘手问题，而如今计算机多媒体技术的应用，能够较好地解决此类问题。探讨了在生理学教学中采用计算机多媒体教学如何帮助教师更好地阐明生理学重点和难点内容。

雌激素和雌激素受体参与造血和免疫功能调节的研究进展

新近研究证明 ,雌激素及其受体 (ER)参与造血和免疫功能调节。在造血干细胞、骨髓基质细胞、T细胞、B细胞和树突状细胞中都有ERα和ERβ的表达。ERα缺乏 (ERα- / - )导致胸腺和脾脏发育不全 ,不成熟的CD4 + CD8+ 双阳性细胞所占的比例增加。卵巢切除的ERβ基因敲除小鼠(ERβ- / - )给予雌激素后的表型和野生型相似 ,虽然胸腺皮层有少许退化 ,但CD4 /CD8表型没有改变。ERα- / - 小鼠骨髓细胞数稍有增加 ,而骨髓的原 /前 (pro/pre)B淋巴细胞 (B2 2 0low/IgM- )和成熟的B淋巴细胞数减少 ,而ERβ- / - 小鼠原 /前B淋巴细胞总数在骨髓和脾脏都高于野生型。ERβ- / - 小鼠还表现出髓样细胞增生性疾病 ,伴随淋巴细胞危像 ,和人慢性髓样淋巴细胞白血病相似 ,提示ERβ有抑制造血干细胞增殖和分化的作用。对ER基因多态性和自身免疫性疾病的易感性之间关系的研究 。

血管钠肽对离体人乳内动脉的舒张作用

为了研究血管钠肽 (VNP)对人乳内动脉 (humanintramammaryartery ,HIMA)的舒张作用及其机制 ,采用离体血管灌流的方法 ,观察VNP对内皮完整和去内皮HIMA的舒张作用 ,以及HS 142 1、TEA、8 Br cGMP和镁蓝 (MB)对这一过程的影响。实验中观察到 ,VNP ( 0 0 0 0 1- 1μmol/L)可引起剂量依赖性的舒张效应 ,且无内皮依赖性 ;8 Br cGMP ( 0 1- 10 0 0 μmol/L)也可引起剂量依赖性的血管舒张效应。钠尿肽鸟苷酸环化酶 (guanylatecy clase ,GC)受体的特异性阻断剂HS 142 1( 2 0 μmol/L)使VNP舒张HIMA的作用几乎完全消失。MB是GC的抑制剂 ,10 μmol/L的MB不但使VNP舒张HIMA的作用完全消失 ,而且可增强HIMA对去甲肾上腺素 (NE)产生的收缩反应。钙激活钾通道 (KCa)的阻断剂TEA( 1mmol/L)可减弱 (但是不完全阻断 )VNP的舒血管作用。上述结果表明 ,VNP对HIMA具有不依赖内皮的舒张作用 ;此作用是通过作用于平滑肌细胞的钠尿肽GC受体 ,引起细胞内的cGMP水平升高实现的 。

雌激素对大鼠脾脏单核细胞衍生的树突状细胞分化和功能的影响(英文)

目的 :研究雌激素是否可通过影响树突状细胞 (DC)而调控实验性自身免疫性脑脊髓膜炎 (EAE)大鼠的免疫应答。方法 :在细胞因子和不同浓度的 17β 雌二醇存在下 ,从大鼠脾脏单核细胞培养DC ,用流式细胞仪检测DC表面分子 ,通过抗原提呈实验观察雌二醇处理的DC(E2 DC)抗原提呈能力是否改变。用含髓鞘碱性蛋白 (myelinbasicprotein ,MBP6 8- 86)的佐剂免疫大鼠 ,观察皮下或静脉注射E2 DC对EAE大鼠免疫应答是否有影响。结果 :17β 雌二醇可加速DC分化 ,特征性表现为CD11c、共刺激分子B7 2和CD40的上调 ,而抗原提呈能力未有改变。在DC和T细胞共培养的上清液中 ,IFN γ分泌下降而IL 10水平升高。给免疫 5d的EAE大鼠静脉注射E2 DC ,可激活淋巴结细胞的免疫应答 ,如提高细胞增殖能力和细胞因子产生 ,而脾脏产生MBP特异性抗体的细胞数量减少。结论 :雌激素能影响DC的分化和功能 ,导致Th2细胞因子产生 。

