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改良背主动脉注射法对鸡胚发育与转基因表达效率的影响
1
作者
韦金鱼
韦
茏芹
+6 位作者
徐小明
邢青波
肖艳宇
许梦缘
吴文德
李恭贺
郑喜邦
《中国畜牧杂志》
CAS
北大核心
2021年第2期191-195,共5页
背主动脉注射是生产转基因鸡的经典方法,该方法不需换壳培养,但壳内注射技术难度大,并且无法实时观察后期胚胎发育情况。本实验对背主动脉注射法进行了改进,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)腺相关病毒(Adeno-associated Virus,AAV)壳外注射...
背主动脉注射是生产转基因鸡的经典方法,该方法不需换壳培养,但壳内注射技术难度大,并且无法实时观察后期胚胎发育情况。本实验对背主动脉注射法进行了改进,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)腺相关病毒(Adeno-associated Virus,AAV)壳外注射至150枚HH 14~16期(Hamburger-Hamilton Stage 14~16)鸡胚背主动脉中,再进行换壳培养,继续孵化至出壳,观察和分析改良背主动脉注射法与传统背主动脉注射法和胚盘下腔注射法对发育8、14、18、21 d鸡胚存活率、孵化率以及EGFP阳性检出率的影响。结果表明:改良背主动脉注射组鸡胚存活率均高于传统背主动脉注射组与胚盘下腔注射组(P<0.05或P<0.01);改良背主动脉注射组的鸡胚孵化率(37%)高于传统背主动脉注射组(16%)与胚盘下腔注射组(28%)(P<0.01);荧光蛋白手电筒检测显示,改良背主动脉注射组鸡胚EGFP阳性率(17%)明显高于传统背主动脉注射组(13%)与胚盘下腔注射组(12%)(P<0.01)。综上,背主动脉壳外注射结合换壳培养提高了转基因鸡胚胎孵化率和EGFP阳性检出率,对提高转基因鸡效率具有重要价值。
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关键词
转基因鸡
背主动脉注射
胚盘下腔注射
换壳培养
绿色荧光蛋白
下载PDF
职称材料
犬瘟热核衣壳蛋白原核表达及蛋白纯化
2
作者
周瑶
李连燕
+8 位作者
吴磊
徐闰
刘灵康
韦
茏芹
王鹏霞
韦金鱼
邢青波
徐小明
郑喜邦
《畜牧兽医杂志》
2018年第3期1-5,共5页
犬瘟热病毒(CDV)是一种单链RNA病毒,作为转录因子合成蛋白,共编码六个结构蛋白,其中核衣壳蛋白N(CDV-N)是保守性较强的免疫原性蛋白,在病毒感染时能引起强烈的抗体反应,对于CDV的诊断具有非常重要的价值。本研究的目的是构建CDV-N蛋白...
犬瘟热病毒(CDV)是一种单链RNA病毒,作为转录因子合成蛋白,共编码六个结构蛋白,其中核衣壳蛋白N(CDV-N)是保守性较强的免疫原性蛋白,在病毒感染时能引起强烈的抗体反应,对于CDV的诊断具有非常重要的价值。本研究的目的是构建CDV-N蛋白原核表达载体,利用原核表达技术纯化CDV-N蛋白。利用DNAStar软件预测CDV-N蛋白抗原表位,选择588bp截短体用于原核表达。设计引物,以本实验室保存的pMD18-T-CDV质粒为模板,PCR扩增CDV-N588片段,并将其TA克隆至pMD18-T载体。通过酶切鉴定和DNA测序,从pMD18-T-CDV-N588质粒上切取CDV-N588片段,再将其亚克隆至pET30a原核表达载体,构建重组质粒pET30a-CDV-N588。该重组质粒转化大肠杆菌BL21,ITPG在37℃诱导表达His-CDV-N588融合蛋白,并用SDS-PAGE和Western Blotting加以验证。相同条件下大量增菌诱导,Ni-NTA琼脂糖珠在变性条件下分离纯化His-CDV-N588融合蛋白,再次用SDS-PAGE和Western Blotting进行验证。结果表明:pET30a-CDV-N在大肠杆菌BL21中得到高效表达;SDS-PAGE和Western Blotting检测证实,我们成功纯化了His-CDV-N588融合蛋白。本研究为制备CDV-N588蛋白单克隆抗体和研制胶体金诊断试纸条奠定了基础。
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关键词
犬瘟热病毒
核衣壳蛋白
基因克隆
原核表达
蛋白纯化
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职称材料
题名
改良背主动脉注射法对鸡胚发育与转基因表达效率的影响
1
作者
韦金鱼
韦
茏芹
徐小明
邢青波
肖艳宇
许梦缘
吴文德
李恭贺
郑喜邦
机构
广西大学动物科学技术学院
出处
《中国畜牧杂志》
CAS
北大核心
2021年第2期191-195,共5页
基金
广西自然科学基金(2018GXNSFDA281026)
国家自然科学基金(31660653)
