建立DARQ-LAMP方法快速检测单增李斯特菌

该研究针对单增李斯特氏菌的特异性基因hlyA设计引物,优化反应条件,建立实时荧光环介导等温扩增(realtime loop-mediated isothermal amplification,real-time LAMP)的检测方法,在此基础上,建立检测单增李斯特氏菌的基于淬灭基团释放环介导等温扩增检测方法(detection of amplification by release of quenching-LAMP,DARQ-LAMP),分析其特异性和灵敏度。结果表明,该方法的适宜反应条件为反应温度63℃、Bst DNA 3.0聚合酶0.32 U/μL、淬灭探针双链(quenching probe double chain,QPD)探针浓度10%、Mg2+浓度6 mmol/L;对单增李斯特菌的检测限为7.3×101copies/mL,灵敏度是普通聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的100倍。该方法效率高、特异性好、灵敏度高,为环介导等温扩增技术检测食源性致病菌的研究提供参考。

基于双重DARQ-LAMP方法同时检测单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是快速检测食源性致病菌的常用方法。该文分别针对单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的特异性基因hlyA和nuc设计引物,通过优化反应条件,建立了一种可同时检测单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的基于淬灭基团释放环介导等温扩增检测方法(detection of amplification by release of quenching-LAMP,DARQ-LAMP),并评估了该方法的特异性和灵敏度。结果表明该方法可在60 min内完成对单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的同时检测,检测限分别为7.3×10^(2)copies/mL和2.3×10^(2)copies/mL,特异性良好、灵敏度高,在实际样品检测中检测限为2.8×10^(4)CFU/mL和2.4×10^(4)CFU/mL。该双重DARQ-LAMP方法能同时检测2种食源性致病菌,缩短检测时间,提高了检测效率,为多重LAMP检测食源性致病菌的研究提供了新的思路。

液滴微流控结合核酸扩增技术在食源性致病菌检测中的应用

食源性致病菌是影响食品安全的重要因素,随着生物技术发展及人们对食品安全要求的提高,食源性致病菌的检测方法也不断更新和升级。微流控技术将样品预处理、分离、检测等过程集成在微小的芯片上完成多种功能,而液滴微流控作为其中一个重要的分支,可利用两液体互不相溶特性形成的分散微液滴进行高通量的测试。本文针对核酸扩增方式的不同,比较总结了液滴微流控-数字化聚合酶链式反应、液滴微流控-数字化环介导等温扩增、液滴微流控-数字化重组酶聚合酶扩增检测方法的特点,介绍了其在食源性致病菌检测中的应用,并对该技术的未来发展前景进行了展望。液滴微流控技术结合数字化核酸扩增,可实现对食源性致病菌的智能化、连续化、精准化和微型化的快速检测,本文为其在食源性致病菌快速检测领域的发展提供了参考资料。

哈尔滨中华巴洛克历史风情街的营销现状及创新

哈尔滨中华巴洛克建筑群是我国现存面积最大、保存最完整的巴洛克建筑群.对哈尔滨旅游资源的开发及文化的传承与发展等方面有着十分宝贵的价值,但从景区收入来看,却无法达到与之相匹配的经济效益.通过研究发现,中华巴洛克历史风情街区存在旅游产品单一、基础设施差、营销模式及方式落后等问题,导致景区无法凸显其自身特色,对游客吸引力有限,在同类旅游景区中不具备竞争优势.文章以哈尔滨中华巴洛克历史风情街为例,在了解其目前营销现状的基础上,结合景区的特点和现代旅游市场需求提出创新的营销思路.