雌激素受体基因敲除小鼠脾脏免疫学改变的形态学观察(英文)

目的 :形态学观察雌激素受体基因敲除小鼠脾脏免疫学指标是否发生改变。方法 :应用免疫组织化学和免疫荧光法进行检测。结果 :雌激素受体基因敲除小鼠 ,尤其是ERβ敲除小鼠 (BERKO)的脾脏出现多种异常 ,如促炎症细胞因子和诱导型一氧化氮增高 ,脾细胞增殖增强并能抵抗雌激素的抑制作用 ,IgM /IgG表达也明显增高。雌激素受体缺乏小鼠脾脏NF kB的激活可能是脾细胞过分活跃的原因。结论 :雌激素受体 ,尤其是ERβ在介导雌激素对免疫反应的调节中起重要作用 。

正常妊娠大鼠的Th2型免疫反应(英文)

采用流式细胞仪,3H-TdR掺入和酶联免疫打点(enzyme-linked immunospot,ELISPOT)方法,研究妊娠免疫学指标的改变。妊娠晚期大鼠脾脏单个核细胞表面分子主要组织相容性抗原Ⅱ(MHdCⅡ)明显下调,外周血单个核细胞表达CD11c明显减少,共激活分子B7-1和B7-2未见改变;脾脏和外周血单个核细胞中Th2细胞因子IL,10、IL-4表达增多,TGFB阳性细胞数也明显增加,而Th1细胞因子IFNγ的产生未受抑制。此外,脾脏和外周血中单个核细胞的抗原特异性增殖未见改变,而腹腔淋巴结细胞的增殖明显升高。脾脏单个核细胞在妊娠晚期分泌较少的抗原特异性抗体。提示妊娠期性激素具有免疫调节作用,可能与怀孕时Th1细胞介导的自身免疫性疾病得到缓解有关。

胚胎鼠胃粘膜上皮细胞的原代培养

采用胰酶冷消化法对胚胎鼠胃粘膜上皮细胞进行了培养，细胞培养于含２０％的胎牛血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２的培养液中，种植２４ｈ后开始生长，３ｄ长成片状，相差显微镜下观察９０％的细胞具有上皮细胞特征。免疫细胞化学显示：（ａ）９０％的细胞上皮角蛋白染色阳性；（ｂ）９０％的上皮细胞ＰＡＳ染色阳性；（ｃ）２０％的上皮细胞琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）染色阳性。透射电镜可见微绒毛、连接复合物（紧密连接，桥粒）、丰富的糖原、线粒体。放射自显影结果表明：上皮细胞具有合成ＤＮＡ的能力，而且在培养２ｄ时增殖能力最强。本实验为研究胃粘膜的功能提供了较好的方法。

代谢抑制处理后大鼠心室肌细胞反向Na^+/Ca^(2+)交换体转运功能的变化

目的:利用荧光标记法观察代谢抑制处理后,大鼠心肌细胞反向Na+/Ca2+交换体(NCX)转运功能的变化。方法:酶解法分离制备钙耐受心肌细胞用Fura-2/AM负载,采用双激发荧光光电倍增系统(IonOptix Photom etry Sys-tem)检测钙信号。结果:细胞置于无Na+液后,可见[Ca2+]i逐渐升高,L-型Ca2+通道阻断剂n ifed ip ine在浓度为1μmol/L时,不影响此现象;而NCX的抑制剂N i2+,在浓度为1 mmol/L时,则完全阻断[Ca2+]i的升高。采用20mmol/L乳酸加10 mmol/L脱氧葡萄糖作为代谢抑制物处理心肌细胞不同时间,正常Tyrode液灌流10 m in,之后检测无Na+液引发[Ca2+]i升高效应的变化,发现5 m in处理与对照组无显著性差异,10和30 m in处理后此效应逐渐减弱。结论:首次发现,代谢抑制处理后心肌NCX的反向转运功能被抑制,阐明其调节机制,将为心肌缺血/再灌注损伤的治疗提供新思路。

