HMGN基因家族在肝癌中的表达及预后价值的分析

目的本研究旨在通过生物信息学方法分析肝癌中HMGN基因家族的表达水平及其与临床预后的关系。方法应用TCGA和GEO数据库,分析HMGN家族各成员在肝癌组织与正常组织的表达水平,并进一步分析HMGN家族在肝癌不同分期的表达水平。然后,HMGN基因家族的表达水平与肝癌患者的预后相关性通过GEPIA数据库进行分析。最后,利用LASSO分析,构建肝癌预后风险模型,并评价模型的预测效果。结果在肝癌组织中,HMGN1、HMGN2和HMGN4的表达水平显著高于正常组织。肝癌Ⅰ期的HMGN1、HMGN2、HMGN3和HMGN4的表达水平显著低于Ⅱ期和Ⅲ期。HMGN1、HMGN2和HMGN4的表达水平与肝癌患者的总体生存率呈负相关。HMGN1、HMGN2、HMGN3和HMGN4的表达水平与肝癌患者的无病生存率呈负相关。基于HMGN2、HMGN3和HMGN4的预后风险模型可评估肝细胞癌患者的预后。结论HMGN1、HMGN2和HMGN4可能成为肝癌新的诊断和治疗靶点。

Hedgehog信号通路在人肝癌细胞株中的表达及意义

目的探讨Hedgehog信号通路在人肝细胞癌细胞系中的表达及意义。方法采用半定量RT-PCR法检测PLC/PRF/5、HepG2及SMMC-7721肝癌细胞株中Shh、Ptch1、Smo、Gli1、Gli2mRNA的表达;Western blot法检测PLC/PRF/5、HepG2及SMMC-7721肝癌细胞株中Gli2蛋白的表达。结果除Shh外,Ptch1、Smo、Gli1、Gli2mRNA在PLC/PRF/5、HepG2及SMMC-7721细胞中均有不同程度表达。其中,Ptch1、Smo、Gli1、Gli2mRNA在PLC/PRF/5及SMMC-7721细胞中的表达强度显著高于成人正常肝细胞,而Gli1mRNA在HepG2细胞中的表达量与正常肝细胞无明显差异;Gli2蛋白在成人正常肝细胞中几乎没有表达,在HepG2细胞中的表达也与正常肝细胞无明显差别,而在PLC/PRF/5及SMMC-7721细胞中,尤其是SMMC-7721细胞,Gli2的表达量异常增高。结论 Hedgehog信号通路的异常激活参与了肝细胞癌的发生发展过程,Gli2可能成为肝细胞癌重要生物学标志和生物治疗靶点。

Vps4A对肝癌细胞SMMC-7721的Wnt途径的影响

目的探讨Vps4A对肝癌细胞SMMC-7721中Wnt途径的影响。方法构建过表达Vps4A的SMMC-7721细胞稳定株,通过RT-q PCR的方法检测19个WNT基因的转录水平的变化,进一步通过Western blot及检测相关下游基因Notch2的变化进行确定。结果在SMMC-7721中,经典Wnt亚型Wnt10a和Wnt10b的m RNA水平较高,而在过表达Vps4A之后,其蛋白及m RNA水平均显著下降。同时,在过表达Vps4A细胞株中,与经典Wnt通路相关的下游靶基因Notch2在转录及表达水平同样明显下调。结论Vps4A选择性抑制肝癌细胞SMMC-7721的经典Wnt/Notch2途径。

腹腔镜术后肺损伤及miRNA的表达

腹腔镜手术是近年来发展迅速的微创外科术式,具有创伤小、恢复快等特点,然而手术过程中建立CO2气腹所造成的腹腔内高压及酸碱平衡失调等因素均会引起肺组织损伤,导致术后肺功能不全,重者甚至可发展成为呼吸功能衰竭。微小RNA(miRNA)作为一类小分子的非编码调控RNA,在多个层面的生命过程中起调节作用,研究表明miRNA与各种肺部疾病的发生、发展及转归有密切的联系。随着腹腔镜技术的成熟和普及,腹腔镜术后肺损伤问题日益突显,更好地探索并理解其发生机制以及mi RNA在其中发挥的作用,能为我们日后的诊断和治疗提供更好的依据。本文将就近年来国内外有关腹腔镜术后肺损伤机制以及miRNA在其中可能发挥的作用作简要阐述。

