盖他病毒研究进展

盖他病毒是披盖病毒科甲病毒属成员的一种单链线形RNA病毒,广泛分布于亚洲及澳大利亚北部的太平洋沿岸地区,其原型株为MM2021。病毒对去氧胆酸盐和氯仿等一些有机溶剂及酸敏感,主要侵害马和猪,易感的细胞系有Vero、BHK-21、C6/36、MA-104、Hmlu和RK-13等。目前,关于盖他病毒的研究还较少,很多机理尚未清楚,其危害程度亦不可预知。因此,论文就盖他病毒的特性做了一些简要总结概括,为建立和完善人畜共患病公共卫生体系和早期预警机制提供一些知识贮备。

人畜共患戊型肝炎的流行病学研究进展

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒引起的一种自限性疾病,既往称肠道传播的非甲非乙型肝炎,临床症状与甲型肝炎极为相似。目前发现5个基因型,而且呈明显的地域性分布,主要分布于亚洲、非洲和中美洲的发展中国家,有流行性和散发性两种形式,其中以流行性为主。该病毒主要以经粪—口途径传播,与人畜关系密切,可引起人和牲畜严重的疾病。对戊型肝炎病毒的流行特点及途径作了一些简要分析,希望能对戊型肝炎的流行、预防研究提供参考。

β-丙内酯对脑心肌炎病毒灭活效果的试验

通过研究β-丙内酯(BPL)对脑心肌炎病毒(EMCV)灭活效果以及优化灭活条件,为制备脑心肌炎诊断试剂和疫苗提供参考依据。用终浓度分别为1∶1 000、1∶2 000、1∶4 000等的β-丙内酯灭活103TCID50滴度猪脑心肌炎病毒,采用4℃灭活4 h、8 h、12 h后37℃2 h,并将灭活后的病毒接种敏感细胞VREO上观察细胞病变(CPE)情况,选择未出现CPE的细胞孔盲传3代后,采用ELISA和PCR的方法观察灭活效果。结果显示:BPL浓度和反应时间与灭活效果存在明显的线性关系,但BPL浓度越高抗原性下降幅度越大,RT-PCR未有扩增,说明BPL可以用于EMCV的灭活,且根据试验结果优选灭活条件为BPL浓度为1:2 000,4℃灭活8h为最佳。结论表明:BPL完全可以用来灭活EMCV,为今后开发灭活疫苗或诊断试剂的生物安全性提供了保证。

乙型脑炎病毒E基因Ⅰ、Ⅱ抗原域片段的克隆与原核表达

根据Genebank公布的乙型脑炎病毒E蛋白基因的序列设计并合成一对特异性引物,以pMD18-T-JEV-E质粒为模板,通过PCR扩增E蛋白抗原Ⅰ、Ⅱ基因片段,所得基因纯化后与PGEX-4T-1同时双酶切并重组构建PGEX-JEV-E12质粒,经过测序确定插入编码框正确后经异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导,观察不同诱导时间、不同IPTG浓度对表达的影响,优化反应条件,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和蛋白免疫印迹进行分析.结果通过测序证明重组质粒正确插入读码框成功,转化至感受态细胞中以包涵体形式表达,37℃时最佳诱导条件的反应条件为IPTG浓度0.6mmol/L,诱导时间为8 h;蛋白免疫印迹显示,重组表达蛋白和单抗、多抗均能进行中和反应,无非特异性表达.表明表达蛋白具有良好的抗原性,为进一步进行分析E蛋白基因结构与功能的关系、研制新型ELISA诊断试剂和开发基因工程疫苗奠定了基础.

未免疫猪乙型脑炎抗体消长规律动态研究

文章旨在了解未免疫猪群乙型脑炎病毒的感染以及抗体消长规律,2008年6月～10月期间选定甘肃省某猪场40头未进行乙型脑炎免疫的猪,分别采集脐带血、15、30、45、60、75、90、120、150日龄血清,采用间接Elisa检测乙型脑炎抗体含量并绘制曲线.结果有效数据32份,抗体总阳性率为96.88%,抗体平均OD值曲线,出现3个波峰和2个波谷.通过分析,3个波峰分别来源于母乳、第一次感染和第二次感染,母源抗体维持时间较短,感染病毒后抗体强度和维持时间逐渐加强.因此在今后应该重视乙型脑炎病毒感染的严重性,加强管理和免疫,不但保护猪群,并且对公共卫生体系的建立也有重要的意义.

猪脑心肌炎病毒RT-PCR检测方法的建立

为了对猪脑心肌炎病毒(EMCV)进行血清学调查和临床检测,试验根据猪脑心肌炎病毒5'端结构蛋白VP2基因序列设计、合成1对特异性引物,建立检测猪脑心肌炎病毒385 bp片段的RT-PCR检测方法。结果表明:该方法对脑心肌炎标准毒株VR-129B(GenBank登录号为X74312)的检测结果为阳性,对标准毒株的细胞培养物检测的敏感度达0.1TCID50;而对猪乙型脑炎病毒、戊型肝炎病毒、猪轮状病毒、猪瘟病毒、口蹄疫病毒的检测结果为阴性。说明该方法特异性强、灵敏性高,可以用于猪脑心肌炎病毒的检测和早期诊断。

脑心肌炎病毒VP1结构蛋白的可溶性表达及鉴定

为获得可溶性表达的脑心肌炎病毒(EMCV)结构蛋白VP1片段,将EMCV VP1基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,并转化大肠杆菌BL21(DE3)表达菌中。采用不同温度、不同IPTG浓度及不同诱导时间诱导目的蛋白表达,以筛选VP1融合蛋白可溶性表达的最佳条件,并通过Western-blotting检测最佳条件下表达蛋白的免疫活性。PCR、酶切鉴定及测序结果表明,VP1基因已克隆入pGEX-4T-1质粒。经优化,确定VP1融合蛋白可溶性表达的最佳条件为:当D600nm值为0.4～0.6时,以0.25mmol/L IPTG于25℃条件下诱导表达12h。Western-blotting结果显示,诱导表达的蛋白具有免疫活性。