代谢性抑制预处理中Na^+/Ca^(2+)交换体反向转运的激活触发预处理后的心肌保护作用(英文)

目的研究大鼠心室肌细胞在代谢性抑制预处理中钠/钙交换体(NCX)反向转运的活性,以及NCX反向转运抑制剂是否可以阻止代谢性抑制预处理后的心肌保护作用。方法酶解法分离制备钙耐受心肌细胞,用Fura2/AM负载,采用双激发荧光光电倍增系统(IonOptixPhotometrySystem)检测钙信号,用单心肌细胞动缘探测技术观察心肌细胞收缩/舒张功能,台盼蓝染色法检测细胞存活率。结果在代谢性抑制预处理30min时,NCX反向转运被激活。NCX反向转运抑制剂KBR7943(0.5μmol/L)可以抑制代谢性抑制预处理对心肌细胞收缩功能和细胞存活率的作用。NCX激动剂E4031(1μmol/L)可以模拟代谢性抑制预处理后对心肌细胞收缩功能的保护作用,这一作用也可被KBR7943阻断。结论代谢性抑制预处理中,NCX反向转运的激活触发了代谢性抑制预处理后的心肌保护作用;NCX的抑制剂可以阻止代谢性抑制预处理后的心肌保护作用。

IL-2促进C6胶质瘤细胞增殖及IL-2R在该细胞的表达

目的 观察 IL - 2对 C6大鼠星形神经胶质瘤细胞增殖的影响 ,并从蛋白及 m RNA水平观察白细胞介素 - 2受体(IL - 2 R)α,β,γ 3条链在 C6神经胶质瘤细胞中的表达 .方法 应用细胞培养、MTT法、3H- Td R掺入法、免疫细胞化学方法和 RT- PCR技术 .结果 1IL - 2 (1× 10 4 ～ 1× 10 6 U·L- 1 )可显著促进 C6细胞的增殖 ;2 C6细胞中检测到 IL - 2 R的 β、γ2条链的免疫反应阳性物质 ;3IL- 2 Rβ,γ m RNA在C6细胞中均有表达 .结论 IL - 2可显著促进 C6神经胶质瘤细胞的增殖 ,C6细胞表达 IL- 2 Rβ、γ2条链的蛋白与 m RNA,可能介导 IL- 2增殖信号的传递 ,从而初步证实 IL- 2可直接作用于神经胶质细胞并进一步阐明了 IL- 2增殖信号的转导机制 ,为揭示细胞因子在神经系统中的普遍作用机制提供更多证据 .

17β雌二醇对人桡动脉舒张作用的体外实验

目的:研究17β雌二醇(17β-estradiol,E2)对人桡动脉(RA)的舒张作用及其机制.方法:采用离体血管灌流的方法,观察E2对人RA的舒张作用以及NO合成酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(Nω-nitro-L-argininemethylester,L-NAME),8-Br-cGMP和鸟苷酸环化酶抑制剂美蓝(MB)对这一过程的影响.结果:观察到E2(0.1～100μmol/L)可剂量依赖性地舒张血管且具有内皮依赖性;8-Br-cGMP(0.1～1×103μmol/L)也可引起剂量依赖性的血管舒张效应.10μmol/LMB使E2舒张人RA的作用完全消失.10μmol/LL-NAME能部分抑制E2舒张TA的作用.结论:E2对RA的急性舒张作用具有内皮依赖性.此作用是E2通过非基因组方式使血管内皮细胞分泌NO、进而可能引起血管平滑肌细胞内的cGMP水平升高实现的.