小型猪腹腔镜肝切除模型的建立

目的介绍构建小型猪腹腔镜肝切除模型的经验和体会,并评价其应用价值。方法建立小型猪腹腔镜肝左外叶切除的动物模型,其技术包括Trocar戳孔布局及CO2气腹的建立、肝脏游离及入肝血流阻断、肝脏离断及肝内外管道的处理等。结果共10只小型猪接受了腹腔镜肝左外叶切除手术,均建模成功,未有中转开放,手术平均时间65.4±10.4 min,平均出血量164.2±23.5 m L,术中无大血管及腹腔脏器损伤等严重并发症发生。结论建立小型猪腹腔镜肝切除模型是安全可行的,并可作为学习腹腔镜肝切除技术的一种重要途径。

新闻App盈利途径

对于传统媒体而言，只有真正找到App新闻应用软件的盈利模式，才对传统媒体的转型具有现实的意义，而不具盈利能力的新闻App则只具有“花瓶”的摆设价值。

小干扰RNA逆转Wnt/β-catenin通路对肝癌耐药细胞株HepG2/ADM的影响研究

目的了解沉默β-catenin基因对肝癌耐药细胞HepG2的影响。方法实验分为5组:正常肝细胞(LO2)组、HepG2组、HepG2/ADM组、SiNC-HepG2/ADM阴性转染组和Siβ-cateninHepG2/ADM转染组;细胞免疫荧光技术检测各组β-catenin的表达情况;设计并筛选出抑制效率最高的Siβ-catenin;Western-blot及RT-PCR技术检测各组β-catenin、P-gp、MRP1的mRNA和蛋白的表达水平;MTT法观察各组对阿霉素(ADM)、氟尿嘧啶(5-FU)、环磷腺苷(VCR)和奥沙利铂(OHP)的敏感性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡。结果 50 mol/L的ctnnb1-001在HepG2/ADM中抑制效率最高:78.86%(P<0.05),选其为Si-β-catenin;细胞免疫荧光显示HepG2/ADM中β-catenin荧光最强,转染Si-β-catenin后荧光显著减弱;β-catenin、P-gp和MRP1 mRNA和蛋白在HepG2/ADM组表达较高,mRNA表达分别为:0.92±0.03、7.98±0.43和4.56±0.12(P<0.05),蛋白表达分别为:1.128±0.214、1.678±0.344和1.405±0.212(P<0.05);转染Siβ-catenin至HepG2/ADM中,β-catenin、P-gp和MRP1在mRNA及蛋白水平均不同程度表达减少,mRNA表达分别为:0.47±0.03、0.66±0.054和0.74±0.03(P<0.05),蛋白表达分别为:0.787±0.032、0.797±0.055和1.390±0.050(P<0.05);Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组较HepG2/ADM组对ADM、5-FU、VCR和OHP的耐药系数(RI)分别为0.61、0.55、0.30、0.55,对化疗药物敏感性显著增强(P<0.05);Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组凋亡率(28.05±0.35)%,较其他组明显增加(P<0.05)。结论 Wnt/β-catenin通路在HepG2中异常激活,其中β-catenin可能正性调控肝癌耐药基因P-gp和MRP1,Si-β-catenin能一定程度阻断Wnt通路,并能一定程度逆转肝癌细胞株HepG2的耐药性和增强化疗敏感性,增加凋亡。

