1株藏猪源Moraxella pluranimalium的分离鉴定及生物学特性分析

【目的】确定四川省甘孜藏族自治州发病藏猪的病原菌,探究各菌株之间的亲缘关系及耐药性,为对其进行有效防控提供科学依据。【方法】从病死猪肺脏中分离出1株可疑病原菌,通过细菌分离培养、16S rRNA PCR扩增测序、遗传演化分析、药敏试验、耐药基因与23S rRNA突变位点检测、生物被膜试验、小鼠致病试验对分离菌株进行鉴定和分析。【结果】经16S rRNA PCR扩增与遗传进化分析显示,该菌与西班牙菌株CR-18、LG6-7g、AR-5A、GM5-1的核苷酸序列相似性均为100%,并与猪源莫拉菌聚为一个遗传分支,表明该病原菌为Moraxella pluranimalium,命名为KD-4。形态学观察显示该菌为双肾型革兰阴性双球菌。生物被膜试验测定显示,该菌可形成生物被膜,使动物病变痊愈后仍有细菌定植在体内,长期成为该病原菌的宿主。药敏试验结果显示,该菌对抗菌药物复达欣、磺胺异噁唑高度敏感;对盐酸大观霉素、美罗培南中度敏感;对氨苄青霉素、庆大霉素、阿莫西林、头孢噻呋钠、氟苯尼考、四环素、恩诺沙星耐药。其中,复达欣、磺胺异噁唑、盐酸大观霉素和美罗培南对该菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为2、128、64和2μg/mL。耐药基因检测结果显示,ermF、ermB、tetB、tetD、bla TEM、bla CTX-M基因均未检出。23S rRNA序列分析显示,存在A2982T、C3132T等15个突变位点,推测与分离菌株出现多重耐药有关。小鼠致病性试验结果显示,该菌可引起小鼠肺脏出现少量出血点,脾脏明显肿大,但不致死,耐过后可恢复健康。【结论】本研究为国内首次报道藏猪源Moraxella pluranimalium,药敏试验结果可为该菌引起的疾病防治与流行病学调查提供参考依据。