大鼠背根节神经元后超极化中Ca^(2+)激活K^+电流的蜂毒明肽敏感成分I_(AHP)

为了明确大鼠背根节（DRG）神经元中存在慢的Ca2+激活K+电流成分，本实验在新鲜分散的DRG神经元胞体上，采用全细胞电压箝技术，给予DRG神经元一定强度的去极化刺激，记录刺激结束后30ms时的尾电流幅度。结果发现：（1）随着去极化时间从1ms延长至180ms时，尾电流幅度由9．3±2．8pA逐渐增大至64.1±3．4pA（P＜0．001）；（2）当去极化结束后的复极化电位降低时，尾电流幅度先逐渐下降到零，然后改变方向，逆转电位约为-63mV；（3）细胞外施加500μmol／LCd2+或细胞内液中施加11mmol／LEGTA时尾电流明显减小甚至完全消失；（4）尾电流中慢成分的幅度在细胞外给与200nmol／L蜂毒明肽后，减小了约26.32±3。9％（P＜0。01）；（5）细胞外施加10mmol／LTEA，可明显降低尾电流中的快成分。结果提示，在DRG神经元启超极化中存在Ca2+激活K+电流的蜂毒明肽敏感成分──IAHP。

血管钠肽对人桡动脉的舒张作用及其机制

目的 :研究血管钠肽 (VNP)对人桡动脉 (humanradialartery,HRA)的舒张作用及其机制。方法 :采用离体血管灌流的方法 ,观察VNP对内皮完整和去内皮HRA的舒张作用 ,以及 8 Br cGMP、NPR A、B选择性抑制剂HS 14 2 1、鸟苷酸环化酶选择性抑制剂美蓝 (methyleneblue ,MB)和Ca2 + 激活K+ 通道 (Ca2 + activatedK+ channel,KCa)的选择性抑制剂TEA对这一过程的影响。结果 :VNP(10 10 ～ 10 -6mol/L)可剂量依赖性地舒张HRA ,该作用无内皮依赖性。 8 Br cGMP(10 -7～ 10 -3 mol/L)可模拟VNP的血管舒张效应。HS 14 2 1(2× 10 -5mol/L)或MB(10 -5mol/L)完全阻断VNP舒张作用。TEA(10 -3 mol/L)减弱VNP的舒血管作用。结论 :VNP对HRA具有不依赖内皮的舒张作用 ,它主要是通过作用于NPR A、B ,即钠尿肽的鸟苷酸环化酶耦联受体 ,升高细胞内的cGMP水平。KCa可能是其舒张作用的重要效应分子。为应用VNP防治血管移植术后的痉挛提供了重要的理论依据。目的 :研究血管钠肽 (VNP)对人桡动脉 (humanradialartery,HRA)的舒张作用及其机制。方法 :采用离体血管灌流的方法 ,观察VNP对内皮完整和去内皮HRA的舒张作用 ,以及 8 Br cGMP、NPR A、B选择性抑制剂HS 14 2 1、鸟苷酸环化酶选择性抑制剂美蓝 (methyleneblue ,MB)和Ca2

小鼠杏仁内侧核中白细胞介素1β的表达调控依赖于雌激素受体α(英文)

研究雌激素受体 ( ER)敲除小鼠脑内 ,ERα和 ERβ在介导内侧杏仁核中白细胞介素 1β( IL -1β)表达的作用。IL-1β表达有显著的性别差异 ,并且在 ER敲除小鼠含量减少。细菌脂多糖 ( L PS)或卵巢切除能够促进野生型和 ERβ敲除小鼠 ( BERKO) IL-1β表达 ,但对 ERα敲除小鼠 ( ERKO)无作用。相似的是 ,外源性雌激素能抑制野生型和 BERKO小鼠 IL -1β表达 ,后者时间稍有延搁 ,但对 ERKO IL-1β表达没有影响。结果表明 ,ERα是内侧杏仁核 IL -1β表达调节的重要机制 ,提示