Vps4在肝癌及癌旁组织中的差异性表达及其临床意义

目的液泡蛋白分选因子4(vacuolar protein sorting 4 Vps4)是调节细胞分裂、病毒芽胞形成的重要因素,本文检测其在肝细胞癌(HCC)患者的癌旁组织、癌组织及正常肝组织中差异性表达,分析该蛋白与肝癌临床病理资料之间的关系。方法应用免疫组织化学法检测56对经手术切除并有明确病理诊断为肝细胞癌的癌组织、癌旁组织及11例正常肝组织标本中Vps4的表达。比较上述组织中Vps4的表达并分析该蛋白表达与临床病理资料之间的关系。结果 1)癌组织、癌旁组织、正常肝组织、癌栓、转移性淋巴结等组织的细胞质中均可表达Vps4;2)癌组织中Vps4平均表达量低于癌旁组织和正常肝组织,差异有统计学意义(P<0.05);正常肝组织与癌旁组织中Vps4的平均表达量无明显差异(P>0.05);3)Vps4的表达与HBV-DNA复制量有关,与年龄、性别、肿瘤直径、肝内多发病灶、肝外淋巴结转移、肝胞膜完整性、肝硬化、AFP表达量、Child-Pugh分级、脉管癌栓、Edmonson分级、TNM分期等无关。结论癌组织中Vps4表达明显低于正常肝组织及癌旁组织,且与HBV-DNA复制量有关,Vps4表达可能影响肝癌的发生和发展。

登顶珠峰,展望未来——微创胰十二指肠切除术的现状与展望

胰十二指肠切除术是治疗胰头、壶腹部肿瘤的经典术式,是普通外科最复杂的手术之一。近年,随着腹腔镜技术的迅猛发展及达芬奇机器人的推广,微创胰十二指肠切除术(minimally invasive pancreaticoduodenectomy,MIPD)也趋于成熟并得到越来越广泛的认可与开展。笔者通过复习文献并结合本中心的经验对MIPD的现状与发展作一综述。

基因NEK9在肝细胞癌组织中的表达效应及其临床意义

目的研究基因NEK9在肝细胞癌组织中的表达效应,并探讨其表达量与其临床病理参数的关系。方法收集从2010~2011年我院60例原发性肝细胞癌患者肝癌组织及其配对癌旁组织,并统计分析其临床病理资料;同时采用荧光定量PCR、免疫组化方法检测肝癌组织和癌旁组织中NEK9基因和蛋白的表达水平,分析NEK9的表达量与其相对应临床病理参数之间的关系。结果相对于癌旁组织,肝细胞癌组织中基因NEK9的表达量在m RNA水平显著高表达(25/30)(P<0.05),在蛋白质水平亦呈显著高表达(65%及21.7%)(P<0.05);癌组织中NEK9的表达水平与TNM分期、转移和复发等临床病理参数有相关性(P<0.05);癌组织中NEK9高表达组患者的术后无瘤生存时间较低表达组明显缩短(P<0.05)。结论原发性肝细胞癌组织中NEK9的高表达与肿瘤大小、TNM分期、转移和复发密切相关,并有可能成为预测肝癌患者预后的生物学标志物。

小干扰RNA沉默MDRl基因对SMMC-7721肝癌细胞株多药耐药性的影响

目的将表达特异性的小干扰RNA（siRNA）导入肝癌耐药细胞，干扰多药耐药（MDRl）基因后，观察其对肝癌耐药细胞化疗敏感性的影响。方法使用浓度梯度法制作sMMC-7721耐阿霉素细胞株（SMMC-7721／ADM），阿霉素浓度从0．1～2．0ms／L；转染siRNA（浓度25、50、75nmo/L）沉默此耐药株MDRl基因；转染后24、48、72h用定量逆转录．聚合酶链反应（qRT．PCR）检测各组细胞MDRl的mRNA表达水平；siRNA（浓度50nmoVL）转染后48h，行噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞对化疗药物的敏感性，计算各药物的半数抑制浓度（IC50）和耐药系数（RI）；流式细胞仪（FCM）检测细胞对阿霉素（浓度0．2mg／L）的凋亡。Westernblot检测蛋白表达含量。结果SMMC-7721／ADM对阿霉素、5．氟尿嘧啶（5．Fu）、长春新碱、奥沙利铂的RI为25．43、68．32、39．17、18．31。siRNA转染沉默MDRl基因后，发现其对上述药物的RI为5．01、17．04、4．96、1．62；qRT．PCR发现其MDRlmRNA表达量显著降低（P〈0．05）；Westernblot显示其MDRl表达产物P—gp蛋白显著降低（P〈0．05）；FCM发现加入阿霉素后，其细胞凋亡指数显著大于沉默前（P〈0．05）。结论用siRNA沉默SMMC-7721／ADM的MDRl基因后，SMMC-7721／ADM对化疗药的敏感性显著增加。MDRl基因与SMMC-7721肝癌细胞的多药耐药性显著相关，可通过沉默其MDRl基因来提高耐药肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。