广西科技计划重点研发项目(桂科AB16380098)。
文摘
背主动脉注射是生产转基因鸡的经典方法,该方法不需换壳培养,但壳内注射技术难度大,并且无法实时观察后期胚胎发育情况。本实验对背主动脉注射法进行了改进,将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)腺相关病毒(Adeno-associated Virus,AAV)壳外注射至150枚HH 14~16期(Hamburger-Hamilton Stage 14~16)鸡胚背主动脉中,再进行换壳培养,继续孵化至出壳,观察和分析改良背主动脉注射法与传统背主动脉注射法和胚盘下腔注射法对发育8、14、18、21 d鸡胚存活率、孵化率以及EGFP阳性检出率的影响。结果表明:改良背主动脉注射组鸡胚存活率均高于传统背主动脉注射组与胚盘下腔注射组(P<0.05或P<0.01);改良背主动脉注射组的鸡胚孵化率(37%)高于传统背主动脉注射组(16%)与胚盘下腔注射组(28%)(P<0.01);荧光蛋白手电筒检测显示,改良背主动脉注射组鸡胚EGFP阳性率(17%)明显高于传统背主动脉注射组(13%)与胚盘下腔注射组(12%)(P<0.01)。综上,背主动脉壳外注射结合换壳培养提高了转基因鸡胚胎孵化率和EGFP阳性检出率,对提高转基因鸡效率具有重要价值。
关键词
转基因鸡
背主动脉注射
胚盘下腔注射
换壳培养
绿色荧光蛋白
Keywords
Transgenic chicken
Dorsal aorta injection
Subgerminal cavity injection
Surrogate eggshell culture
Enhanced green fluorescent protein(EGFP)
分类号
S831.2 [农业科学—畜牧学]
下载PDF
职称材料
题名
犬瘟热核衣壳蛋白原核表达及蛋白纯化
2
作者
周瑶
李连燕
吴磊
徐闰
刘灵康
韦
茏芹
王鹏霞
韦金鱼
邢青波
徐小明
郑喜邦
机构
广西大学动物科技学院
广西玉林市动物卫生监督所
出处
《畜牧兽医杂志》
2018年第3期1-5,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31660653)
广西科技计划重点研发项目(桂科AB16380098)
文摘
犬瘟热病毒(CDV)是一种单链RNA病毒,作为转录因子合成蛋白,共编码六个结构蛋白,其中核衣壳蛋白N(CDV-N)是保守性较强的免疫原性蛋白,在病毒感染时能引起强烈的抗体反应,对于CDV的诊断具有非常重要的价值。本研究的目的是构建CDV-N蛋白原核表达载体,利用原核表达技术纯化CDV-N蛋白。利用DNAStar软件预测CDV-N蛋白抗原表位,选择588bp截短体用于原核表达。设计引物,以本实验室保存的pMD18-T-CDV质粒为模板,PCR扩增CDV-N588片段,并将其TA克隆至pMD18-T载体。通过酶切鉴定和DNA测序,从pMD18-T-CDV-N588质粒上切取CDV-N588片段,再将其亚克隆至pET30a原核表达载体,构建重组质粒pET30a-CDV-N588。该重组质粒转化大肠杆菌BL21,ITPG在37℃诱导表达His-CDV-N588融合蛋白,并用SDS-PAGE和Western Blotting加以验证。相同条件下大量增菌诱导,Ni-NTA琼脂糖珠在变性条件下分离纯化His-CDV-N588融合蛋白,再次用SDS-PAGE和Western Blotting进行验证。结果表明:pET30a-CDV-N在大肠杆菌BL21中得到高效表达;SDS-PAGE和Western Blotting检测证实,我们成功纯化了His-CDV-N588融合蛋白。本研究为制备CDV-N588蛋白单克隆抗体和研制胶体金诊断试纸条奠定了基础。
关键词
犬瘟热病毒
核衣壳蛋白
基因克隆
原核表达
蛋白纯化
Keywords
Canine distemper virus
nucleocapsid protein
molecular cloning
prokaryotic expression
protein purification
分类号
S852.655 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
改良背主动脉注射法对鸡胚发育与转基因表达效率的影响
韦金鱼
韦
茏芹
徐小明
邢青波
肖艳宇
许梦缘
吴文德
李恭贺
郑喜邦
《中国畜牧杂志》
CAS
北大核心
2021
0
下载PDF
职称材料
2
犬瘟热核衣壳蛋白原核表达及蛋白纯化
周瑶
李连燕
吴磊
徐闰
刘灵康
韦
茏芹
王鹏霞
韦金鱼
邢青波
徐小明
郑喜邦
《畜牧兽医杂志》
2018
0
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职称材料
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