小干扰RNA沉默多药耐药相关蛋白基因2对人肝癌细胞HepG2多药耐药的逆转作用

目的检测小干扰RNA（siRNA）对肝癌耐药细胞株HepG2／阿霉素（ADM）多药耐药相关蛋白基因2（MRP2）及其蛋白产物的抑制作用，观察对多药耐药性的影响。方法使用浓度梯度法制作HepG2耐ADM细胞株（HepG2／ADM），ADM浓度从0．1～2．0mg／L；设计合成针对MRP2的siRNA小片段，转染HepG2／ADM耐药细胞，24h后通过实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应（RT—qPCR）和Westernblot检测siRNA对MRP2基因mRNA和蛋白的抑制效果；噻唑蓝（MTT）比色法观察抑制MRP2基因表达后，HepG2／ADM细胞对化疗药物的敏感性变化，并计算各药物的半数抑制浓度（IC50）。结果HepG2／ADM对ADM、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、长春新碱和奥沙利铂的IC50值分别为0．3204、3．8002、0．2014和0．1221；siRNA明显抑制了HepG2／ADM细胞MRP2基因mRNA和蛋白的表达（P〈0．05）；转染MRP2-siRNA后，HepG2／ADM细胞对ADM、5-Fu、长春新碱和奥沙利铂的IC50值明显减小，分别为0．1023、1．4417、0．0452和0．0268。结论用siRNA沉默MRP2基因能够逆转HepG2／ADM细胞对化疗药物的耐药性，MRP2基因与HepG2／ADM肝癌细胞的多药耐药性相关，可通过沉默MRP2基因提高耐药细胞对化疗药物的敏感性。

多药耐药相关蛋白4在肝癌细胞株SMMC-7721中化疗耐药的作用

目的 观察沉默多药耐药相关蛋白4（MRP4）基因对SMMC-7721耐阿霉素细胞株（SMMC-7721-ADM）的影响.方法 实验分为4组：SMMC-7721组、SMMC-7721-ADM组、SiNC-SMMC-7721-ADM阴性转染组、沉默MRP4的小干扰RNA （siMRP4）-SMMC-7721-ADM转染组;设计并筛选出抑制效率最高的siMRP4;Western blot及反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组MRP4蛋白和mRNA的表达水平;噻唑蓝（MTT）法观察各组对阿霉素（ADM）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）、长春新碱（VCR）和奥沙利铂（OHP）的敏感性;流式细胞术检测各组细胞凋亡.结果 浓度为25 mol/L的4-6-MRP4抑制效率为87.60％,选其为siMRP4;SMMC-7721组中MRP4 mRNA和蛋白极少量或不表达（0.08 ±0.03,P＜0.05;0.025±0.009,P＜0.05）,SMMC-7721-ADM组显著高表达（8.76 ±0.08,P＜0.05;0.684±0.004,P＜0.05）,siMRP4-SMMC-7721-ADM转染组（1.00 ±0.01,P ＜0.05;0.180±0.003,P＜ 0.05）较SMMC-7721-ADM组明显下降但仍稍高于SMMC-7721组;siMRP4-SMMC-7721-ADM转染组与SMMC-7721-ADM组比较对ADM、5-Fu、VCR和OHP的耐药系数（RI）分别为0.40、0.85、0.32、0.05,较SMMC-7721-ADM对化疗药物敏感性增强（P＜0.05）,siMRP4转染组凋亡率3.26％较SMMC-7721-ADM组增加（P＜0.05）.结论 MRP4在SMMC-7721极少量或不表达,SMMC-7721-ADM肝癌细胞株高表达,沉默MRP4能较大程度逆转其化疗耐药性.

siRNA沉默MRP5基因对人肝癌细胞HepG2多药耐药性的影响

目的探讨si RNA沉默多药耐药相关蛋白(MRP)5基因对人肝癌耐药细胞多药耐药性的影响。方法构建人肝癌耐药细胞Hep G2/表柔比星(ADM),合成MRP5-si RNA片段,使用Lipofectamine 2000脂质体转染细胞。实验分3组,si RNA组为Hep G2/ADM转染MRP5-si RNA,耐药组为Hep G2/ADM细胞,普通组为肝癌细胞Hep G2。MTT法检测细胞对化疗药物的敏感性,实时荧光定量RT-PCR检测MRP5基因m RNA相对表达量,Western blot法检测MRP5蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡情况。多组比较采用单因素方差分析,两组间比较采用LSD-t检验或t检验。结果 si RNA组细胞对ADM、氟尿嘧啶(5-FU)和奥沙利铂(OXA)的半抑制浓度(IC50)分别为(0.180±0.008)、(1.657±0.014)、(0.055±0.007)mg/L,耐药组相应为(0.317±0.035)、(3.785±0.523)、(0.129±0.009)mg/L,普通组相应为(0.022±0.008)、(0.163±0.010)、(0.080±0.012)mg/L,耐药组对3种化疗药物的IC50明显高于普通组(t=14.202,11.993,13.937;P<0.05),si RNA组明显低于耐药组(LSD-t=-6.609,-7.044,-11.257;P<0.05)。si RNA组、耐药组、普通组细胞的MRP5 m RNA相对表达量分别为1.377±0.141、3.858±0.481、1.000±0.374,耐药组较普通组明显升高(LSD-t=9.600,P<0.05),si RNA组较耐药组明显降低(LSD-t=-11.669,P<0.05)。si RNA组、耐药组、普通组细胞MRP5蛋白灰度值分别为816、2 245、58,耐药组较普通组明显增强,si RNA组较耐药组明显减弱。si RNA组细胞凋亡率为(25.1±3.7)%,明显高于耐药组的(3.3±0.7)%(t=9.950,P<0.05)。结论 MRP5与人肝癌细胞的多药耐药性相关,si RNA沉默MRP5基因可以上调肝癌细胞对化疗药物的敏感性。

超声吸引刀联合高频电刀与超声刀在肝切除术中的安全性比较

目的比较超声吸引刀(CUSA)联合高频电刀与超声刀在肝切除术中的安全性。方法回顾性分析2011年1月至2014年1月在中山大学孙逸仙纪念医院采用CUSA联合高频电刀或超声刀行肝切除术的102例患者临床资料。根据手术方式将患者分为CUSA联合高频电刀切肝组(CUSA组,53例)和超声刀切肝组(超声刀组,49例)。其中CUSA组中,男32例,女21例;平均年龄(48±11)岁。超声刀组中,男31例,女18例;年龄(49±13)岁。所有患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。患者术中均采用选择性肝门阻断法阻断肝门。观察两组患者选择性肝门阻断时间、术中出血量、术后并发症等临床指标。两组观察指标比较采用t检验或χ2检验。结果 CUSA组选择性肝门阻断时间为(13±2)min,明显短于超声刀组的(23±3)min(t=-19.946,P<0.05)。CUSA组术中出血量为(293±53)ml,明显少于超声刀组的(468±54)ml(t=-16.510,P<0.05)。CUSA组胆漏发生率为4%(2/53),明显低于超声刀组的16%(8/49)(χ2=4.537,P<0.05)。结论与超声刀相比,CUSA联合高频电刀肝切除术中出血量更少,选择性肝门阻断时间更短,胆漏发生率更低,肝切除术的安全性明显提高。

腹腔镜Ⅲb型肝门部胆管癌根治术一例

肝门部胆管癌（Hilar cholangiocarcinoma，HC）又称Klatskin癌，指起源于左右肝管、分叉部和肝总管上段胆管上皮的恶性肿瘤。HC具有表现隐匿、早期诊断困难、局部高度恶性的特点，且辅助治疗手段有限，根治性RO手术切除是可能提高患者生存率的唯一选择。但由于常存在重要脉管的侵犯和胆管黏膜下层的纵向浸润，肝门部胆管癌根治术一直被认为是肝胆外科领域的难点之一。